《PCR技术及其应用》课程考试试卷
（硕士研究生）
班级： 硕士12班 学号： 20141100043 姓名 戴鹏辉 得分 ：
一、下页试题为单项选择题，请将每题的正确答案填在试卷首页的答题栏内（共50题，每题1.8分，总分90分） 题号 答案 题号 答案 题号 答案 题号 答案 题号 答案
1 11 21 31 41 2 12 22 32 42 3 13 23 33 43 4 14 24 34 44 5 15 25 35 45 6 16 26 36 46 7 17 27 37 47 8 18 28 38 48 9 19 29 39 49 10 20 30 40 50 二、简述RACE的原理和技术(10分)
1、PCR反应的五个要素是：（ ）
①引物 ②dNTP ③ Mg离子 ④ 模板 ⑤水 ⑥ TaqDNA聚合酶 ⑦水 请选择
A、①②③④⑤ B、①②③④⑥ C、②③④⑤⑥ D、①③⑤⑥⑦
2、PCR产物鉴定常用的方法是：（ ） A、凝胶电泳法 B、杂交法 C、免疫法
3、PCR反应中随着复性温度升高，扩增的特异性：（ ） A、 升高 B、 下降 C、 不变
4、原位PCR技术中对组织和细胞进行固定的目的是：（ ） A、 维持细胞形态
B、 创造一个既便于试剂进入细胞，又能减少产物渗出的内环境 C、 防止操作中的细胞移动
5、增效PCR包括（ ）轮PCR扩增 A、1 B、2 C、3
D、越多越好
6、增效PCR第一轮扩增的目的是（ ） ①增加引物量 ②增加模板量
③延长作用时间，降低聚合酶作用速度，以提高忠实性 ④阻止过多引物间的作用的二聚体的形成，提高特异性
A、①③ B、②④ C、①②③ D、④
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7、增效PCR第二轮扩增的目的是（ ） ①增加模板量 ②提高特异性
③延长非特异性条带 ④增加特异靶序列产量 A、①③ B、②④ C、①②③ D、④
8增效PCR第一轮扩增时要求引物的量比通常其它PCR方法（ ） A、 高 B、 一样 C、 低
D、 无所谓
9增效PCR反应总的循环次数比其它PCR方法多的原因是（ ） A、 为了得到更大量的产物 B、 为了提高特异性 C、 为了提高敏感性
D、 虽然引物总量未变，但由于分两次加入，使每次反应浓度降低了，为了得到相同的扩
增产物必须增加循环次数 10、膜结合PCR之所以可以对很少的模板或污染比较严重的样品进行扩增，其主要依据是： A、 模板与膜固定后可以作彻底漂洗 B、 模板与膜结合后可以提高PCR扩增效率 C、 模板与膜结合后，可用不同引物先后对不同区段进入扩增 D、 薄膜可以吸附其它杂质从而消除污染物的影响提高信噪比
11、对模板进行固定以前首先应使样品变性，其原因是：（ ） A、 为PCR反应作准备 B、 使样品中的杂质变性后除去 C、 薄膜结合单链DNA的能力强 D、 提高Taq聚合酶的活力
12、膜结合PCR的扩增效率比液相扩增法为：（ ） A、 低 B、 高 C、 相同 D、 不一定
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13、膜结合PCR必须（ 0 A、 适当减少循环次数 B、 适当减少引物用量 C、 适当延长延伸反应时间 D、 适当增加循环次数
14、膜结合PCR不能减轻下列（ ）样品的污染： A、 蛋白质和肽类 B、 核酸 C、 脂类物质
D、 小分子代谢产物
15、反向PCR扩增到的序列与通常PCR的差别在于：（ 0
A、 反向PCR扩增的是已知序列之间的未知，而通常PCR反应扩增的是已知序列两侧的
已知序列。 B、 反向PCR扩增的是已知序列两侧的未知序列，而通常PCR反应扩增的是已知序列之间
的序列。 C、 反向PCR扩增的是未知序列两侧的已知序列，而通常PCR扩增的是已知序列两侧的已
知序列。
D、 反向PCR扩增的是已知序列，而常规PCR扩增的是未知序列。
16、反向PCR之所以能扩增未知序列的原因在于：（ ） A、 通过限制性酶切然后环化改变了序列的拓扑关系 B、 通过控制反应条件改变了聚合酶的聚合方向 C、 通过限制性酶切然后环化，改变了序列的内外关系 D、 设计的特殊引物改变了延伸反应方向
17、反向PCR中为何要将环化的DNA分子切成结状（ ）
A、 环状双链DNA分子易于形成超螺旋结构不利于进行PCR反应 B、 DNA聚合酶不能有效结合环状分子 C、 环状双链分子使扩增的非特异性太强
D、 环状双链无法解链，也就无法与引物结合
18、将环状DNA分子切成线性分子时要求限制性内切酶位点位于：（ ） A、 已知序列外侧 B、 未知序列内侧 C、 已知序列内侧 D、 不易判断
19、可在成环的DNA分子中引入切割的方法有：（ ） ①煮沸法
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②限制性酶切法
③EDTA-寡核苷酸介导的特异裂解法 ④机械剪切法 A、①③ B、②④ C、①②③ D、④
20、重组PCR的重组过程实质上发生在：（ ） A、 体外 B、 体内 C、 体外体内都有关 D、 不易判断
21、重组PCR能实现重组的原因在于：（ ）
A、 将要重组的核酸分子共同转化细胞，细胞自身就具有使其发生重组的功能B、 将要重组的分子酶切后以人工方式拼接到一起实现重组 C、 在要重组的两个扩增产物端部设计上同源序列以实现同源重组 D、 重组实质上是一种随机交换DNA的过程，无法人为控制
22、用重组PCR进行定点诱变时，通常将错配位点设计在引物的（ ） A、3’端 B、5’端 C、中部
D、无法人为控制
23、用重组PCR进行定点诱变时，突变位点的局限性在于：（ ） A、 只能位于序列中部 B、 只能位于序列的两侧 C、 只能引入单个突变碱基 D、 只能引入两个突变碱基
24、重叠延伸法不能（ 0 A、 将突变引入序列中部 B、 实现基因拼接 C、 引入多个突变碱基
D、 扩增未知序列并引入突变
25、一般来说巢式PCR分为（ ）扩增循环。 A、1个 B、2个 C、3个 D、多个
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26、巢式PCR之所以要用两对引物分别进行扩增，原因是（ 0 ①提高扩增效率 ②节约试剂用量
③保证反应的高特异性 ④简化常规PCR操作 A、①③ B、②④ C、①②③ D、④
27、有关巢式一步PCR的说法中正确的是：（ ） ①第一轮PCR引物较第二轮PCR引物短
②第一轮PCR引物比第二轮PCR引物退火温度高 ③第一轮PCR引物比第二轮PCR引物退火温度低 ④第一轮PCR引物较第二轮PCR引物长 A、①③ B、②④ C、①②③ D、④
28、固着PCR是：（ ）
A、 将模板与固相的琼脂糖珠相连 B、 将引物与薄膜固定 C、 将DNA聚合酶用耦联剂固定到琼脂糖珠上 D、 将引物用耦联剂固定到琼脂糖珠上
29、固着PCR的主要优点在于（ ） A、 扩增产物处于溶液中易于分离纯化 B、 便于聚合酶在高忠实性条件下进行扩增 C、 扩增产物与固定化的琼脂糖珠相连，便于分离
D、 因为引物与琼脂糖珠相连，所以可以容易把扩增产物同引物分开
30、与膜结合PCR相比，固着PCR的不同点在于（ 0 ①膜结合PCR将膜板结合到膜上，而固着PCR使引物固相化 ②膜结合PCR便于纯化样品，而固着PCR便于纯化分离扩增产物
③膜结合PCR所用引物无特殊要求，而固着PCR所用引物应能与固相底质发生耦联④两种PCR对聚合酶有不同要求 A、①③ B、②④ C、①②③ D、④
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31、单一特异引物PCR的通用引物可与（ ）配对结合。 A、 载体中的特定序列 B、 插入片段的特异序列 C、 载体中的非特异序列 D、 插入片段的非特异序列
32、单一特异引物PCR的特异引物可与（ ）配对结合。 A、载体中的特定序列 B、插入片段的特异序列 C、载体中的非特异序列 D、插入片段的非特异序列
33、单一特异引物PCR的特异性扩增体现在（ ） A、通用引物可与载体中的特定序列特异结合 B、通用引物可与插入片段的特异序列特异结合 C、特异引物可与载体中的特异序列特异结合 D、特异引物可与插入片段的特异序列特异结合
34、重复DNA序列引物扩增法对重复序列的要求是（ ）A、 序列为低度重复 B、 序列为串边重复 C、 序列为散布重复 D、 序列为高度重复
35、重复DNA序列引物扩增法得到的产物是（ ） A、 均一的 B、 不均一的 C、 不特异的 D、 难以判断
36、下列关于逆转录PCR的说法中不正确的是（ ） A、 样品中混有少量DNA对扩增结果无影响 B、 需要将RNA逆转录成cDNA才能进行PCR C、 逆转录PCR方法比其它许多RNA研究方法的灵敏度高 D、 逆转录PCR要求RNA比较完善
37、逆转录PCR对RNA样品的要求是（ ）
①RNA分子完整 ②不含DNA ③不含蛋白质和其它杂质A、①③ B、②④ C、①②③ D、④
④RNA的来源有限制7
38、逆转录PCR反应中合成cDNA需要的引物种类有（ ） ①随机六聚体 ②下游引物 ③寡聚（dT） ④寡聚（dA） A、①③ B、②④ C、①②③ D、④
39、有关引物设计中哪一个不正确（ ） A、 引物的跨度以180-500KB为宜 B、 5’和3’无回文结构 C、 引物最好跨越一个内含子
D、 上下引物的Tm值应有较大差异
40、一步逆转录扩增法所依据的是（ ）
A、 新一代Taq聚合酶既具有聚合酶活性也有逆转录酶活性 B、 适当控制反应条件 C、 特殊的离子浓度 D、 特殊的扩增对象
41、常规PCR存在的问题是（ ） A、 加热太慢，反应不能恰开始 B、 PCR反应前升温过程中聚合酶产生非特异性扩增 C、 缓慢的升温过程使聚合本科活力不能有效出现
D、 加热过程破坏了引物和靶序列的结合影响聚合反应
42、热启动PCR克服常规PCR问题的办法是（ ） ①高温时加入必须的反应成份 ②加快加热过程
③加入无活性的酶然后高温激活 ④改变扩增对象 A、①③ B、②④ C、①②③ D、④
43、在提取核酸过程中，除去大量蛋白质的操作是（ ）
A、 煮沸 B、蛋白酶K C、酚/氯仿抽提 D、乙醇沉淀
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44、RNA应保存于：（ ） A、 水中 B、 TE缓冲液 C、 DEPC处理的离子水中 D、 冻干保存
45、如何监制PCR实验的污染情况？（ ） ①设立阴性和阳性对照 ②重复实验 ③合成新引物 ④消毒试剂 A、①③ B、②④ C、①②③ D、④
46、下列说法不正确的是：（ ）
A、 放射线不会造成核酸分子结构的破坏 B、 多数放射性核素半衰期较短，必须随标随用 C、 放射性核素与相应的元素具有完全相同的化学性质 D、 放射性核素的检测具有极高的特异性
47、PCR进行DNA的生物素标记错误的是（ ） A、 反应中生物素化dUTP浓度不能太高 B、 以重组质粒为模板，模板DNA量不能太多 C、 一般标记生物素化探针长度小于500bp
D、 琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物，标记的DNA较未标记的产物泳动快
48、欲减少成套寡核苷酸筛选cDNA文库的杂交阳性克隆总数应（ ） A、 采用杂交溶剂如氯化四甲铵 B、 设计较短的寡核苷酸 C、 改变探针G+C含量 D、 增加简并性
49、体外转录生成的RNA探针与单链DNA探针相比（ ） A、 与靶序列杂交的效率低 B、 放射性标记RNA的合成效率较低 C、 合成高比活度全长探针的成本相对较低 D、 必须用凝胶电泳进行纯化
50、用M13噬菌体载体合成单链DNA探针时（ ）
A、 反应中4种dNTP的浓度均大于各自的Km值时，DNA合成速率最慢
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B、 反应液中多种前体浓度处于低限时，增加模板量可延长产物 C、 为使模板分子的使用效率达到最高，引物的摩尔数必须减少 D、 引物延伸反应总是使用过量的酶
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