测的是 。

10、在DNA复制时，RNA引物为DNA新链的合成提供了 ，RNA引物由 合成。

11、PCR的基本反应过程包括： 、 、 三个阶段。

12、DNA复制中， 链的合成是 的，合成的方向和复制叉移动方向相同； 链的合成是 的，合成的方向与复制叉方向相反。 13、核酸的组成 、 、 。

14、大肠杆菌RNA聚合酶的核心酶由 、 和两个 组成。 15、RNA聚合酶沿DNA模板 方向移动，RNA合成方向 。

16、蛋白质的合成以 为原料，以 为模板，以 为运载工具，以 为合成场所。

17、基因工程中蓝白斑筛选利用 为诱导物， 为底物产生蓝色。 18、限制性内切酶的主要类型包括 、 、 ，在基因工程中常用的是 限制性内切酶。

19、在DNA复制过程中，催化双莲解开的酶是 。 20、DNA一级结构5’端带有 ，3’端带有 。 21、在DNA复制过程中，改变DNA螺旋程度的酶是 。

22、DNA聚合酶以 为底物，需要 激活，链的延伸方向是 。 23、原核生物的启动子由 和 组成。

24、蛋白质合成中的氨基酸搬运，是由----------------------酶催化生成--------------------。 25、依赖DNA的转录调节因子通常含----------------结构域和----------------结构域。

26、对α鹅膏蕈碱最为敏感的真核生物RNA聚合酶是 ，最不敏感的是 。 27、在色氨酸操纵元中存在 和 两个控制系统。

28、一个完整的基因克隆过程应包括：目的基因的获取， 的选择与改造， 的连接，重组DNA分子导入受体细胞，筛选出含感兴趣基因的重组DNA转化细胞。 29、YAC代表 ，其组成三要素是 、 、 。 30、1 OD260 DNA= ug/mL，1 OD260 RNA= ug/mL。

31、目前DNA序列的手工测定或自动化测定所基于的技术原理为 。

32、限制性内切酶的主要类型包括 、 、 ，在基因工程中常用的是 限制性内切酶。

四、问答题

1、 乳糖操纵子的结构?它是如何进行调控的? 2、简述DNA复制过程中后随链是怎样延伸的？

3、分别说出5种以上RNA的功能？

4、 什么是卫星DNA？组成特点是什么？举一例说明其应用。 5、 真核生物基因表达调控有哪些方面?有哪些检测基因表达的方法? 6、端粒的结构特点及其生物学功能。 7、简述重组DNA操作的基本程序。 8、简述PCR及其反应体系和参数。

9、什么是RNA干扰？在RNA干扰中将长的双链RNA切割成小片段的酶是什么？简要介绍该技术的优点及用途。

10、设有一个基因的5和3端部分序列如下：

ACTGATGCGAGATGCAATGAC………….CTAGTTGAGACCTAGTTC,请设计一对引物，写出其序列，使其扩增产物的5`端加上KpnI（GGTACC），3`端加上XhoI（CTCGAG）位点，以便用于将其插入到某质粒的对应位点。

11、简述构建的载体是否正确常用的方法。 12、什么是核酶？举例两例说明。 13、亲子鉴定的原理和方法。 14、列举基因工程常用的工具酶

15、简述tRNA二级结构的5个臂及其作用 16、简述参与DNA复制起始和引发的蛋白质

17、简述真核、原核生物基因组的差异。

18、简述DNA双螺旋结构的主要特征

19、简述用于高等哺乳动物细胞基因转移的方法

20、何谓限制性核酸内切酶？写出大多数限制性核酸内切酶识别DNA序列的结构特点。 21、简述遗传密码的特点

22、简述DNA聚合酶的共同特点，什么是反义RNA？ 23、真核生物中反义RNA调节基因表达的机理是什么？ 24、简述为实现外源基因在原核生物中高效表达应考虑的因素。 25、简述Sanger酶学（双脱氧终止）测序法的原理 26、简述遗传密码的特点

27、简述真核生物断裂基因的结构，并说明其表达的过程。 28、简述原核生物启动子的序列特征

29、简述原核生物与真核生物mRNA的主要差别。

30、用连续的（CCA）n核苷酸序列合成一段mRNA，放在试管内加入胞浆提取液（含翻译所需的所有组分）及20种氨基酸。反应结果得到由组氨酸、脯氨酸、苏氨酸组成的肽。已知组氨酸和苏氨酸的遗传密码是CAC、ACC，你能否判断出脯氨酸的密码？ 31、拓扑异构酶有何生物学功能

32、简述分子生物学发展过程中证明RNA是遗传物质的实验证明 33、简述为什么需要RNA引物来引发复制 34、简述分子生物学遵循的三大原则。

35、简述真核生物基因表达调控的过程。 36、简述DNA一级结构的特点。

37、简述影响DNA分子热变性Tm值的主要因素。 38、简述参与DNA复制和引发的蛋白质及其作用。 39、简述基因工程操作的基本过程。 40、简述植物转基因技术的基本路线。 41、简述真核生物基因表达调控的环节。 42、简述基因工程创立的关键技术。

43、简述参与DNA复制和引发的蛋白质及其作用。 44、简述真核生物mRNA的转录终止过程。 45、简述大肠杆菌表达外源基因的优势。 46、简述RT-PCR的原理。

47、简述衰减子对基因表达的调控。 48、简述RNA合成的特点

49、简述原核生物启动子的序列特征。 50、简述微卫星重复序列及其应用。 51、简述基因组文库构建的一般步骤。 52、简述PCR技术的基本原理。

53、简述基因工程的酶学基础，最少列举5种常用的酶。 54、简述基因表达载体的构建过程。 55、简述基因工程中目的基因的获取方法。 56、简述cDNA文库构建的一般步骤。 57、什么是RNAi，简述其作用。 58、简述蛋白质的生物合成过程。

59、简述原核生物内源性转录终止的序列特征（不依赖于ρ因子的转录终止）。 60、简述将目的基因导入植物细胞的方法。

61、简述什么是转录因子？以RNA聚合酶II的转录说明转录因子的作用。 62、简述在蛋白质生物合成中各种RNA的作用。 63、简述简述用于筛选和鉴定阳性重组子的方法。

1、论述基因工程基本操作程序（10分）

2、阐述原核生物转录终止的两种主要机制是什么？（10分）

3、假设你需要将一段 cDNA 克隆到表达载体中并转化到大肠杆菌中。cDNA 的两端和载体

上均有 BamHI 的酶切位点，你需要用 BamHI 切割 cDNA 和载体然后将它们连接在一起。下面是实验方法要求的具体步骤：

a. 用 BamHI 处理载体DNA，然后用碱性磷酸酶去除5′端的磷酸基；

b. b. 用BamHI处理cDNA，然后与步骤a中得到的载体DNA混合，加入DNA连接

酶，在适当的条件下使 cDNA 与载体连接；

c. 将步骤b的产物转入大肠杆菌感受态细胞中，培养后均匀涂在含有抗生素的琼脂

培养皿上。因为表达载体中含有抗性基因，能表达抵制抗生素的酶，所以只有含有载体的大肠杆菌才可以在含有抗生素的培养皿上生长，而未被转化的细菌则因受到抗生素的抑制而死掉。你还参照实验手册做了下面四组对照：

对照一、在含有抗生素的培养皿上面涂布未被转化的（即不含有载体的）大肠杆菌感

受态细胞（cells alone）。

对照二、用未被酶切的载体直接转化大肠杆菌感受态细胞，将产物涂布在含有抗生素

的培养皿上面（vector alone）。

对照三、用 BamHI 酶切载体 DNA 后，不用碱性磷酸酶处理，不需要 cDNA，直接加

入 DNA连接酶，然后转化、涂板(Omit phosphatase, omit cDNA)。

对照四、除使用碱性磷酸酶外，其它与对照三相同 (Omit cDNA)。

你一共做了三次实验，在第一次中所有的平板中都长出很多细菌。在第二次实验中所有的平板中都没有长细菌。在第三次实验中你得到了较好的结果，转化成功，具体克隆数见下表：

请回答下列问题：

A. 解释第一次实验失败的原因，并说明对照一的目的是什么；

B. 解释第二次实验失败的原因，并说明对照二的目的是什么；

C. 对照三和对照四的目的是什么？为什么实验手册上建议用碱性磷酸酶处理载体？4、论述核酸是遗传物质的证据 5、论述DNA半保留复制的实验证据

6、论述E.coli和真核表达体系各自的优、缺点。

7、论述Sorthern blotting Western blotting Northern blotting 的实验目的及主要实验步骤

8、论述大肠杆菌乳糖操纵子的调控机制。

9、说明真核生物断裂基因的结构，并论述其转录表达的过程及调控。

10、如何利用基因工程方法在细菌体内表达一段外源DNA序列？论述其操作程序 11、论述原核生物和真核生物基因表达调控的差异。 12、论述论述PCR反应的原理、过程，体系及应用。 13、论述基因工程中目的基因的检测与鉴定方法。 14、论述mRNA转录后的加工过程。

15、论述外源基因在大肠杆菌中高效表达的原理。