２０青鳞鱼鳕内Ｎａ。Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ基因的克隆及皮质醇对其表达的影响ｆｈ枷Ｈ１Ｈ＃ｈｅｔｅｚｏｃｌｉ￡ＨＦ／＇ｋ／／１ｑ９３Ｄ—ｉⅡｉｏｆｅｒｉｏｆｚｅ扫地￡“ｍＪ４９ｑ妇ａｂｄｏｓａｒｇｕｓ＃ａｒｂａｆ印ａｊｔｚＦ４９３ｏｉ】ｒｃｔｏｌａｇｔ博ｃ珏ⅡｉｃｍⅡＦ‘＾ｉｈｂｑ９３ａｈｃＤ上ｈ，丑ｃｈｚＩ？日蟹七ｉＦＦ（ｚｏ．ｉ丑ｂｏｑ９８丑口＿抑８ａｔｐ．ｔｅａ０伪Ⅱ日＿阴，５０１Ｏｚｙｚ．ｉａ８ｌａｔ＝ｋ弛．ｍ１００蘸檄羹潮５６０ｆ捌ｕｌｎ，，ｈｅ拓ｌｏｃｌｉ纽ｔｆｊ｝ｎ工５ｑ２口ｄＥｚＬｉｏｒｅｄｏｆｚｅｂ朋】Ｅｉ曩ｈ，脚日埘Ｆ５４ｑ冠Ｉ“Ｉｂｄ０８ｄｚｇⅡＦ，ａｚｂａ５４２ＯｚｌｒｃｔｏｌｅｑａｓａＲｃｏ上ｈ期岫Ⅱ？ｊ璺ｔ主船ｃｎ吐ｃ吐ｌｚ０ｆｚａｈｂ５４２ｆｒ血ｌ扫ｏ５４７ｌ妇町ｓａｐｉｅｎｓ伪Ⅱ日衄，５４９ｏｒ，ｚｉａ８王ａ￡ｉｐｅｏ１４９６１ａ６２ｅ６３０６４０６ＳＯＦ＇ｕｎｄｕｌｕｓ＆ｅｔｎｚｏｃ工ｉ￡ⅡＦｆＩｉ王１５９２Ｄａｔ吐ｏｊ℃ｚｉｏｉｚｅｂｚａｆ．．１ｓｈ＿，￥９４Ｒｔ田∞ｄ０２丑ｚ§ｒⅡ＃｜４ｚｂａｔ±嚷ｄｚ毪＿５９２ｏｒｙｃｔｏｌａｇｕ＃ｃｕｎＩｃａｌｕｓｆ∞ｍ５９２Ｏｎｃｏｒｈｙａｃｈｕｓｚ睁，ＪＬｉｓｚｆＪａｉｎｂｏ￥９７丑酗∞ｓａｐｉｅｎｓｆｈｎ砒ｎＪ５９８ｏｒｙｚ立ａｓ２ａ匕印ｅ＃ｉ９９图３’４青鲻鱼（Ｏｒｙｚｉａｓｌａｔｉｐｅｓ）Ｎａ＋．Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅａ基因部分氨基酸序列与人ｍＣ０９４８０１）、海鲷ｒＡＹ５５３２０５）、兔子（ＡＦ２３５０２４）、虹鳟（ＡＹ３１９３９０）、底鲻（ＡＹ０５７０７２）及斑马鱼（ＡＹ００８３７５）Ｎａ＋．１（十．ＡＴＰａｓｅａ的氨基酸序列比对图。Ｆｉｇ．３－５Ｍｕｌｔｉｐｌｅｓｅｑｕｅｎｃｅａｌｉｇｎｍｅｎｔｏｆｔｈｅｐａｒｔｉａｌａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆｔｈｅｍｅｄａｋａｒｏｒｙｚｉａｓｌａｔｉｐｅｓ）Ｎａ。．Ｋ‘ＡＴＰａｓｃａｗｉｔｈｔｈｏｓｅｏｆｚｅｂｒａｆｉｓｈ（Ｄａｎｉｏｒｅｒｉｏ，ＡＹ００８３７５），ｋｉｌｌｆｉｓｈ（Ｆｕｎｄｕｌｕｓｈｅｔｅｒｏｃｌｉｔｕｓ，ＡＹ０５７０７２），ｒａｉｎｂｏｗ（Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓｎｙｋｉｓｓ，ＡＹ３１９３９０），ｒａｂｂｉｔ（Ｏｒｙｃｔｏｌａｑｕｓｓａｒｂａ，ＡＦ２３５０２４１，Ｓｐａｒｕｓｓａｒｂａ（Ｒｈａｂｄｏｓａｒｇｕｓｓａｒｂｕ，ＡＹ５５３２０５）ａｎｄｈｕｍａｎ（Ｈｏｍｏｓａｐｉｅｎｓ，ＢＣ０９４８０１）．工０Ｚｏ３０畦ｏＳ０６０．．．．１－．．．１．．．．１．．．．Ｉ．．．．Ｉ．．．．Ｉ．．．．１．．．．Ｉ．．．．Ｉ．．．．Ｉ．．．．１．．．．１１强ＣＡＧＣＡＡＡＣＡＢＴＴＧ阻ＣＧＣＡＴＣＣＡＡＧＴＴＴ６ＡＧＡＡＣＴＢＣＣＣＡＢＣＴＧＡＡＣＣＣ６ＣＡ强ＣｔＡＣＤＳＫ０ＬＤＡＳＫＦＥ辩ＣＰＡＥＰ曼ＤＹ７０８０９０１００１１０１２０．．．．Ｉ－－．．Ｉ．．．．Ｉ．．．．１，．．．Ｉ．．．．Ｉ．．．．Ｉ．．．．Ｉ．．．．Ｉ．．．．１．．．．１．，．．１６１ＡＡＢ晤ＧＣ强６ＢＴＡＣＡＣＴＢＧＡＴ强ＣＡＡＣ６ＣＴＤＧＴＢＴＴＡＧＧＡＡＡＧＣＡＴ６ＴＣＧＣＴＴＣＴＣ阻ＢＢＫＥＲＧＴＬＤＤＮＡ矗ＶＲＫ＾ＣＲＦＳＲ１３０１４０１ＳＯ１６０１７０１８０，．．一Ｉ－－．．１．．．．１．．．．１．．．．Ｉ，．．．Ｉ．．．．Ｉ．．．．Ｉ．．．．Ｉ．．．．Ｉ．．．．Ｉ．．．．Ｉ１２１ＡＣＣＣＴＧＣＴＣＧＢＣＣＣＣＴＧＴＴＣＣＢＢＴＴＴＡＥ趣ＧＪＢＡＴＧＡＡＡＣＴＴＴＴＧＢＴＴＴＣＡ马Ａ强Ｃ６ＢＣＡＡＡＴＬＬ０ＰＣＳＧＬＥＤＥＴＦ０ＦＫＤ６Ｋ工９０２００２１０２２０２３０２４０．．．．１．一．．Ｉ．．．．Ｉ．．．．Ｉ．．．．１．．．．Ｉ．．．．Ｉ．．，，Ｉ．．．．Ｉ．＋．．Ｉ．．．．Ｉ．．．．Ｉ１８１ＣＣ６ＴＧＴＢＴＣＡＴＴＢＴＧＡＡＢＣＴＴＡＡＣＡＢ阻ＴＴＢＴＣ蛆ＣＴＴＴＣＧＴＣＣＡＡＢＢＣＣＴＣＣＣＴＣＣＴＣＣｐＣＶ工ＶＫＬＮＲＩＶＮＦＲｐＲＰｐＳ￡第三章基因克隆与序列分析２１２Ｓ０Ｚ６０２７０２８０２９０３００２ｑＩＡＡＣ弧ＣＡＧＣＡＴＣＣＣＴ呲弘ＧＧＣＴＴＢＢＣＣ西舀西ＢＢＴＢＣＡＧＣＣＣＡＡＴＣＴ吼ＴＣＣＣＣＣＴＢＴＴＣ珏ＤＳＩＰＥＥＡ班ＰＫＶ－－一．Ｉ，．－?Ｉ?．．．１??一．Ｉ．－．－１．．－－１．．－．１－．．一１．．．．１．．．，Ｉ．．．．Ｉ．．．．Ｉ０ＰＩ口Ｌ工ＰＬＦ，－?－Ｉ一，?一Ｊ?．ｔ．Ｊ?…Ｉ．一．＋Ｉ．．一．Ｉ．．．．Ｊ．，．，Ｊ．．．．Ｉ．．．．Ｉ．．．．Ｉ．．．．Ｉ３０１ＣＴＮＫＲＥＥＤＡＤＫ１０Ｅ工ＫＹＶＧＩ３１０３ＺＯ３３０３４０３５０３６０ＴＧＣＡＣＣＡＡＣＡＡＧＣＢＡ强Ｇ强Ｇ吼ＣＧＣＴ吼ＴＪＵ岫ＴＣＧＧＧ强ＧＡＴＣ蛆ＧｔＡＣＴＡＣ６ＢＣＡＴＡ，．．．１．．．．Ｉ…．ＮＣ０Ｆ３７０３６１她ＣＧＢＢＢＧＣＴＴＣＣＣ图３－５青鳓鱼（０，）２船ｓｌａｔｉｐｅｓ）Ｎａ＋．Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅＢ基因的部分ｍＲＮＡ序列和相应氨基酸序列。Ｆｉｇ．３—６Ｐａｒｔｉａｌｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆｔｈｅｍｅｄａｋａ（ＯｒｙｚｉａｓｌａｔｉｐｅｓｌＮａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ８ｍＲＮＡ，３．３青鳝鱼鳃内Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅＢ基因克隆和序列分析如图３—６所示，本文克隆了３７４个碱基的基因序列，对应１２４个氨基酸，并对基因序列和氨基酸序列迸行比对和证实。ＳｅｑｕｅｎｃｅＩｄｅｎｔｉｔｙＭａｔｒｉｘ分析发现，青鲻鱼Ｎａ＋．Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅＢ氨基酸序列和海鲷（Ｒｈａｂｄｏｓａｒｇｕｓｓａｒｂａ，ＡＡＴ４８９９４）Ｎａ＋一Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ１３氨基酸序列有７４％相同，与斑马鱼（Ｄａｎｉｏｒｅｒｉｏ，ＡＡＧ３０２７３）Ｎａ＋一Ｋ－一ＡＴＰａｓｅＢ氨基酸序列有６８％相同，与欧洲鳗鲡１３氨基酸序列有６７％相同。９０】００１１０ｌ，ｎ（Ａｎｇｕｉｌｌａａｎｇｕｉｌｌａ，ＣＡＡ５３７１５）Ｎａ＋一Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ７０８０ＤⅢｄＤｚｅｚｉｏｆｚ∞ｒａ＆ｌｈＪｆ扫ｅｄ—ｄ睦ｄＪｏｚ，ｚｉｄｓ１ａｔｉｐ４Ｆ３“ＫＰＴｙＯＤ２“”““””。““５”１。“７”。”“１。”。一：：￥零：１２ｌ９口越ｉｏｚｅｒｏ（ｚｅｂｚａ．Ｃ－ｉ－ｚｈｌＯ四Ｚｉａｓ】ａｔｉｐ髓ｆｍｄ，ａｌｃａＪ蜜枣ｉ孽：随垂逝麟蠹融！瓣一＋－－孽Ｉ－霾－－ｌＩ重．．酒．．Ｉｍｅｄａｋａ（Ｏｒｙｚｉａｓｌａｔｉｐｅｓ）ＮａＤ越ｏｌａａｐｅｓ）Ｎａ＋＿Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ８基因的部分氨基酸序列与斑马鱼ｆ日∽扔ｒｅｒｉｏ，ＡＡＧ３０２７３）Ｎａ＋．Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅＢ基因氨基酸序列比对图．Ｆｉｇ．３－７Ｍｕｌｔｉｐｌｅｓｅｑｕｅｎｃｅａｌｉｇｎｍｅｎｔｏｆｔｈｅｐａｒｔｉａｌａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆｔｈｅ。一Ｋ’－ＡＴＰａｓｅ１３ｗｉｔｈｚｅｂｍｆｉｓｈ（Ｄａｎｉｏｒｅｒｉｏ，ＡＡ０３０２７３）．图３－６靴（ＯｒｙｚｉａｓＤｌ】曙ｊ—ｉ，ｔａｒ．ｉｏｎ＝０糖越＾ＪｚｅｚＪ．ｏ扭曲ｎ￡ｉ●妇Ｊ１８１６６３．４青鲐鱼鳃内ＧＲ基因克隆和序列分析本文克隆了４８９个碱基的ＧＲ基因序列，对应１６３个氨基酸，对基因序列和氨基酸序列进行了（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｂｌａｓｔ）比对和证实（图３＿８）。ＳｅｑｕｅｎｃｅＩｄｅｎｔｉｔｙＭａｔｒｉｘ分析发现，青鲻鱼ＧＲ与欧洲黑鲈（Ｄｉｃｅｎｔｒａｒｃｈｕｓｌａｂｒａｘ，２２青鲻鱼鳃内Ｎａ‘＿Ｋ。－ＡＴＰａｓｅ基因的克隆及皮质醇对其表达的影响ＡＡＴ４１６２７）ＧＲ氨基酸序列有９３％相同，与斑马鱼（Ｄａｎｉｏｒｅｒｉｏ，ＢＡＥ９２７３７）ＧＲ氨基酸序列有８５％ｋｌｌ，Ｈａｐｌｏｃｈｒｏｍｉｓｂｕｒｔｏｎｉ（Ａｓｔａｔｏｔｉｌａｐｉａｂｕｒｔｏｎ，ＡＡＭ２７８８７）ＧＲ氨基酸序列有９３％相同，与虹鳟鱼（Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓｍｙｋｉｓｓ，ＡＡＲ８７４７９）ＧＲ氨基酸序列有８５％相同，与褐鳟鱼（Ｓａｌｍｏｔｒｕｔｔａ，ＡＡＷ５６４５３）的ＧＲ氨基酸序列有７７％相同。１ＧｇＣＴＢＴＣＡＣ强ＣＢＢＣＢＴＣＣｔＡＡＣＣＴＢＣＢＢＣＡ６ＣＴＢＣＡＡＡＢＴＣＴｔＣＴＴＣ矗Ａ髓强ＢＣＡ６ＴＢ嗽ＢＢＣＣＡＢｃＡＴ触ＴｆＡＣＣＴＧＣＨＹ０ＶＬＴＣ６ＳＣＫＶＦＦＫＲＡＶＥ００ＨＮｉＬａ１ＧＴＧＣＧＣＴＧ强ＡＧ６矗ＡＣ强ＣＴＢＣＡＴＴＡＴＡ强ＣＡＡＧＡｔＣＣＢＢＣ唰∞ＡＡＡＡＣＴＢＣＣＣＡＢＣＡＴ６ＣＣＧＣＴＴＣＣＧＣＡＡＧＴＢＴＣＴ强ＣＡ６ＲＮＤＣＩＩＤＫＩＲＲＫＮＣＰ＾ＣＲＦＲＫＣ。Ｌ，１６１Ｔ６ＢＣＣＢＢＣＡＴ吼ＡＣＣＴＢ呲ＢＣＴＣＢＣＡ舀ＡＡＣＣＡＡ强ＡＢＴＴ吼ＡＣＣＢＴＴＴ强ＡＢＧＢＣＴ６ＣＣＡ瞰ＣＡＢＣＡＡＣＣＣＧＣＣＡ强６Ｈ＾０ＨＷＬＥ＾ＲＫｊＫＫＬＷＲＬＸＧｅ０Ｎ皇ＮｐＰＥ２５０Ｚ６０２７０２８０２９０３００３１０３２０２４１ＡＴＧＡＴＣＣＣＴＴＣＡＣＣＴＣＣＡ６Ｔ嗽ＢＢＣＣＣＢＣ霉ＣＡＣＴＴＢｔｆＣＣＣＡＡＡＴｏＣＡＴ６ＣＣ６ＣＡＢＣＴＢＢＴＣＣＣＣＡＣＣＡＴＢＣ豫ＴＣＣＣＴＨＩＰｓＰＰＶＥｚＲｓＬＶＰＫＣＨＰ０ＬＶＰＴＭＬｓＬ３３０３４０３．５０３６０３７０３８０３９０４００３２１６ＣＴＢ呲ＢＣＣＡ到ｌＢ阻ＢＣＣ她ＣＡＣＴＣＴＣＴＡＣＢＣＣＢ６Ｃ豫Ｔ强ＣＡＣＣＡＣＣＣＴＢＣＣＴ鼢ＣＡＣＣＴＣＣＡＣＣＣＧＣＣＴＣＡＴ∞。ＣＣ零ＬＫ＾ＩＥＰＤＴＬｉ！÷ＹＤＳＴＬｐＤＴＳＴＲＬＨＴ４０１ＣＴＣＴ嗽ＴＡＧＧＣＴＢＢＢＣＢＢ６Ｃ强ＣＡＢＢＴＣＡＴＣＴＣｔＧＣＴＢＴＢＡＡ６Ｔ６６６ＣＣＡＡ６ＧＣＴＣＴＴＣＣＡＧＧＧＴＴＣＡＧＡＡＡＣＣＴＳＣＡＣＳＬＮＲＬ‘０Ｒ０ＶＩＳｎＶＫＶ＾ＫＡＬＰ０ＦＲＸＬ蔓ｑ８ｌＣＴＢＩ阻Ｔ强ＬＤ图０．７青鳓鱼（Ｄ，）ｚｉ口５ｌａｔｉｐｅｓ）ＧＲ基因的部分ｍＲＮＡ序列和相应氨基酸序列。Ｆｉｇ．３—８Ｐａｒｔｉａｌｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆｔｈｅｍｅｄａｋａ（Ｏｒｙｚｉａｓｌａｔｉｐｅｓ）ＧＲｍＲＮＡ．誊嚣瓢４ｍａ，０７ａｚｔ￥ｙｔＡＥｘ＇鬟ＯＤｘ；Ｄ，ＳＣｎ一ＶＬＴＣＩ熏嬲ｎＫＨｂＴＰ：ｏＧ黑熏嚣９６黼Ｉ｛Ｉ．］ＰＧ＾ｔｔａｔｏｔｉｌ田垃ａ厶Ⅱｆｔ讲ｌｌ‘丑＆ｐ１Ｑ啪曲Ｆｔ曲ｎＪ玛ｒ上“，３ｓｓＡＰ§ＫＨｓｓａｌＪ∞ｔｉ诅‘ｂＪ一￡ｒｏｎｔ，１ｄｔｉｐｅ?ｆ删时ａＪ世山■卫＊?Ｕ薹崔盈越■王■衅３６５１ｓＳＰＴＴｍｃＩｃＬＶｃｓＤＢＡｓ瞄出盥叠弘Ｕ墨嗣薯越■里薯幽ｓ６ｓＡｓ蚴■∞３墨墨盟Ｉ弘匾譬冒甾■幽盥Ｚｉ■８９ｗＲｎＲｑ“ＴｏｃＬ、ｒｃｓＤＥＡｓ瞄出鹭【衅Ｕ基奠蕾正业■童誓攀ⅫＲ剐＊ｑ“ｓ拙ｆｓｓｔｑ￡Ｋｓ６：Ｄｊｃｅｎ￡姐ｚｃｈｕＪ１曲皿ｘ（Ｅ蛐ｏｐＡｓｔａｔｏｔｉｌａｐｉａｂｎｆ￡眦门却１４５６４５６４２９Ｏｎｃｏｘｈｙ丑ｃｈｕｓ日雄ｉ，ｔ５ａｌｍｏ￡埘ｔｔａＣｘａ扭ｂｏ（脚ｚｊａＦｆｂｒｏｗｎｔｚｏｕｔ，４２５２５１ａｎｐｅＦ“峙ｄ?≈ｔｄＪ第三章基因克隆与序列分析ｎｉｃ∞ｔｎｚ℃Ａｎ，１ａｂｊ缸（ＮｕＪｒｏｐｍ￡ｄ协ｔｉｌｄｐｌａＤｚｌｆ￡眦ａ却１Ｏｎｖ－ｏｘ＿｜ｋｌ，＇ｚｍｈｕｍ＿，ｌｉＩｌ‘ｚａｉｎ的５ｄ１脚ｔ埘ｔｔ：ｄ西ｚ口蛐ｔｔ棚ｔＪｏｆｎｄ．＿ｔ●１ａ￡ｉｐ凹０岫血ｔａ，嘲黼；黼ａ、Ｎａｎｉｃ曲￡地ｒｃｈｔ珥１＾ｂ』—ａｒ知ｔａｔｏｔｉｌａｐ童ａｂｎｒ￡皿ｉ口‘印ｉｃｈｃｏｚ＾，ｎｃｈＨ口目，量ｉ，ｔ（ｘａＪｔｎｂＯｆＦⅡｚｊｏｐ＜姊ｚｉ矗，１４ｔｉ．‘旧＿‘ｈｂｄ—ｉ‘ｄ，ｓ●１ａｏ啪ｔｔ４●ｂ』ｏ＿ｍ￡ｚＤＨｔ，图３．８青童｜辱鱼ｆｏｒｙｚｉａｓｌａｔｉｐｅｓ）ＧＲ部分氨基酸序列与欧洲黑鲈（ＤｉｃｅｎｔｒａｒｃｈｕｓｆⅡ６ｒ“，ＡＡＴ４１６２７）斑马鱼（Ｄａｎｉｏｒｅｒｉｏ，ＢＡＥ９２７３７）、Ｈａｐｌｏｃｈｒｏｍｉｓｂｕｒｔｏｎｉ（／ｌｓｔａｔｏｔｉｌａｐｉａｂｕｒｔｏｎ，ＡＡＭ２７８８７）、虹鳟鱼（Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓｍｙｋｉｓｓ，ＡＡＲ８７４７９）和褐鳟鱼（Ｓａ／ｍｏｔｒｕｔｔａ，ａａｗ５６４５３）的ＧＲ氨基酸序列比对图．Ｆｉｇ．３．９Ｍｕｌｔｉｐｌｅｓｅｑｕｅｎｃｅａｌｉｇｎｍｅｎｔｏｆｔｈｅｐａｒｔｉａｌａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆｔｈｅｍｅｄａｋａ（Ｏｒｙｚｉａｓｌａｔｉｐｅｓ、ＧＲｗｉｔｈｔｈｏｓｅｏｆｚｅｂｒａｆｉｓｈ（Ｄａｎｉｏｒｅｒｉｏ，ＢＡＥ９２７３７ｌＨａｐｌｏｃｈｒｏｍｉｓｂｕｒｌｏｎｉ翻ｓｔａｔｏｔｉｌａｐｉａｂｕｒｔｏｎ，ＡＡＭ２７８８ｎ，ｒａｉｎｂｏｗｔｒｏｕｔ（Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓｍｙｋｉｓｓ，ＡＡＲ８７４７９），ａｎｄｂｒｏｗｎｔｒｏｕｔ（Ｓａ／ｍｏｔｒｕｔｔａ，ＡＡＷ５６４５３）．３．５本章结论本文将生物信息学和分子生物学技术结合，克隆得到青鳝鱼Ｎａ＋．Ｋ＋一ＡＴＰａｓｅ＋．Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅＢ和ＧＲ三个基因的序列片段，并经过分析得到证实。