提取方式对白芷中欧前胡素的提取效率有较大影响。邓晓华[15]等人选用回流法提取兴安白芷中的总香豆素。采用正交试验法,以乙醇浸膏得率及总香豆素含量为考察指标,对乙醇浓度、回流时间、溶媒用量、提取次数4个影响因素进行研究,发现影响兴安白芷茎中总香豆素得率的最主要因素是乙醇浓度。曹艳霞[16]将白芷粗粉过50日筛，用70％乙醇回流提取lh，回流3次，合并提取液，考查乙醇浓度、提取次数、时间和溶媒量对香豆素溶出的影响并优选出了的最佳工荨条件为12倍量的70％,1h. 4.3 渗漉法

渗漉法由于随时保持相当的浓度差，故提取效率较高，浸出液较澄清，但溶剂消耗量大，费时长，操作仍嫌麻烦。而渗漉法除了具有操作简便、提取率高的优点以外,更重要的是,它可以避免香豆素成分受热损失。

陈贤春等[17]使用正交实验,优选了渗漉法进行提取，得到提取的最佳工艺。袁瑜[18]以白芷总香豆素的含量为评价指标,对白芷香豆素类化合物进行渗漉提取,提取总香豆素含量高达10.144mg/g,得到渗漉法提取白芷香豆素可行。郑翠英[19]在相同条件下将白芷粗粉进行乙醇回流提取,乙醇超声,用乙醇浸泡进行渗滤提取,测定提取液的含量,在上述条件下,欧前胡素的转移率分别为84.94%、80.62%、92.66%,以渗滤法提取率最高。何芳辉[20]将白芷用70%乙醇渗漉,渗漉液回收至无醇味,加水定容至1000ml作为上柱液 4.4 超声波提取

利用超声波的空化作用和附加作用，使细胞壁破碎，加速白芷有效成分的溶出。 使用乙醚进行超声提取，可获得很好的提取效果[21]。谢瑛[22]采用正交实验设计，以白芷中水合氧化前胡素为试验指标，通过考察提取溶剂（乙醇）浓度、固液比和提取时间等参数，确定乙醇超声提取白芷中香豆素类成分的最佳工艺条件。郑旭光[23]也采用超声提取出了总香豆素类成分.王博[24]在制作样品时,对白芷进行丙酮超声,乙醇回流,乙醇浸渍提取效率的研究.

5 白芷的质量检识

香豆素含量测定的主要方法有分光光度法、高效液相色谱法(HPLC)、气相-质谱联用法、薄层色谱法等 5.1 分光光度法

利用物质的分子对光的选择性吸收而进行的分析测量方法称为吸光光度法，或称分光光度法。根据物质在一定条件下对某特定波长的光的吸收程度进行定量分析，根据物质对不同波长的光的吸收特征进行定性分析或结构测定。吸光光度法主要指可见光度法和紫外光度法[25]。香豆素是具有苯并－α－吡喃酮结构骨架的一类化合物，可以看作顺式邻羟基桂皮酸脱水而形成的内酯，香豆素的紫外光谱与其所含取代基种类数目和位子有关。母体香豆素的紫外光谱呈二个主要吸收带，λmax275（4.03）及λmax312（3.72）。香豆素分子中引入羟基、甲基及烷基等取代基，一般可使紫外吸收带向长波移动，相同位置的取代基对紫外吸收的影响与其定位效应一致，其次序为羟基>甲氧基>甲基>乙酰甲基[26].

白芷所主要含香豆素成分，包括欧前胡素、异欧前胡素、氧化前胡素，它们均为苯系衍生物，在紫外光区254nm附近均有吸收峰。但是，由于取代基团的差异，导致其紫外最大吸收波长出现差异，但均在254nm附近具有较宽的吸收谱带[27]。由于白芷总香豆素成分的差异，导致样品的紫外吸收峰形极不规则，

测定结果不准确，重复性较差。

邓晓华等人[15]在343nm处有最大吸收,故选用343nm作为测定总香豆素含量的紫外检测波长。按分光光度法以第一管做空白,以甲醇溶液作空白对照,在343nm处分别测定各标准溶液的吸光度。以吸光度为纵坐标,对照品浓度为横坐标,绘制标准曲线,并进行线性回归分析,得到如下线性回归方程:Y=0.0565+19.28X,R2=0.9996,表明总香豆素含量与吸光度呈良好的线性关系。袁瑜[18]等用分光光度法测定白芷中总香豆素的含量，以浓度(C)为横坐标,吸光度(A)为纵坐标作图,得回归方程:A=47. 4C+0. 017(r=0. 999 7,n=5)。结果表明,欧前胡素对照品溶液浓度在5. 22~15. 66μg/ml的浓度范围内具有良好的线性关系。何芳辉[20]以异欧前胡素为对照品，紫外-分光光度法项下操作于311nm处测定,标准曲线方程为Y= 0. 060 3X- 0. 035 1,R=0. 999 0。

3.2 高效液相法

通常应用高效液相色谱(HPLC)法，测定白芷提取物中单一成分，或同时测定欧前胡素和异欧前胡素两种成分，或欧前胡素、氧化前胡素和异欧前胡素三种成分的含量，来控制白芷香豆素提取物的质量[28-29]。

华杰[30]采用HPLC法测定不同产地白芷饮片中欧前胡素和异欧前胡素的含量。欧前胡素在0.0552~0.276Ug范围内线性关系良好,平均加样回收率为 99.5%,RSD为1.3%;异欧前胡素在 0.048~ 0.24Ug范围内线性关系良好,平均加样回收率为98.6%,RSD为1.7%。不同产地的白芷饮片中欧前胡素含量在0.046%~0.145%之间,异欧前胡素在0.038%~0.087% 之间,两者之和在0.084%~ 0.232%之间,不同产地白芷饮片中欧前胡素和异欧前胡素的含量存在差异。含量测定方法准确、快速、重复性好,适用于白芷及其制剂的质量控制.樊萍[31]建立以高效液相色谱法测定白芷酊中欧前胡素含量的方法,欧前胡素检测浓度在10.00～100.00μg/mL范围内与峰面积积分值呈良好线性关系（r＝0.9903）；平均回收率为100.36％,RSD＝0.25％（n＝9）。本方法简便、快捷、专属性强、灵敏度高、重现性好，可用于白芷酊的质量控制

谢瑛[32]按高效液相色谱法规定进行试验，第一次同时测定了白芷总香豆素有效部位中花椒毒酚、奥斯生诺、欧前胡素、水合氧化前胡素及白当归素的含量。表明花椒毒酚、奥斯生诺、欧前胡素、水合氧化前胡素、白当归素在2.00~100.00μg/ml浓度范围内具有良好的线性关系。贾敏如等[33]采用HPLC法，甲醇－水(70∶30)为流动相，检测波长254nm测得欧前胡素在0.974－3.896μg范围内线性关系良好，异欧前胡素在0.360－2.640μg范围内线性关系良好，精密度及加样回收率良好。结果表明该方法准确、迅速、重复性好，可用于白芷药材的质量控制。张慧等[34]人采用高效液相色谱法 ( HPLC)同时测定不同产地白芷中欧前胡素和异欧前胡素的含量, 为更好的评价不同产地白芷的质量提供依据，谱柱: Lichrospher C18 ( 250 4 . 6 mm, 5 m ), 柱温: 30 , 流动相: 甲醇 -水, 梯度洗脱,流速为 1 . 0 mL/m i n，前胡素、 异欧前胡素进样量分别在 0.54~ 5.40 g、0.244~ 2.44 g范围内, 呈现良好的线性关系。欧前胡素平均回收率 99 .020%, 相对标准偏差(RSD)3.318%;异欧前胡素平均回收率97 . 528%, RSD 2.904 %。欧前胡素平均含量为 1 . 465 m g/g;异欧前胡素平均含量为 0 . 575 m g/g，测定方法简单, 快速,重现性好, 可作为该药材质量的控制方法。 3.3 毛细管电泳法

毛细管电色泳CEC)技术是一种综合LC和CE两者优点的分离技术，它通过

电渗流驱动流动相使中性和带电荷的样品分子根据它们在色谱同定相和流动相间吸附、分配平衡常数的不同以及电泳速率的不同达到分离分析。在双重分离机制的作用下，被分离样品细微之处的分辨能力得到极大的加强，所以CEC尤其适用于复杂样品及复杂化学体系的分离分析，这项新兴的微分离技术也代表了分析化学界高效微分离的趋势。毛细管柱是CEC分离分析的核心，整体柱由于内部结构均匀，通透性、重现性好，柱效高，固定相表面易于改性，无需制备塞子和可进行快速分离等优点，近几年发展迅速。甲基丙烯酸酯类整体柱由于制备方法简单而被广泛使用。

范国荣[35]等以丁基甲基丙烯酸酯(BMA)和亚乙基二甲基丙烯酸酯(EDMA)为单体制备毛细管整体柱，在7 min内完成对白芷中的欧前胡素、异欧前胡素和欧香芹素及发卡二醇的快速分离分析，从而完善了白芷的质量标准研究,并对18个产地的白芷药材中这几种主要活性成分的含量进行了测定，分析方法快速、耐用、可靠。曾承辉[36]建立毛细管电泳法同时测定白芷药材中欧前胡素和异欧前胡素含量的方法,以盐酸小檗碱为内标，欧前胡素，异欧前胡素的线性范围分别为8.0-40.0ug/mL(r=0.9987)、4.0-20.0 ug/mL(r=0.9990);白芷中欧前胡素的平均回收率为100.0%，方法精密度（RSD）为2.83%（N=6）,异欧前胡素平均回收率为100.1%，方法精密度（RSD）为3.07%（N=6）,该法简单、快速、准确可靠，可用于白芷药材的质量控制研究。

3.4 薄层色谱

任艳春[37]用照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI)进行扫描,波长S=310nm,R=360nm测吸收度积分值，测得每1g中欧前胡素的含量为0.86mg,平均回收率为97.92%,RSD=2.46%(n=6),回归方程Y=4356.21X+431.3, r=0.9994,RSD=2.34%,线性范围0.5~2.5ug。该实验方法稳定,重现性好,可用于测定药材白芷中欧前胡素的含量. 王希等[38]采用薄层扫描法测定。薄层层析板:硅胶G-0.3%CMC-Na,展开剂: 石油醚30~60℃--乙醚(3:2)； 测 定波长310nm,扫描方式:反射法直线扫描 Sx=3,精密称取欧前胡素7.0mg ,异欧前胡素4.0mg ,用醋酸乙醋溶解并定容至5ml,摇匀。分别精密吸1、2 、3 、4、5ul点样 ,展开 ,测定面积积分值。结果表明,欧前胡素在1.4-7ug之间 ,异欧前胡素在0.8-4ug之间 ,其面积积分值与点样量呈线性关 系 ,其回归方程分别为Y=170.6X+150.07,r=0.997; Y=393.21X+124.87,r=0.998 梁明金等[39]将欧前胡素对照品溶液点于薄层板上,以石油醚-乙醚( 1:1) 为展开剂, 在室温下饱和20min 后, 用上行法展开,取出,晾干,置于紫外灯( 365nm)下检视,欧前胡素显暗黄色斑点, Rf 值为0. 40。取欧前胡素对照品溶液1ul,2u l, 4ul, 6ul, 8ul , 10ul分别点于同一薄层板上, 用石油醚-乙醚( 1:1) 为展开剂上行展开, 晾干后在紫外灯( 365nm) 下定位,进行薄层扫描测定。线性范围为0. 55~ 5. 5??g。回归方程: Y = - 0. 4512+ 1. 325 10- 4X( r = 0. 9996)。

3.5 气相色谱-质谱联用法

李玲[40]采用气相色谱-质谱联用技术对样品进行分析鉴定,利用面积归一法测定其相对含量,共鉴定出11种香豆素类成分,主要成分为氧化前胡素、欧前胡素、异欧前胡素,其相对含量分别达到10.23%,6.58%和5.16%,为川白芷香豆素有效部位的临床疗效与所含化学成分的相关性研究提供实验依据。刘红梅[12]等人并用气相色谱,质谱联用技术对样品进行分析鉴定,利用面积归一法测定其相对含量。气

相色谱-质谱联用技术共鉴定出5种香豆素类成分,主要成分氧化前胡素、欧前胡素、异欧前胡素的相对含量分别达到42.40%，22.14%和12.12%；

[1] 杨涓,邓钏,周在德,吴凤锷.中药川白芷化学成分的研究[J]化学研

究与应用.2002,14(2)227-231

[2] 卢嘉．中药杭白芷化学成分的研究[J]．第二军医大学学报，2007，

28(3)：294-298．

[3] 赵兴增，贾晓东，陈军，王呜，董云发，冯煦.白纸化学成分研究

[J] 时珍国疾同药2008, 19(8):2000-2003

[4] 王梦月,贾敏如,马逾英,唐声武,蒋桂华,李晓波. 白芷镇痛有效部

位的化学成分研究[J].中国药学杂志2005 40(8):583-585

[5]赵爱红，杨秀伟，杨鑫宝，王文全，陶海燕. 祁白芷挥发油成份

GC- MS分析.中国中药杂志2011,36(5)603-608

[6]马逾英，王娜，张利，车早红.亳白芷挥发油成分的气相色谱一质

谱联用分析[J] 时珍国医国药 2009,20(11):2667-2669

[7] 杨祖金,雷华平,葛发欢.超临界CO2萃取白芷挥发油的GS-MS分

析[J].中药材 2005,28(8)661-662

[8] 铃木辛. 生药学杂志 [ J] . 1982 , 36 ( 3) : 65.

[9] 戴跃进. 白芷中的微量元素分析 [ J ] . 华西医药杂志, 1990 , 5 [10]陈丛瑾,黄克瀛,韦龙宾.色谱方法在植物黄酮含量测定中的应

用[J].光谱实验室,2007,24(5):821-824.

[11]刘文,韩笑,王学勇.超临界CO2萃取白芷中欧前胡素的研究.中

国药学杂志[J].2003,(38):99-100

[12]刘红梅，张明贤. 超临界流体萃取和GC-MS分析白芷中香豆素