分析化学

答：HPLC中造成谱带展宽的因素， ①涡流扩散：A=2λdp

由于填料粒径大小不等，填充不均匀，使同一个组分的分子经过多个不同长度的途径流出色谱柱，一些较快，一些较慢，滞后，造成谱带展宽。 球形、小粒度、均匀（RSD＜5%）固定相，匀浆高压填充，以降低A。 ②纵向扩散：β=2γDm 可以忽略。

③传质阻抗：a固定相传质阻抗CS可以忽略 ，因df极小，流动相传质阻抗Cm b流动相传质阻抗：由于流路中心的流动相中分子还未来得及扩散进入流动性和固定相界面，就被流动相带走，因此总比靠近填料颗粒与固定相达到分配平衡的分子移动快一些，造成峰展宽。

c静态流动相传质阻抗 ：由于部分流动相在固定相微孔内的静态流动相中，在于固定相进行分配，因而相对晚一些回到流露中，造成峰展宽。滞留静态流动相传质阻抗系数Csm

GC中流动相传质阻抗可以忽略，而存在固定相传质阻抗，HPLC中固定相传质阻抗可以忽略，而存在流动相传质阻抗及静态流动相传质阻抗。 4、讨论影响HPLC分离度的各种因素，并说明如何提高分离度？ 答：根据分离方程：R?n??1k2 ??4?1?k2可知R受理论塔板数n，分离因子α和保留因子k的影响。 n主要由柱固定相粒度和柱填充质量决定，

α主要受流动相溶剂种类的影响，还有固定相种类影响。 k 主要受溶剂轻度剂混合溶剂配比的影响

提高分离度：①选择适宜的种类和粒度小且均匀地固定相，并填充均匀， ②选择强度适当的流动相 ③选择不同的溶剂或混合溶剂

④可是当延长柱长或调节柱温来提高分离度。

5、离子色谱，反向离子对色谱与离子抑制色谱峰的原理及应用范围有何区别？ 答：①离子色谱可以分离无机，有机，阴阳离子。

②反相离子对色谱：把离子对试剂加入到含水流动相中。被分析的组分离子在流

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动相中与离子对试剂的反离子生成不带电荷的中性离子对，从而增加溶质与极性固定相的作用，是分配系数增加，改善分离效果。 用于分离可离子化或离子型化合物。

③离子抑制色谱：将流动相介入少量弱酸，弱碱或缓冲溶液，调节流动相ph，抑制有机弱酸弱碱的离解，增加它与固定相的作用，达到分离的目的。 6、什么是柱外效？在色谱中引起柱外效应的因素有哪些？如何抑制柱外效应？ 答：色谱法峰在柱外死空间里的扩展效应。

造成因素：进样器，检测器和各种连接管中的死体积。

如何抑制柱外效应：尽量减小连接管的长度，并采用细内径的管线为连接线。采用死体积小的检测器。

7、HPLC中定量分析的依据是什么？为什么要引入定量校正因子？常用的定量方法有哪些？哪些需要校正因子，哪些些不需要。

答：定量依据：响应信号（峰面积或峰高）与进入检测器的被测组分的含量成正比。

同一检测器对不同组分有不同的响应值。因此相同质量的不同组流出检测器是有不同的响应值，因此不能直接用峰面积计算组分含量，需要引入校正因子。 常用的定量方法有归一化法，需要校正因子；外标法，不需要校正因子；内标法，需要校正因子。

8、列出反相色谱中常用的固定相和流动相以及反相色谱法对流动相的基本要求。 答：常用固定相：非极性固定相，如十八烷基键合相ODS。

常用流动相：甲醇—水，乙腈—水等多元溶剂混合体系。可调节ph、

对流动相基本要求：①于是混合的有机溶剂应能与水以任意比例互溶。② ph必须控制在2~8；③ 若采用紫外检测器，流动相鹦鹉紫外吸收；④纯净，使用前应用0.45um滤膜过滤，脱气。

11、什么叫梯度洗脱，与GC的程序升温有何异同？

答：梯度洗脱：在一个分析周期内，程序控制改变流动相组成，如溶剂的极性，ph等的方法。分析组分数多，性质相差较大的复杂时采用梯度洗脱。

程序升温：在一个分析周期内程序改变柱温。使不同沸点组分在合适的温度下得到分离。

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同：两种方法都可用于分析复杂样品，使所有组份在适宜条件下得到分离。缩短分析时间，改善分离度，改善峰形。

异：梯度洗脱连续改变的是流动相的极性，ph等，程序升温改变的是温度。 9、高效液相色谱仪

答：①输液系统：a高压输液泵输送。为了延长泵使用寿命，维持其输液稳定性，操作时应注意：防止任何固体微粒进入泵体；流动相不含有任何腐蚀性物质；泵工作时要防止溶剂瓶内流动相被用完；不要超过规定的最高压力，否则高压密封环变形产生漏液；流动想要脱气。b梯度洗脱装置：

③分离进样系统：a进样器：将试样送入色谱柱，一般要求进样装置的密封性好，死体积小，重复性好。b色谱柱：色谱仪的最重要部件，由管柱和固定相组成。 ③检测系统： 检测器：把色谱洗脱液中的组分的量转变成电信号。常用 ：紫外检测器。

④数据处理，控制系统。

10、反相键合相色谱法保留行为的主要影响因素

答：（1）溶质的分子结构（极性）：极性越弱，疏水性越强，k越大，tR也越大。

（2）固定相：键合烷基的疏水性随碳链的延长而增加，溶质的k也增大。硅胶表面键合烷基的浓度越大，则溶质的k越大。

（3）流动相：极性越强，洗脱能力越弱，使溶质的k越大 11、高效液相色谱法的固定相和流动相及其选择 答：（1）固定相应符合下列要求： ①颗粒细且均匀； ②传质快；

③机械强度高，能耐高压；

④化学稳定性好，不与流动相发生化学反应。 （2）对流动相的要求： ①与固定相不发生化学反应。

②对试样有适宜的溶解度。使k在1~10范围内，

③与检测器相适应。例如用紫外检测器时，选用截止波长小于检测波长的溶剂。

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④纯度高，粘度小。低粘度流动相如甲醇﹑乙腈等可以降低柱压，提高柱效。 12、紫外检测器

答：检测原理：朗伯－比尔 (Lambert-Beer) 定律，响应信号（吸光度）与浓度成正比A=εCl

特点：灵敏度较高（10-6—10-9 g/ml），噪音低，线性范围宽，稳定性好，适于梯度，不破坏样品，应用广（分析、制备）。

局限：只能检测有紫外吸收的物质，流动相的截止波长应小于检测波长。 专属型、浓度型检测器 第十八章 平面色谱法 1、平面色谱法分类、原理 答：（1）薄层色谱法： ①吸附薄层色谱法：

原理：组分在薄层板上吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的过程。吸附系数不等实现分离。

一般极性强的组分K大，Rf值小；极性弱的组分 K小，Rf值大。 ②分配薄层色谱法：

原理：多次分配的过程，分配系数（溶解度）不等实现分离

正相色谱：水为固定相（硅胶载体），有机溶剂为流动相。极性强的组分K大， Rf值小。

反相色谱：烷基化学键合相为固定相，水－有机溶剂为流动相。极性强的组分K小， Rf值大。 ③分子排阻薄层色谱法 （2）纸色谱法:分配

纸纤维为载体，吸着在其上的水为固定相，依据分配系数的不同而达到分离 （3）薄层电泳法

2、衡量薄层色谱的参数及其意义。

3、硅胶上的活性基团是什么？以及其影响因素是什么？ 答：活性基团是硅醇基。

影响因素是含水量，含水量越高，活性越小。

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