Chi是一个被recBCD基因编码的酶的作用目标。

RuvA辨认Holliday连合处的结构，RuvB是一个解旋酶，并以六聚体形式结合于双链DNA上，解开双链螺旋。

ruvC，编码了一个末端核酸酶，它能确精地辨认出Holliday结合处，结合到Holliday中间产物上，将这样的结合处分开。

9. 阐述易位因子概念和反转录病毒复制机制。

易位因子：即转座子，是存在于染色体上可自主复制和位移的基本单位。它可分为①简单转座子，不含有任何宿主基因也称为插入序列；②复合式转座子，是一类带有某些抗药性基因（或其他任何宿主基因）的转座子，其两翼往往是两个相同或高度同源的IS序列。

反转录病毒复制机制：反转录病毒的复制是由其自身基因组上pol基因编码的反转录指导完成的，该酶具有以下三种性能：①能以RNA为模板合成出第一条互补的DNA链（逆转录酶活性）；②在新和成的DNA链上合成另一条互补DNA链，形成双链DNA（DNA聚合酶活性）；③水解除去RNA-DNA杂合分子中的RNA（Rnase活性，即核糖核酸酶活性）。

机制：反转录病毒的复制是通过一个RNA分子中间体完成的，是由其自身基因组上pol基因编码的反转录和通过一个RNA分子中间体来完成的反转录酶具有逆转录酶、DNA聚合酶和核糖核酸酶活性。当反转录病毒感染细胞时，pol基因就被宿主的RNA聚合酶Ⅱ转录，产生pol mRNA，并在宿主核糖体上合成包括反转录酶、整合酶等多个病毒复制和整合所需要的酶类。该反转录酶再以病毒RNA 为模板，转录出与病毒RNA序列互补的单链DNA分子，并以此为模板，利用宿主DNA聚合酶指导合成第二条DNA链，以双链DNA形式整合到宿主细胞基因组中，接着就可以被宿主的Ⅱ型聚合酶转录。

10. 原核生物启动子所组成的保守序列和终止子特异序列是什么？

启动子是指RNA聚合酶识别、结合和开始转录的一段DNA序列。在原核生物

中，在起点上游约-10处找到6 bp的保守序列：TATAAT，称为Pribnow box，或-10序列。在-35位置，找到又以保守序列：TTGACA，称为识别区或-35序列。这两个序列是RNA聚合酶与启动子的结合位点，能与ζ因子相互识别而具有很高的亲和力。在-35区和-10区之间的距离17±1 bp。保持启动子这二段序列及它们之间的距离是很重要的。

终止子：提供转录停止信号的DNA序列。所有的原核生物的终止子在终止点之前均有一个回文结构，其产生的RNA可形成茎环构成的发夹结构。大肠杆菌中有两类终止子：不依赖ρ的终止子（简单终止子）和依赖ρ的终止子。简单终止子除能形成发夹结构外，在终点前还有一段由6-8个A组成的序列，所以转录产物的3’端为寡聚U，另外回文对称区通常有一段富含G-C的序列。依赖ρ的终止子必须在ρ因子存在时才发生终止作用，回文区无富含G-C，也无寡聚U。

11. RNA聚合酶I识别的启动子包含有哪两个部分？分别有什么蛋白因子识别？

RNA聚合酶Ⅰ只转录编码核糖体RNA的基因，转录产物经切割和加工后生成各种成熟rRNA

RNA 聚合酶I 的转录单位有两段起始调控序列，核心启动子(Core promoter)和与之相距70bp 处的上游启动元件upstream promoter element(UPE) （旧称上游控制元件(Upstream control element，UCE)）

核心启动子(Core promoter)位于起始位点周围，从-45 延伸到+20，它本身就足以起始转录。但是，其效率可被位于-180 到-107 的上游启动元件（UPE)显著提高。与一般启动子相比，这两个区域都有不寻常的组成，富含G·C碱基对，而且它们约有85%是一致的。

RNA 聚合酶Ⅰ需要UBF1和SL1两个辅助因子。UBF1 是一个单链多肽，它先后与UPE和核心启动子上富含G·C 区结合。SL1 因子是一个四聚体蛋白，其作用类似于细菌，本身对于启动子没有特异性，但一旦UBF1 结合，SL1 就可以协同UPE结合到此覆盖的DNA 延伸区域，可能其主要功能是使RNA 聚合酶正确的定位在起始位点。

发生在两个部位的结合因子之间相互作用的详细情况尚不清楚。 两个因子都结合后， RNA 聚合酶Ⅰ就与核心启动子结合起始转录。 简单答案：（RNA聚合酶I识别的启动子包含-40~+50的近启动子和-165~-40的远启动子两部分。近启动子功能决定了转录起始的精确位置，远启动子的功能是影响转录的频率。近启动子有辅助因子UBFl识别，远启动子有SL1识别。）

12.RNA聚合酶II识别的启动子含有多种顺式作用因子，请举4例。

RNA聚合酶II启动子涉及众多编码蛋白质基因表达的控制，该类型启动子包含四类控制元件：基本启动子、起始子、上游元件和应答元件。这些元件的不同组合，再加上其它序列的变化，构成了数量十分庞大的各种启动子。它们受相应转录因子的识别和作用。

eg1: TATA box通常位于起始位点上游约25bp处的7bp保守区，它组成唯一的上游启动子元件，此元件距起始位点有相对固定的位置，具有定位转录起始的功能。它可以在所有真核生物中找到。TATA盒倾向于被富含G*C对的序列环绕，可能是TATA盒起作用的一个因子。具有选择定位转录点的功能，作为定位因子起作用的

eg2: GC box通常在起始位点上游40-70bp处，但在每一个启动子中，GC盒前后的情况是不一样的。功能是加强转录，两个方向都有效。

eg3: CAAT box约在-75bp处，决定了转录的效率，两个方向都有效。

eg4: 核苷酸八聚体（Oct,8bp长的序列元件）能增强真核生物启动子的转录功能。

13. RNA聚合酶III识别的启动子有哪几类？其定位因子是什么？

RNA聚合酶的启动子有三种类型结构。

基因内启动子有两种类型，各自含有两个框架序列，分别被3种辅助因子识别。 类型Ⅰ（5SrRNA）由boxA 序列和一个隔开的boxC组成，类型Ⅱ（tRNA）由boxA和一个隔开的boxB序列组成。类型Ⅱ启动子上的A盒和B盒之间的距离

可以变化很大，但两盒不能过近，太近会失去其功能。

有关的转录因子包括TFⅢA 、TFⅢB、 TFⅢC。在Ⅰ类启动子的转录起始过程中，首先TFⅢA结合于内部启动子的boxA，然后TFⅢC结合于boxC然后招募真正的起始因子TFⅢB，TFⅢB最后招募RNA聚合酶Ⅲ。在Ⅱ类启动子的转录起始过程中，首先TFⅢC结合于平boxA和boxB，然后招募真正的起始因子TFⅢB，后者招募RNA聚合酶Ⅲ。

TFⅢB含TBP，是定位因子，负责将RNA聚合酶Ⅲ定位于正确的位置。TFⅢB本身不具有结合DNA的能力，RNA聚合酶Ⅲ也不能识别特异的DNA序列。但TFⅢB借助TFⅢC等装配因子，可精确结合于转录起始位点上游，从而使RNA聚合酶Ⅲ结合于转录起始位点。

（TFⅢB含TBP是真正的转录因子，A、C可被高盐除掉，是装配因子） RNA聚合酶Ⅲ的第Ⅲ类启动子位于转录起点的上游，这类启动子有三个上游元件，负责转录snRNA的基因，其元件主要包括：Oct-PSE-TATA(Oct 核苷酸八聚体；PSE近端序列元件，提高转录效率；TATA区。它们各自被有关因子识别和结合。有些snRNA的基因由RNA聚合酶II转录，究竟是由RNA聚合酶II还是Ⅲ转录，似乎由TATA矿的序列决定。关键的TATA框由包含TBP的转录因子所识别，TBP又与其它蛋白质结合，其中有些对聚合酶III启动子特异的蛋白质。由TBP 和TAF的功能使RNA聚合酶III正确定位于起点。

14.如何实现真核生物一蛋白基因在大肠杆菌细胞中受控、稳定、分泌和高效表达。

需要一种高效的原核表达载体，包括一个强大并且可以严紧调节的启动子；一位于翻译起始密码子5’端大约9bp的SD序列；位于目的基因3’末端的一个高效转录终止子。除此之外，载体还需要一个复制起点，筛选标记和利于对启动子活性进行严紧调节的基因。这种调节元件可以插入载体自身，也可以插入宿主的染色体。其他的元件包括转录和翻译增强子等。

另外，减少E.coli中异源蛋白的降解；使用融合蛋白表达方法高效表达和纯化重组蛋白；利用分子伴侣共表达，促进蛋白质翻译后正确折叠；寻找合适的培养基