单元过关检测(十) (建议用时：45分钟)

1．(2019·安徽合肥九中测试)由腊梅凝集素基因控制合成的某种蛋白质能与蚜虫肠道黏膜上的受体结合，从而抑制蚜虫吸收营养物质。通过基因工程将腊梅凝集素基因转入烟草，可增强其抗蚜虫的能力。请回答下列问题：

(1)在逆转录酶的作用下，能以腊梅凝集素基因产生的mRNA作为模板按照________原则获得cDNA片段，以获取腊梅凝集素基因片段。为使腊梅凝集素基因在烟草细胞中高效表达，需要把目的基因片段插入表达载体的________和________之间。

(2)将表达载体导入烟草细胞常用的方法是__________，在该过程中需添加酚类物质，目的是________________。将腊梅凝集素基因转入烟草细胞内并成功实现表达的过程，在基因工程中称为________。

(3)将转基因烟草幼苗与非转基因烟草幼苗隔区种植，并接种等量的蚜虫，一定时间后用________法统计蚜虫的种群密度，若__________________________________，则说明转基因烟草具有抗蚜虫能力。

解析：(1)在逆转录酶的作用下，以腊梅凝集素基因产生的mRNA作为模板，按照碱基互补配对原则获得cDNA片段，进而获取腊梅凝集素基因片段。为使腊梅凝集素基因在烟草细胞中高效表达，需要把目的基因片段插入表达载体的启动子和终止子之间。(2)将表达载体导入烟草细胞常用的方法是农杆菌转化法，在该过程中需添加酚类物质，目的是吸引农杆菌感染烟草细胞(因为酚类化合物能够吸引农杆菌向其移动)。将腊梅凝集素基因转入烟草细胞内并成功实现表达的过程，在基因工程中称为转化。(3)蚜虫的活动能力极弱，可采用样方法调查其种群密度。将转基因烟草幼苗与非转基因烟草幼苗隔区种植，并接种等量的蚜虫，一定时间后统计蚜虫的种群密度，若转基因烟草幼苗区内的蚜虫密度低于非转基因烟草幼苗区，则说明转基因烟草具有抗蚜虫能力。

答案：(1)碱基互补配对 启动子 终止子

(2)农杆菌转化法 吸引农杆菌感染烟草细胞 转化

(3)样方 转基因烟草幼苗区内的蚜虫密度低于非转基因烟草幼苗区 2．(2019·北京昌平三中期中)为增加油菜种子的含油量，研究人员尝试将酶D基因与位于叶绿体膜上的转运肽基因相连，导入油菜细胞并获得了转基因油菜品种。回答下列问题：

(1)酶D基因和转运肽基因所含的三种限制酶(Cla Ⅰ、Sac Ⅰ、Xba Ⅰ)的切点如图甲所示，现为获得融合基因，研究人员采用PCR法扩增酶D基因，首先要依据基因的________设计引物，同时从拟南芥基因文库中获取转运肽基因，再用________和________酶处理两个基因后，即可得到________端与________端(填图中字母)相连的融合基因。

(2)将上述融合基因插入图乙所示Ti质粒的T-DNA中，构建________并导入农杆菌中。

将获得的农杆菌接种在含四环素的培养基上，其目的是________________________，再利用液体培养基振荡培养，可以得到用于转化的侵染液。

(3)剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是_______________________，进一步筛选后获得转基因油菜细胞，该细胞通过________________技术，可培育成转基因油菜植株。

解析：(1)研究人员依据基因的碱基序列设计引物，采用PCR法扩增酶D基因，从拟南芥基因文库中获取转运肽基因。在上述引物设计时，分别在引物中加入如图甲所示酶的识别序列，这样可以用ClaⅠ限制酶和DNA连接酶处理两个基因后，得到A、D端相连的融合基因。(2)将上述融合基因插入图乙所示Ti质粒的T-DNA中，构建表达载体即重组质粒并导入农杆菌中。将获得的农杆菌接种在含四环素的固体平板上培养得到含融合基因的农杆菌。(3)剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞；将转基因植物细胞培养成转基因植株需要采用植物组织培养技术。

答案：(1)碱基序列 ClaⅠ DNA连接 A D (2)基因表达载体(或“重组质粒”) 得到含融合基因的农杆菌

(3)利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞 植物组织培养 3．(2019·山东省实验中学一模)某质粒上有SalⅠ、Hind Ⅲ、BamH Ⅰ三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示，请回答下列问题：

(1)抗盐基因是否在烟草细胞中稳定遗传的关键是______________________。

(2)在构建重组质粒时，应选用________和________两种酶对目的基因和质粒进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性。

(3)将目的基因导入植物细胞时采用最多的方法是农杆菌转化法。含有目的基因的农杆菌可根据标记基因进行筛选。若农杆菌在含有氨苄青霉素和四环素的培养基上都可以生长繁殖，农杆菌中是否已含有目的基因？________(填“是”或“否”)。为什么？________________________________________________________________________。

(4)愈伤组织经________形成完整植株，这一过程需要再转接到________培养基上进行培养，该过程的实质是____________________________________________________

________________________________________________________________________。

解析：(1)抗盐基因是否在烟草细胞中稳定遗传的关键是抗盐基因(目的基因)是否插入到烟草的染色体DNA上。

(2)只用SalⅠ酶切割含有目的基因的DNA与质粒，形成相同的黏性末端，容易发生自身连接和反向接入；BamH Ⅰ会破坏目的基因；则在构建重组质粒时，应选用Sal Ⅰ、Hind Ⅲ两种酶对质粒和含抗盐基因的DNA进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性。(3)选用Sal Ⅰ、Hind Ⅲ两种酶对质粒进行切割时，形成的重组质粒中含抗氨苄青霉素基因而抗四环素基因被破坏，故农杆菌中没有含有目的基因，为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，应在培养基中加入氨苄青霉素。(4)愈伤组织经再分化，形成完整植株，这一过程需要再转接到分化培养基上进行培养，细胞分化的实质是选择性表达。

答案：(1)抗盐基因(目的基因)是否插入到烟草的染色体DNA上 (2)Hind Ⅲ SalⅠ

(3)否 含有目的基因的质粒抗四环素的基因被破坏 (4)再分化 分化 基因的选择性表达 4．(2019·东北三省四市模拟)《2018全球癌症统计数据》显示：肺癌、女性乳腺癌、结肠直肠癌已成为全球发病率最高的三种癌症。脂质体是由脂质双分子层构成的闭合球形囊泡，在治疗癌症方面起到一定的作用。回答下列问题：

(1)将抗癌药物包埋于脂质体内，将单克隆抗体连接在脂质体膜上，单克隆抗体可以与癌细胞表面的________结合，用于癌症的靶向治疗。单克隆抗体最广泛的用途是用作____________。

(2)在基因工程中，利用脂质体膜的流动性，将________包埋于脂质体内，从而使外源基因导入受体细胞内。

(3)研究发现：奥曲肽能够抑制癌细胞增殖。如图表示不同浓度的奥曲肽处理组分别培养24 h、48 h、72 h，测定细胞生长情况，计算抑制率。

①由上图结果可知，奥曲肽作用________h抑制效果最显著。奥曲肽对癌细胞的抑制率受____________的影响。

②在培养过程中，癌细胞虽然不具有________的生长特点，但应定期____________，以便清除代谢产物。

③从红豆杉树皮中分离出高抗癌活性的紫杉醇，为实现工厂化生产，可以通过________技术来大量生产抗癌物质——紫杉醇，写出生产过程图：_______________________。

解析：(1)利用抗原—抗体的特异性结合，可以定向、定位找到癌细胞。单克隆抗体最广泛的用途是用作体外诊断试剂，它在多种人类疾病及动植物病害的诊断和病原鉴定中发挥着

重要的作用。由于单克隆抗体纯度高、特性强，所以能准确地识别各种抗原物质的细微差异，具有准确、高效、简易、快速的优点。

(2)基因工程的步骤：目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。因此将基因表达载体包埋于脂质体中，便于利用膜的融合将目的基因导入受体细胞。

(3)①由曲线可知，奥曲肽作用48 h抑制效果最好，且抑制效果跟作用时间和浓度有较大关系。

②癌细胞在适宜条件下能无限增殖，因此不具有接触抑制的现象。培养过程中需要定期更换培养液，以便清除代谢产物，防止代谢产物的积累对细胞自身造成伤害。

③利用植物组织培养技术，能将细胞培养成愈伤组织，再从愈伤组织中提取紫杉醇。过程如下：

离体的红豆杉树皮细胞――→愈伤组织―→提取紫杉醇。

答案：(1)抗原(糖蛋白) 体外诊断试剂 (2)重组DNA(基因表达载体) (3)①48 作用时间和浓度 ②接触抑制 更换培养液 ③植物组织培养 离体的红豆杉树皮细胞――→愈伤组织―→提取紫杉醇 5．(2019·河南信阳高三摸底)如图是胚胎工程技术研究及应用的相关情况，其中供体1是良种荷斯坦高产奶牛，供体2是黄牛。据图回答下列问题：

脱分化

脱分化

(1)应用1为获得克隆牛的过程，从活体牛的卵巢中吸取的卵母细胞需要在体外培养到________期，并通过________去除卵母细胞中的细胞核。最终克隆动物的遗传物质来自________。

(2)应用2为获得试管牛的过程，在________前，需要对采集的优良公牛的精子用________法进行获能处理。胚胎移植是胚胎工程的最后一道工序，胚胎能够在受体内存活的生理基础是________________________________________________________________。