取同一批号药材样品5份，按样品测定法测定，测得槲皮素平均含量为0。377mg●g-1，RSD为1。84%。
2.3.10 回收率实验
精密称取已测含量(0。377mg●g-1)的养心菜药材粉末0。5g，加入定量的对照品溶液，按样品测定法测定，平均回收率为102。08%，RSD为2。71%(n=6)。见表1。 表1 养心菜中槲皮素的回收率实验结果
样品量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /%
平均回收率 /% RSD
/% 0.1888 0.1891 0.1904 0.1881 0.1894 0.1884 0.1702 0.1702 0.1824 0.1824 0.1946 0.1946 0.3648 0.3562 0.3818 0.3692 0.3886 0.3915 103.40 98.12 104.89 99.30 102.41 104.37 102.08 2.71
2. 3.11 样品测定结果
精密吸取供试品溶液和对照品溶液适量，按上述色谱条件养心菜药材中槲皮素含量，结果见表2。
表2 养心菜药材中槲皮素的含量(n=3) 样品批号
槲皮素含量/ mg●g-1 RSD/% 20040505 20040506 20040507 0.374 0.386 0.378 2.12 1.37 1.33
3实验讨论
3.1 植物志描述的品种来源均为野生标本，故栽培品可能出现形态学上的差异，如叶形，地上茎数目，是否分枝等。本栽培品多为扦插繁殖，经观察，本植物叶形可出现从披针形至阔卵形过渡到倒卵形至匙形的明显变化;地上茎分枝明显多于3枝;扦插后由不定根长成的根系均成圆锥状主根样粗大。
3.2 药材茎表面栓皮颜色及栓皮易剥落，叶易落而留叶迹，茎数目多，极皱缩而中空，根茎粗短膨大等性状特征，茎，根，根茎横切面韧皮部均成环，皮层宽广。粉末中角质化加厚的表皮细胞与内含红棕物质多角状木栓细胞同时存在，气孔器外副卫细胞相切排列成环的特征。均可作为养心菜药材的鉴别特征。
3.3 茎表皮细胞增厚部分被苏丹Ⅲ染红显示为角质化增厚。基本组织细胞壁均为纤维素组成，木质部仅导管木化，木纤维未木化。经化学成分预试验，证实本植物含有鞣质类成分和酚酸类成分，滴加三氯化铁溶液后仅韧皮部变成蓝黑色，说明此类成分主要集中分布于韧皮部。
3.4 提取溶剂的选择
本品分别用95%乙醇，甲醇为溶媒，置索氏提取器中提取，结果表明以甲醇提取质少为优[16]。
3.5 提取方式的选择
比较索氏提取和超声提取两种方式，结果表明超声提取不完全，重现性差， 因此选用索氏提取法[17～19]。
3.6 水解条件的选择
考察了酸水解时间的影响[20，21]，结果显示:20mL甲醇提取液加入10mL20%的盐酸溶液，10mL甲醇水浴回流水解60min，使养心菜中的黄酮苷水解完全，延长水解时间也不会使苷元(槲皮素)的量明显增加，因此酸水解时间确定为1h
3.7 流动相的选择
曾采用乙腈-0。1%磷酸系统[22，23]和甲醇-水-冰乙酸系统[24]为流动相，效果不理想，改用甲醇-0。4%磷酸系统[25～27]进行洗脱，分离效果好，理论踏板数可达7645，峰形好。若甲醇量增大，可使峰形变得更好，出峰时间提早，但量太大，分离效果下降;流动相中加入一定量的磷酸，可改善峰形和分离度，在保证分离度的
情况下应尽量减少磷酸的用量，这样可以增加柱的稳定性和使用寿命。
3.8 检测波长的选择
曾有报道采用254nm[28]，360nm[29，30]，370nm[31，32]3个波长来测定槲皮素含量，经过对这3个波长进行筛选，在200～400nm测定其紫外吸收光谱，结果表明槲皮素在370±2nm处有一最大吸收，故选择370nm为测量波长。
3.9 指标性成分的确定
由于对养心菜的基础研究很少，质量控制缺乏指标性成分，根据文献报道养心菜中含黄酮类成分主要有槲皮素，槲皮苷等，我们通过液质联用技术分离确定出养心菜中含有槲皮素。因此采取先提取后水解，然后测定槲皮素的含量，实验表明本方法快速，简便，准确，可作为养心菜质量控制的指标成分，为养心菜的质量控制提供了分析方法。
第四章:养心菜挥发油成分GC-MS分析
养心菜[33~35]，另名救心草，土三七，费菜等，始载于《救荒本草》[36]，为景天科植物费菜(Sedum aizoon L。)的全草。其性平味甘微酸，具有平肝宁心，散瘀止血等功效，其含有糖类，鞣质，黄酮苷元及齐墩果酸，熊果酸， -谷甾醇等成分[36，37]。《福建民间草药》称其具有\\\平肝宁心，清血热，疗心悸\\\。民间多用鲜品食用及制茶用于心脏疾病的保健。本文首次对其挥发性化学成分进行了研究，旨在为今后的进一步研究奠定基础。 1实验仪器与材料 1。1实验仪器
美国HP6890-MSD气相色谱-质谱联用仪 美国安捷伦科技公司制造 1。2 实验材料
养心菜(福建连城兰花公司提供，经本院中药鉴定教研室车苏容老师鉴定，品种定为Sedum aizoon L。) 2 实验方法
2。1 挥发油提取
取养心菜新鲜药材约500g，切碎后置圆底烧瓶中加适量去离子水，用挥发油提取器按常规水蒸气蒸馏法提取挥发油，小心控温蒸馏5h，收集馏出液，用0。5 ml色谱纯正己烷溶解，作为GC-MS的分析样品。其它试剂均为色谱纯。 2。2 色谱条件
色谱柱:HP-5MS柱(0。25mm×30m，0。25μm);
程序升温:柱温起始温度100℃，以每分钟20℃匀速升温至220℃; 进样量1μL;进样口温度180℃;
载气:氦气;分流比5:1;流速1。2ml/min。 质谱条件
离子源接口温度:300℃; 电离方式:EI;
离子源温度:250℃; 电子能量:70eV; 倍增器电压:1953V;
质量扫描范围:30-400amu。 2。4 定量方法
以总离子流(TIC)色谱峰面积归一法计算挥发油提取液中各化学成分的相对含量。结
果见表1。 3 结果与讨论
3。1本实验利用GC-MS技术对养心菜中挥发油成分进行了分析，从中共鉴定出16种化学成分，占总峰面积的77。50%。这些化学成分的定性是通过GC-MS测定，并根据标准质谱数据库检索进行分析而确定的;定量数据是离子流图的峰面积归一化后得到的百分含量，从而确定了养心菜挥发油中部分化学成分。 分析，鉴定结果见图9及表3。 图9 养心菜挥发油成分气相色谱图 Fig。1 Total iron current(TIC) of volatile oil in Sedum aizoon L。
表3养心菜挥发油化学成分气-质联用分析结果 Tab 1 Composition of volatile oil in Sedum aizoon L。 峰号
化合物名称 保留时间 t/min 分子量 相对百分 含量(%) 2
2-十一酮(2-undecanone) 3。53 170 21。30 3
醋酸冰片酯(Bornyl acetate) 3。55 196 6。26 8
1-壬烯(1-nonene) 4。00 126 2。52 9
乙酸香叶醇酯(Geraniol acetate) 4。05 196 3。61 17
2-十三酮(2-tridecanone) 4。75 198 4。04