点评：注意 DNA 分子的形状，其它条件相同的时候，线状比环状产生的片段要多一个。
选择题问题： 甘油会使许多限制性内切核酸酶的特异性发生改变，是导致一些酶星星活性的主要原因之一，防止的办法是在酶切反应体系中，将甘油的浓度控制在（）以下 参考答案： A 5% 您的答案：
点评：低温下保存生物大分子时，甘油可以作为冰冻保护剂，但反应体系中甘油浓度过高会导致星星活性。
选择题问题： 在下列进行 DNA 部分酶切的条件中，控制哪一项最好（） 参考答案： D 酶量 您的答案：
点评：各种酶都有适合自己的反应温度；同时根据酶反应动力学，酶切反应一定时间后酶的活性就会减弱或丧失，所以控制酶量是最合适的
选择题问题： 下列试剂中，哪一种可以螯合 Ca2＋ 离子（） 参考答案： D EGTA 您的答案：
点评：EDTA 螯合 Mg2+ 等金属离子， EGTA 螯合 Ca2＋ 离子。
选择题问题： DNA 被某种酶切割后，电泳得到的电泳带有些扩散，下列原因中，哪一项不太可能（） 参考答案： C 酶失活 您的答案：
点评：理解限制性内切酶酶切本质和 DNA 电泳实验原理。 选择题问题： nick 与 gap 的区别在于（）
参考答案： A 前者是断开了一个磷酸二酯键，后者是指 DNA 的单链中有较小的缺失 您的答案：
点评：注意理解专业词汇。
选择题问题： 可以在切口部位起作用的酶是（） 参考答案： B S1 核酸酶 您的答案：
点评：BAL31 核酸酶主要活性为 3' 外切核酸酶活性，可以从线性 DNA 两条链的 3' 端去掉单核苷酸； S1 核酸酶可降解单链 DNA 或 RNA ，产生带 5' 磷酸的单核苷酸或寡核苷酸，中等浓度可在切口或小缺口处切割双链；核糖核酸酶 A 可以特异攻击 RNA 上的嘧啶残基的 3' 端，可除去 DNA:RNA 中未杂交的 RNA 区； λ 外切核酸酶可以作用于 dsDNA ，持续逐一释放5’单核苷酸。 选择题问题： Klenow 酶与 DNA 聚合酶相比，前者丧失了（）活性 参考答案： A 5'--3' 外切酶 您的答案：
点评：Klenow DNA 聚合酶是 E.coli DNA polymerase 经蛋白酶（枯草杆菌蛋白酶）裂解而从全酶中除去 5'--3' 外切活性的多肽大片段，而聚合活性和 3'--5' 外切活性不受影响。
选择题问题： 限制酶的命名遵循一定的原则，涉及来源（宿主），菌株或生物型。命名时（） 参考答案： A 属名第一字母，种名头两个字母，菌株号，然后再加上序号（罗马字） 您的答案：
点评：限制酶的命名遵循一定的原则，涉及来源（宿主），菌株或生物型。命名时，依次取属名第一字母，种名头两个字母，菌株号，然后再加上序号（罗马字） 选择题问题： 以下对同裂酶的描述中，哪一项是正确的（） 参考答案： A 识别相同序列的限制酶称同裂酶 您的答案：
点评：识别相同序列的限制酶称同裂酶，但它们的切割位点可能不同。具体可分为：同裂同切酶、同序异切酶、“同功多位”等
选择题问题： 下列 DNA 聚合酶中，哪一种酶只切割双链 DNA 中的一条链，产生单链切口，即切口酶（）
参考答案： A DnaseⅠ 您的答案：
点评：在 Mg2+ 存在下，独立作用于每条 DNA 链，且切割位点随机。在 Mn2+ 存在下，它可在两条链的大致同一位置切割 dsDNA ，产生平端或 1～2 个核苷酸突出的 DNA 片段； Klenow DNA 聚合酶是 E.coli DNA polymerase 经蛋白酶（枯草杆菌蛋白酶）裂解而从全酶中除去 5'--3' 外切活性的多肽大片段，而聚合活性和 3'--5' 外切活性不受影响； T4 噬菌体 DNA 聚合酶与 Klenow DNA 聚合酶相似，但 3'--5' 外切活性强 200 倍，且不从单链 DNA 模板上替换引物； T7 噬菌体 DNA 聚合酶的活性功能与 T4 噬菌体 DNA 聚合酶和 Klenow DNA 聚合酶类似，但 3'--5' 外切活性为 Klenow 的 1000 倍。
选择题问题： BAP 与 CIAP 的区别在于（）
参考答案： B CIAP 68℃ 时失活，而 BAP 68℃ 稳定 您的答案：
点评：CIAP 来源于牛小肠碱性磷酸酶，而 BAP 来自细菌的碱性磷酸酶。 BAP 抗性强、抗高温和去除污剂。 CIAP 可用蛋白酶 K 消化灭活，或在 5mM EDTA 下。 65℃ 或 75℃ 处理 10 分钟，然后用酚、氯仿抽提，纯化去磷酸化的 DNA ，从而除去 CIAP 的活性。 选择题问题： 下列哪一种酶作用时需要引物（） 参考答案： B 反转录酶 您的答案：
点评：其它三种酶均只需要 DNA 链即可
选择题问题： CIAP 催化脱磷酸时有两种最适温度， 37℃ 和 56℃ ，二种温度分别适用于（）端脱磷酸
参考答案： A 5' 突出端；平末端和突出的 3' 端 您的答案：
点评：3' 端突出时，磷酸基团是内陷的，需要激烈一点的反应条件。
选择题问题： 关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下述描述中只有（）不恰当 参考答案： D 这一系统的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶 您的答案： 点评：根据酶的亚单位组成、识别序列的种类和是否需要辅助因子，限制与修饰系统至少可分为四类：Ⅱ型、Ⅱs型、Ⅰ型、Ⅲ型
选择题问题： 限制性内切核酸酶可以特异性地识别（） 参考答案： C 双链 DNA 的特定碱基序列 您的答案：
点评：了解限制性内切酶的识别序列。 选择题问题： 以下为同尾酶的是（） 参考答案： B BamHⅠ,Sau3AⅠ,StyⅠ 您的答案：
点评：所谓同尾酶即他们可以产生相同的粘性突出末端。其中 B 选项中 BamHⅠ 识别位点为 G↓GATCC ， Sau3AⅠ 识别位点为 ↓GATC ， StyⅠ 识别位点为 CC↓WWGG 。（W=AorT） 选择题问题： 在长模板链的指导下引物延伸合成长的 DNA 互补链时应选用（） 参考答案： B T7 DNA 聚合酶
您的答案：
点评：T7 DNA 聚合酶是所有 DNA 聚合酶中持续合成能力最强的一个
选择题问题： 在大肠杆菌中，大多数都有三个位点特异性的 DNA 甲基化酶，以下选项中哪一种酶不包括在内（）
参考答案： D SssⅠ 您的答案：
点评：SssⅠ甲基化酶来自原核生物 Spiroplasma
选择题问题： 在大肠杆菌中，至少有 3 种依赖于甲基化的限制系统，以下选项中不属于这 3 种的为（）
参考答案： C mcrD 您的答案： 点评：无 mcrD
选择题问题： 以下几种核酸酶中，不能用于嵌套缺失的为（） 参考答案： B S1 核酸酶 您的答案：
点评：S1 核酸酶可降解单链 DNA 或 RNA ，酶浓度大时可完全消化双链，中等浓度可在切口或小缺口处切割双链。
选择题问题： 下面有关限制酶的叙述哪个是错误的（） 参考答案： A 限制酶是外切酶而不是内切酶 您的答案：
点评：了解限制性内切酶的特性。
选择题问题： 在下列酶中，催化反应不需要 ATP 的是（） 参考答案： D BamHⅠ 您的答案： 点评：Ⅰ 型和 Ⅲ 型限制性内切酶在发生限制作用时需要 ATP ， Ⅱ 型则不需要，而 BamHⅠ 为 Ⅱ 型限制性内切酶，在催化反应时不需要 ATP
选择题问题： DNA 连接酶在体内的主要作用是在 DNA 复制、修复中封闭缺口，下列对 DNA 连接酶的描述中，那项是正确的（）
参考答案： A 将双链 DNA 分子中的 5' 磷酸基团同 3'－OH 末端重新形成磷酸二酯键 您的答案：
点评：了解 DNA 连接酶的特性。
选择题问题： 下列酶中，除（）外都具有磷酸酶的活性 参考答案： A BamHⅠ 您的答案：
点评：磷酸酶活性包括磷酸化活性和去磷酸化活性。 您做对了0个 您的答案： 您的答案：
第三章 分子克隆载体
您的答案： 您的答案：
填空题问题： Gene cloning 是指（），基因文库（Gene library）是指（）。
参考答案： 利用重组DNA技术分离目的基因；由大量的含有基因DNA（即某一生物的全部DNA顺序）的不同DNA片段的克隆所构成的群体
您的答案：
填空题问题： Plasmid 的定义是（）， Plasmid 能进行自我复制，大多数为（）链（）状 DNA 分子，大小一般为（）kb。
参考答案： 染色体外的遗传因子；双；闭环；1～200 您的答案：
填空题问题： （）即为质粒的拷贝数，按照质粒拷贝数的多少，质粒可以分为（）和（），（）质粒多数是一些具有转移能力的大质粒；（）质粒多数是一些不具有转移能力的小质粒。 参考答案： 单个细胞中所含有的质粒 DNA 分子数目；严谨型；松弛型；严谨型；松弛型 您的答案：
填空题问题： 松弛型质粒和严谨型质粒融合以后，杂合质粒一般优先使用（）的复制子。 参考答案： 松弛型 您的答案：
填空题问题： （）称之为质粒的不相容性。如果两个质粒不能稳定地共存于同一个寄主细胞中，则它们属于（）（填相同或不同）的不相容群。
参考答案： 两个质粒在同一宿主中不能共存的现象；相同 您的答案：
填空题问题： 质粒具有转移性，它是指（），它需要（），（）和（） 参考答案： 在自然条件下，很多质粒可以通过称为细菌接合的作用转移到新宿主内；移动基因 mob ；转移基因 tra ；转移起始位点 您的答案：
填空题问题： 根据质粒的转移性可以将质粒分为（）和（），一般大质粒都是（），（）一般都是小质粒，其上没有（）
参考答案： 接合型质粒；非接合型质粒；接合型质粒；非接合型质粒；编码其 DNA 转移的基因 您的答案：
填空题问题： 按其用途可将标记基因分为选择标记和筛选标记，选择标记一般用于（），筛选标记一般用于（）
参考答案： 鉴别目的 DNA（载体）的存在；将特殊表型的重组子挑选出来 您的答案：
填空题问题： 常用的用来鉴定重组质粒的细菌菌落的方法有（），（），（）等。 参考答案： α－互补；插入失活；原位杂交 您的答案：
填空题问题： pBR322质粒是基因工程最重要的人工质粒之一，它的大小约为（）kb，用于其组建的三个亲本质粒是（）, （）,和（）。此质粒具有一个colE1松弛型质粒复制子，两个筛选标记氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因，其中colE1松弛型质粒复制子来源于（），氨苄青霉素抗性基因来源于（），四环素抗性基因来源于（）
参考答案： 4.3；pM131；pSC101；pSF2124；pM131；pSF2124；pSC101 您的答案：
填空题问题： pUC 系列的质粒载体是由（）和（）两种质粒构建而来的，其中氨苄青霉素抗性基因来自于（），多克隆位点 MCS 来自于（）。 pUC 系列的质粒载体一般是成对存在的如 pUC18 和 pUC19 ，其主要区别是（）。
参考答案： pBR322；M13mp18/19；pBR322；M13mp18/19；MCS 方向不同 您的答案：
填空题问题： 质粒载体的附加功能要素主要有（），（），（）等。 参考答案： α－互补；ssDNA phage origin，promotor