小鼠肠系膜细胞脂肪苏丹Ⅲ染色

实验目的：

取小鼠肠系膜用脂类染料苏丹Ⅲ染色，观察肠系膜血管周围脂肪细胞的形态和分布，理解苏丹Ⅲ脂类染色的基本原理，熟悉脂类染色的操作方法。 实验原理：

脂类细胞化学的主要目的是研究细胞中脂类物质的成分变化以及分布。在动物细胞中，脂肪是动物体主要的储能物质，很多种细胞都含有脂肪。通常，细胞中的脂肪和类脂体混合物以游离的液滴状态悬浮在细胞质中，比如肝细胞。在脂肪含量很高的脂肪细胞中，游离的脂肪液滴可以聚集在一起，占据大部分细胞质空间，将细胞质、细胞核挤到细胞边缘

在小鼠肠系膜毛细血管和淋巴管周围，常有单层白色脂肪细胞（对应棕色脂肪细胞）存在这些脂肪细胞的作用主要是以甘油三酸酯和胆固醇酯的形式储存毛细血管从小肠中吸收的部分脂质，待机体需要时再将贮存的脂肪释放到血液中，在特定组织降解并氧化供能。褐色脂肪细胞由于本身含有大量线粒体，可在脂肪细胞内氧化脂类供能。

细胞中的脂肪不溶于水，易溶于乙醇、氯仿、乙醚等有机溶剂，因此，对脂肪细胞的固定、染色不能使用脂溶剂。脂肪细胞的固定常使用甲醛类固定剂如甲醛钙，染色使用脂溶性染料如苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ和苏丹黑。理想脂溶性染料的溶剂应该仅能溶解染料，不溶解脂肪。 脂类染色最常用的染料是苏丹系列染料，本实验即使用苏丹Ⅲ为脂肪显色。苏丹Ⅲ是一种橙红色偶氮染料，由于其在脂肪中的溶解度高于在乙醇中的溶解度，当用70%乙醇溶解的苏丹Ⅲ饱和溶液浸染脂肪细胞时，苏丹Ⅲ会从70%乙醇中脱离，溶解并集中在脂肪液滴中，使脂肪细胞着色（橘黄色）。以70%乙醇作为苏丹Ⅲ的溶剂可以减少乙醇对脂肪细胞中脂肪液滴的溶解，染色较大的脂肪块。染色的主要过程不涉及化学变化。 材料、试剂：

小鼠，苏丹Ⅲ70%乙醇饱和溶液（室温），70%乙醇，甲醛钙固定液。 实验方法：

将完整展开的小鼠肠系膜连同小肠平铺在载玻片上，以盖玻片盖住肠系膜，剪去多余肠管后，滴加足量甲醛钙固定液固定20min用蒸馏水冲洗玻片肠系膜，除去固定液。以70%乙醇溶液过渡冲洗肠系膜两次，滴加苏丹Ⅲ染液浸染30min，吸出多余染液，镜检观察。 实验结果：

实验结果:左图为肠系膜微血管周围染成橘黄色的脂肪细胞(100×),可以看到脂肪细胞大小不一,多数脂肪细胞呈椭圆形,少数因受挤压或自然呈不规则外形,胞内脂肪滴有一定的透明

度和折光度,受光源条件限制,难以观察到细胞核.右图为高倍镜下的脂肪细胞(400×),,可以看到细胞核为细胞外层的环状结构,受脂肪挤压所致. 实验总结：

由于实验用小白鼠体内脂肪含量存在个体差异，部分小鼠肠系膜血管周围脂肪层较厚，难以观察到清晰的毛细血管和单层脂肪细胞。所以，为保证实验效果，取材时应挑选身材偏瘦和个体偏小的小鼠，所得肠系膜应尽量完全伸展开。根据经验，容易观察到单层脂肪细胞的部位是肠系膜靠近小肠的边缘部分和肠系膜中央血管周围的微血管分支.70%乙醇溶解的苏丹Ⅲ饱和溶液染料浓度有限，染色时应使肠系膜与苏丹Ⅲ染液充分接触，并随时补加染液以使脂肪细胞充分着色。

崔文强 201300140012 2015.3.13