ABCD人民医院检验科 PCR室作业指导书 主题内容
PCR室内质量控制操作程序 文件编号：ABCD-3-PR-18 版本/修订号：A/0 生效日期：20060808 第 33 页 共90 页 PCR室内质量控制标准操作程序
1．目的：随时了解并控制实验室检测的精密度变化。 2．适用范围：核酸扩增荧光定量检测实验室。 3．负责人： 操作人： 4．程序：
4．1血清质量控制品制备及操作 4．1．1质控品制备：
收集本室检测的临床样本，HBV DNA定量为10copies/ml的样本混匀，并分装于0.5ml的离心管中，每支110μl，编号后（如Qb0201-n），-20℃保存。 4．1．2 操作：
每次检测过程中将此分装的室内质控品与样本同时检测，记录此标本的检测结果；计算前10次检测结果的平均值作为本批质控品的靶值。
4．1．3如果使用商品化的质控品，按4．１．２要求执行。 4．2 室内质控图的使用方法 4．2．1 描点
a） 图中X线为靶线，X±2s为警告线，X±3s为失控线。
对于同一批号的质控血清不论使用几个月，其空图均不变化。只要将图纸上方“起止日期”项填入每个月的实际起止日期即可。
b） 每天将该批号质控血清按有关规定程序复融随同病人的标本同时检测。将日期、检测结果和操作者如实记录在图下方的相应位置，并按前面的方法画出图上的对应点，用直线将该点与前一天的点连接。
c）月底计算当月全部质控血清检测结果的X、s和CV，并进行图形分析和小结，将质量控制图存入质控资料档案。
4．2．2 图形分析
a）如果在X±3s线以外，则为失控，应立即报告有关负责人，迅速查找原因。必要时复测标本，然后方可发出报告，并将失控情况、查找过程及处理结果等详细记录。
b）如果在X±2s线以外，或出现连续6点以上在一侧等规律变化，均应即使向有关负责人反映，并积极查找原因。但当天的检验结果一般可以发出。
4．2．3 通过观察图形的规律性变化进行误差分析，消除误差来源
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ABCD人民医院检验科 PCR室作业指导书 主题内容 PCR室内质量控制操作程序 文件编号：ABCD-3-PR-18 版本/修订号：A/0 生效日期：20060808 第 34 页 共90 页 a）曲线漂移：提示有系统误差，准确度发生了一次性的向上或向下改变。这种变化往往是由于一个新的情况引起的。如更换不同批号试剂，启用新批号的质控血清、操作人员的变换等。在找原因时，应重点注意“漂移”前后发生了那些变动的因素。
b）趋势性变化：向下或向上的趋势性变化表明检测的准确度发生了渐渐地变化。这种变化往往是由于一个逐渐改变的因素造成的。如质控血清的降解，试剂效价的降低等。 c）连续多点分布在靶值一侧：目前，一般认为质控血清的检测结果连续6天以上
出现在靶值同一侧，则应迅速查找原因，争取尽快使之回复围绕在靶值随机分布的状态。因为按照统计学原理，由纯随机误差造成的这种情况的可能性很小。连续6天以上出现在靶值同一侧可能性小于1.5％。因此凡出现连续6天以上出现在靶值同一侧者均有可能存在非随机误差因素。如结果与靶值偏离并不太大，不会给临床使用带来太大影响时，一般检验报告可以照常填发。 d）其他规律变化：（周期性等）
4．2．4 通过图形的资料对比进行误差分析，消除误差来源
a）每个月的月底将该月的全部质控血清检测结果的X和s与该批测定的X和s进行比较。如果X发生了变化，说明准确度发生了变化提示有非随机误差存在。如果当月s不同则表明检测的精密度发生了变化。
b）将使用同一批号质控血清的CT值的X和s按月份列出。如果X逐月上升， 应考虑保存不当造成的试剂效价降低或质控血清本身出现降解。如果各月份X基本一致而s逐月加大，则主要提示常规工作的精密度下降，应重点从操作、管理上找原因。
c）在数年中，把每个月的CV和失控规律列成表，可用作检测质量的历史性回顾及趋势分析。
5. 本文涉及以下图表：
PCR室内质控记录表 室内质控图
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PCR室间质量控制操作程序 文件编号：ABCD-3-PR-19 版本/修订号：A/0 生效日期：20060808 第 35 页 共90 页 PCR室间质量控制操作程序
1．目的：室间质评（EQA）是实验室质量控制体系中重要部分，是保证患者检验结果和其报告的准确性和可靠
性，以及各实验室间结果的可比性的重要手段。
2．适用范围：卫生部或省临检中心下发的PCR室间质控血清检测。 3．负责人： 操作人： 4．程序：
4.1质控标本的接收和验收：收到质控血清后由相关人员登记、签字，根据质控标本的有关说明对血清的数
量、批号、包装进行验收并将质控标本按要求置-20℃保存于标本制备区。
4.2 质控标本的检测按常规临床标本对待，若需要，检测前先根据说明对质控物进行复溶。
4.3室间质评样本必须按实验室常规工作进行，由进行常规工作的人员测试，工作人员必须使用实验室的常
规检测方法和试剂，不得特殊对待。检测结果须在截止日期前上报。 4.4实验室检测EQA样本的次数必须与常规检测病人样本的次数一样（即1次）。
4.5 EQA样本的检测在部或省临检中心规定的时间内进行，检测结果的上报也必须在截止 日期前，通过
E-mail或挂号信寄出。
4.6室间质评的检测结果和反馈结果均记录于室间质评记录表，根据反馈结果分析室间质评的状态，如有出
控应查找原因，并采取相应的措施。 4.7 严禁与其它实验室交流室间质评的检测结果。 5. 本文涉及以下图表：
室间质评记录表
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PCR温度校准标准操作程序 文件编号：ABCD-3-PR-20 版本/修订号：A/0 生效日期：20060808 第 36 页 共90 页 温度校准标准操作程序
1、目的： 保证实验时温度的准确 2、范围： 基因扩增实验室所有温控的仪器 3．负责人： 操作人： 4、程序
4.1温度计校准程序：
4.1.1 由设备科人员送质检局对温度计进行校准。每年进行1次。 4.1.2经校准过的温度计可作为微量恒温器温度校温的参照。 4.2 水浴箱温度校准程序：
4.2.1 将水浴箱调至所设置的温度，等水温稳定以后，进行测量。 4.2.2 取出一只已经技术监督局校准后的温度计进行测量。 4.2.3 计下读数，重复在不同温度下测量。
4.2.4 经测量的温度和水浴箱显示温度进行比较，计算出误差。 4.2.5 将水浴箱调至校准后的温度。 4.2.6 每次试验前都必须进行此项工作。 4.3 冰箱温度的校准：（4℃冰箱和—20℃冰箱）
4.3.1 每次实验前都需对冰箱温度进行记录，绘置冰箱温度的质控图。
4.3.2 取一只已经技术监督局校准后的温度计对冰箱温度进行实际测量，并计下读数。 4.3.3 反复多次测量，如超出规定范围，将冰箱调至所需温度。 4.4 扩增仪温度的校准
4.4.1 将扩增仪打开并设至一温度。
4.4.2 在扩增仪的温控孔入放一个反应管，待温度长至所设温度时，用一只已经持术监督局校准过和温度计插入反应管中进行测量温度并记录。
4.4.3 在不同温度点进行重复测量，取均值，并与扩增仪的显示温度进行比较。 4.4.4 由于仪器较精密，温度相差太大则需请厂家前来校准并调试。 4.4.5 经调试后贴上绿色标签，标明时间仪器的性能状态。 5. 本文涉及以下图表
PCR实验室环境温湿度记录表 冰箱温度质控图