微量凯氏定氮法测定蛋白质含量实验报告记录

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微量凯氏定氮法测定蛋白质含量实验报告

一、实验目的

1.学习微量凯氏定氮法的原理

2.掌握微量凯氏定氮法的操作技术（未知样品的消化、蒸馏、滴定及其含氮量的计算等）

二、实验原理

凯氏定氮法常用于测定天然有机物（如蛋白质，核酸及氨基酸等）的含氮量。

当天然含氮有机物与浓硫酸共热时，其中的碳、氢被氧化成二氧化碳和水，而氮则变成氨并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。此过程称为“消化”。

此过程进行的相对较为缓慢，通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高溶液的沸点，并加入硫酸铜作为催化剂，以促进反应的进行。氧化剂过氧化氢也能加速反应。

消化过程：

2NH3?H2SO4?(NH4)2SO4含氮有机物?H2SO4?CO2?SO2?H2O?NH3

蒸馏：在消化完全的样品溶液中加入浓氢氧化钠使呈碱性，加热

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蒸馏，即可释放出氨气。

反应方程式如下：

(NH4)2SO4?2NaOH?Na2SO4?2NH4OH

吸收与滴定：蒸馏所放出的氨，可用硼酸溶液进行吸收，待吸收完全后，再用盐酸标准溶液滴定，直至恢复溶液中原来氢离子浓度为止（即滴定至蓝紫色)，最后根据所用标准酸的当量数（相当于待测物中氨的当量数）计算出待测物中的氮量。

NH3?H3BO3?NH4H2BO3

NH4H2BO3?HCL?NH4CL?H3BO3

三、实验试剂、材料和器材

实验材料：食用面粉。

实验试剂：浓硫酸、30%氢氧化钠溶液、克氏催化剂、2%硼酸、指示剂、0.01M HCL。

实验器材：凯氏烧瓶、电炉、凯氏定氮蒸馏装置、锥形瓶、100ml容量瓶、酸式滴定管。

四、操作步骤

1.消化

（1）准确称取1克食用面粉，用称量纸卷好小心送入至50毫升的凯氏烧瓶底部，切勿沾于瓶口或瓶颈上；

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