第一章 绪论

填空题问题： 基因操作（Gene manipulation）的核心部分是基因克隆（gene cloning）， gene cloning 的基本要点有（），（）和（）。

参考答案： 克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择 您的答案：

填空题问题： （）是遗传物质的基本单位,也是作为遗传物质的核酸分子上的一段片段。它可以是连续的，也可以是（）；可以是（），也可以是RNA；可以存在于染色体上，也可以（） 参考答案： 基因；连续；DNA；存在于染色体之外（如质粒，噬菌体等） 您的答案：

填空题问题： 基因操作并不是一个法律概念，除了包括基因克隆外，还包括基因的（）、（）、（）和（）等与基因研究相关的内容。 参考答案： 表达；调控；检测；改造 您的答案：

填空题问题： 启动子（Promotor）是指（）。通常一个 Gene 是否表达，（）是关键的一步，是起决定作用的。在转录过程中，Promoter还是（）的结合位点。

参考答案： 基因转录过程中控制起始的部位；转录起始；RNA 聚合酶 您的答案：

填空题问题： 原核生物的 RNA polymerase 主要由两部分组成：（）和（），其中σ-因子并不参与 RNA 的合成，它的作用主要是（）。

参考答案： 核心酶 ；σ因子；识别要转录的起始位点 您的答案：

填空题问题： 从（）到（）的这一段距离称为一个转录单位，或者一个转录产物，其中可包括一个或者多个 Gene 。

参考答案： 启动区；终止区 您的答案：

填空题问题： 转录终止子主要有两种，一种是（），另一种是（）。 参考答案： 依赖ρ因子；不依赖ρ因子 您的答案：

填空题问题： Gene 的书写方式，通常是写出的 DNA 序列总是与（）相同的那条链，方向是从（）到（）。对于碱基的位置，一般自转录起始点向两个方向编号，其中转录起始点定为（），（）定为 -1 。

参考答案： mRNA；5'；3'；+1；在起始点上游第一个碱基 您的答案：

填空题问题： 重叠基因（Overlapping gene）是指（），间隔基因（Interrupted gene）是指（） 参考答案： 一个基因的序列中，单个 DNA 序列可编码一个以上的蛋白质；在编码序列中间插入的一段无编码作用的碱基序列 您的答案：

第二章 分子克隆工具酶

填空题问题： Ecok 的一般分子组成为 R2M2S ，在这些亚基中， R 亚基具有（）的作用， M 亚基具有（）的作用， S 亚基具有（）的作用，当该该酶发生作用时，需用到的辅因子有：（）、（）、（）。

参考答案： 限制酶；甲基化；识别 DNA 序列；ATP；SAM；Mg2+ 您的答案：

填空题问题： 限制性内切核酸酶（Restriction endonuclease）的命名是按属名和种名相结合的原则的，通常第一个大写字母取自（），第二、三个字母取自（），第四个字母则用（）表示。 参考答案： 属名的第一个字母；种名的前两个字母；菌株名 您的答案： 填空题问题： Ⅱ型限制酶识别回文对称序列，在回文序列（）或（）切割 DNA ，产生带 3'－OH和 5'－P 基团的 DNA 的产物，需（）的存在才能发挥活性，相应的修饰酶只需 SAM 。 参考答案： 内部；附近；Mg2＋ 您的答案：

填空题问题： 从因特网上可以找到限制酶的数据库（），该网站由 New England Biolabs 公司维护（http://www.neb.com）。 参考答案： REBASE 您的答案：

填空题问题： 识别相同序列的限制酶称（） 参考答案： 同裂酶 您的答案：

填空题问题： Ⅰ-CeuI 酶是衣滴虫叶绿体大 rRNA 基因的内含子编码的产物，识别位点为（）bp，识别的核心部位为（）至（）位置的 19bp ，反应温度为 37℃ 。 参考答案： 26；-12；+7 您的答案：

填空题问题： 位点偏爱是指：（）

参考答案： 限制酶对不同位置的同一个识别序列表现出不同的切割效率 您的答案：

填空题问题： 1 单位 NaeⅠ 或 NarⅠ 的定义：（）

参考答案： 切割 1μg 腺病毒 2 DNA 在 50ul 体系中 1 小时所需的酶量 您的答案：

填空题问题： 有些限制酶只切割双链 DNA 中的一条链，产生单链缺口，即（） 参考答案： 切口酶 您的答案：

填空题问题： 个体间 DNA 限制性片段长度的差异叫（） 参考答案： 限制性片段长度多态性（RFLP） 您的答案：

填空题问题： DNA 载体经 HindⅢ 切割后产生粘性末端，能发生载体自连，影响载体与外源 DNA 的连接效率，常用的防止载体自连的方法有（）、（）。 参考答案： 去磷酸化；部分补平 您的答案：

填空题问题： 完全的回文序列应具备两个特点即（）和（）。

参考答案： 能够在中间划一个对称轴，两侧的序列两两对称互补配对；两条互补链的 5'--3' 的序列组成相同，即将一条链旋转 180°，则两条链重叠 您的答案：

填空题问题： Dcm Methylase（Dcm 甲基化酶）的识别序列为（）和（），该酶的作用位点为（）。 参考答案： CCTGG；CCAGG；第二个胞嘧啶 C 的 C5 位置 您的答案：

填空题问题： 大肠杆菌中至少有三种依赖于甲基化的限制系统（）、（）、（）。它们识别的序列各不相同，但只识别经过甲基化的序列，都限制 CpG 甲基化酶作用的 DNA 。

参考答案： mcrA；mcrBC；mrr 您的答案： 填空题问题： 分别写出以下限制性内切核酸酶（Restriction endonuclease）的识别序列 EcoRⅠ（）、Sau3AⅠ（）、HindⅢ（）。

参考答案： GAATTC；GATC；AAGCTT 您的答案：

填空题问题： Weiss 单位的定义为（）

参考答案： 在 37℃ 下 20 分钟内催化 1nmol32P 从焦磷酸根置换到[γ,β－32P]ATP 所需的酶量 您的答案：

填空题问题： 限制性内切核酸酶（Restriction endonuclease）通常保存在（）浓度的甘油溶液中。 参考答案： 50% 您的答案： 填空题问题： 载体和外源 DNA 经酶切，在进行下一步操作前，需消除限制性内切核酸酶（Restriction endonuclease）的影响。常用的方法有（）、（）、（）、（）。 参考答案： EDTA 法；加热法；苯酚抽提法；试剂盒除酶法 您的答案：

填空题问题： 对 DNA 进行双酶切时，酶切缓冲液的选择原则有(1) （）、(2) （）、(3) （） 参考答案： 可选用都合适的缓冲液或通用缓冲液；若缓冲液不可替代则先用低浓度的，再加适量 NaCl 和第二种酶；先用低盐缓冲液再用高盐缓冲液 您的答案：

填空题问题： DnaseⅠ为内切核酸酶，在不同的辅因子条件下，产生不同的酶切效果，当 Mg2+ 存在时（）；当 Mn2+ 存在时（）。

参考答案： 独立作用于每条 DNA 链，且切割位点随机；可在两条链的大致同一位置切割 dsDNA ，产生平端或 1 到 2 个核甘酸突出的 DNA 片断 您的答案：

填空题问题： Klenow DNA 聚合酶是 E.coli DNA polymerase 经蛋白酶裂解而从全酶中除去（）活性的多肽大片断，而其他活性保持不变。 参考答案： 5'--3' 的外切活性 您的答案： 填空题问题： T4 phage DNA polymerase 分子量为（）kDa，该酶的 3'--5' 的外切活性比 Klenow 酶强（）倍，由于它不从单链 DNA 模板上替换引物，故可用于（）。 参考答案： 114；200；提高诱变反应 您的答案：

填空题问题： 反转录酶来自 AMV 或 Mo－MLV ，即依赖于 RNA 的 DNA 聚合酶，它有（）活性，但无（）活性。

参考答案： 5'--3' 合成 DNA 的；3'--5' 的外切 您的答案：

填空题问题： 末端转移酶来源于（），是存在于前淋巴细胞及分化早期的类淋巴样细胞内的一种不寻常的 DNA 聚合酶，在（）存在下，末端转移酶催化 dNTP 加于 DNA 分子的 3' 羟基端。 参考答案： 小牛胸腺；Mg2＋ 您的答案：

填空题问题： T4 DNA 连接酶的分子量为 68kDa ，它可以催化 DNA 5' 磷酸基与 3' 羟基之间形成磷酸二酯键。反应底物为粘端、切口、平端的 RNA 或 DNA 。低浓度（）和（）可以提高平端连接效率。

参考答案： 聚乙二醇 PEG；单价阳离子 您的答案：

填空题问题： E.coli DNA 连接酶与 T4 DNA 连接酶相似，但需（）的参与，且其平端连接效率低常用于置换合成法。

参考答案： 烟酰胺－腺嘌呤二核苷酸（NAD＋） 您的答案：

填空题问题： T4 多核苷酸激酶在高浓度的 ATP 时发挥最佳活性，（）是其强烈抑制剂。 参考答案： NH4＋ 您的答案：

填空题问题： BAL31 核酸酶主要活性为 3' 外切核酸酶活性，可从线性 DNA 两条链的 3' 端去除掉单核苷酸；还可从内部切割核酸，作用于单链。 BAL31 发生作用依赖（），（）可抑制其活性。 参考答案： Ca2＋；EGTA 您的答案：

填空题问题： 绿豆核酸酶来源于绿豆芽，与 S1 酶相似，但比 S1 酶更温和，在（）上才切割，可使 DNA 突出端变成平端。 参考答案： 大切口 您的答案：

填空题问题： 核糖核酸酶 A 来源于牛胰，为内切核酸酶，可特异攻击（）。可除去 DNA:RNA中未杂交的 RNA 区，可用来确定 DNA 或 RNA 中单碱基突变的位置。 参考答案： RNA 上嘧啶残基的 3' 端 您的答案：

填空题问题： 用于构建嵌套缺失体常用到的核酸酶有（）、（）、（）。 参考答案： DnaseⅠ；外切核酸酶Ⅲ；BAL31 您的答案：

填空题问题： 琼脂糖酶作用于低熔点琼脂糖，它的活性是可切割琼脂糖酶亚单位。由于此酶可分解琼脂糖，因此应用于（）。 参考答案： 分离大片段 DNA 您的答案：

选择题问题： 限制性内切酶一般保存在（）浓度的甘油溶液中。 参考答案： C 50% 您的答案：

点评：合适浓度的甘油和二甲基亚砜可以作为冰冻保护剂，保护生物大分子的活性。 选择题问题： 限制性图谱与限制性片段长度多态性（RFLP）图谱的最显著区别在于（） 参考答案： A 前者是物理图谱后者是连锁图 您的答案：

点评：详细理解两者的概念

选择题问题： 迄今为止所发现的限制性内切核酸酶可以作用于（） 参考答案： C 只能作用于双链 DNA 您的答案：

点评：限制性内切核酸酶的识别和切割序列有很强的特异性，特别是第 Ⅱ 型的限制性内切酶。 选择题问题： 已知某一内切酶在一个环状 DNA 上有 4 个切点，当用此酶切割该环状 DNA ，可以得到（）个片段 参考答案： B 4 您的答案：