(3)细胞分裂素类(cytokinin)包括6-BA(6-苄基氨基嘌呤)、Kt(kinetin激动素)、n(zeatin玉米素)等。其中Zt活性最强，但非常昂贵，常用的是6-BA。
细胞分裂素作用：①诱导芽的分化促进侧芽萌发生长，当组织内细胞分裂素／生长素的比值高时，诱导愈伤组织或器官分化出不定芽。②促进细胞分裂与扩大。③抑制根的分化。因此，细胞分裂素多用于诱导不定芽的分化、茎、苗的增殖，而避免在生根培养时使用。
5.培养材料的支持物 琼脂(agar) 在固体培养时琼脂是最好的固化剂。琼脂能溶解在热水中，成为溶胶，冷却至40℃即凝固为固体状凝胶，溶解于90℃以上的热水。 6．抗生物质 抗生物质有青霉素、链霉素、庆大霉素等，用量在5-20mg／L之间。添加抗生物质可防止菌类污染，
7．活性炭 可以吸附外植体产生的致死性褐化物；一般为0.1％-0．2％。 三、培养基的选择
（一）单因子试验。各项条件和因素都维持在一般水平上，只变动一个因子，以找出这一因子对试验影响和影响的程度。 （二）多因子试验。
（三）逐步添加和逐步排除的试验方法 （四）广谱试验法
第二节、培养基的制备
母液的配制和保存 称量 溶解 定容 分装 标签 保存。
母液种类 成分 规定用量 扩大 (mg/L) 大量元素 KNO3 NH4NO3 MgSO4.7H2O KH2PO4 CaCI.2H2O 微量元素 MnSO4.4H2O ZnSO47H2O H3BO3 KI
称取量 (mg) 38000 33000 7400 3400 8800 母液定容 体积(ml) 100 配1LMS培养基吸取量(ml) 50 倍数 20 1900 1650 370 170 440 22.3 8.6 6.2 0.83 100 2230 860 620 83 1000 10 4
Na2MoO4.2H2O 0.25 CuSO4.5H2O CoCI2.6H2O 铁盐 Na2-EDTA FeSO4.7H2O 有机物 烟酸 甘氨酸 VB VB 肌醇 0.025 0.025 37.3 27.8 0． 5 2．0 0． 1 0． 5 100 50 100 25 2.5 2.5 3730 2780 25 100 5 25 5000 500 10 1000 10 [自学指导与训练方案]
复习思考题：
1、培养基的种类及特点有哪些？ 2、培养基一般包括哪些基本成分？如何配制？ 3、如何选择合适的培养基？
4、用于植物组织培养的植物生长调节物质主要有哪两种？它们在组织培养中各起什么作用？
作 业： 1、MS培养基配制过程。
2、75%乙醇的配制 3、BA和NAA的配制。
自学指导：培养基的选择试验。 参考文献
1、颜昌敬. 植物组织培养手册.上海：上海科技出版社，1990 2、谭文澄. 观赏植物组织培养技术.北京：中国林业出版社，2000
3、李浚明编译．植物组织培养教程[第2版]．北京：中国农业大学出版社，2004
[单元章节]
第三章 外植体的选择与灭菌方法 [教学目的]
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熟练掌握组织培养相关的灭菌方法，无菌操作技术和外植体的选择与灭菌的方法
步骤，掌握污染原因及采取的对策。
[重点难点]
消毒概念 灭菌方法 无菌操作 污染
[教学方法]
启发式；讲授；多媒体课件，
[教学时数]
2课时。
[教学内容]
一 外植体的选择 （一）外植体的部位
（二）取材季节 对大多数植物，应在其生长开始的季节。
（三）器官的生理特点和发育 幼年组织比老年组织具有较高的行态发生能力。 （四）外植体的大小 茎段长0.5cm，叶片面积5mm2。 二、外植体的消毒方法
（一）常用消毒剂 常用的有0.1%升汞溶液。70-75%酒精。 （二）外植体的灭菌方法 1、茎段，茎尖及叶片的消毒 2、果实和种子的消毒 3、根及地下部器官的消毒
4、花药的消毒
植物材料必须经严格的表面灭菌处理，再经无菌操作手续接到培养基上，这一过程叫做接种。接种的植物材料叫做外植体。
首先，把材料切割成适当大小，即灭菌容器能放人为宜。置自来水龙头下流水冲洗几分钟至数小时，洗时可加入洗衣粉清洗。 第二步要在超净台用70%-75%酒精浸10-30s。
第三步是用灭菌剂0.1%升汞处理5-10 min。升汞是由重金属汞离子来达到灭菌的； 第四步用无菌水涮洗4-6次，每次不少于3min，以尽量去除残毒。 三、污染的原因及对策
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污染指：组培过程中培养基和培养材料滋生杂菌导致培养失败现象。 1、污染的原因
外植体带菌，培养基灭菌不彻底，操作员不遵守操作规程等。 （1）细菌污染 在接种后1-2天可发现，菌斑呈粘液状。
（2）真菌污染 在接种3天后可发现，污染部分长有不同颜色的霉菌。 2、污染的预防措施
（1）将取的枝条用水冲干净后插入自来水中使其抽枝，用新抽的枝作外植体。 （2）晴天中午到下午采样 （3）培养基加抗生素
（4）操作人员严格遵守操作规程接种 （5）培养基及其用具灭菌要彻底 四、培养条件
大多数植物组织培养 都是在23-27 ℃之间进行，一般采用25土2℃。光照强度一般为1000—6000LX。最常用的周期是16h的光照，8h的黑暗。容器内湿度一般100%， 环境的相对湿度一般要求70％-80％的相对湿度。培养基pH值大多在5-6.5左右，一般培养基皆要求5.8。 [自学指导与训练方案]
复习思考题：
1、灭菌和消毒有何区别？
2、常用的灭菌方法有哪几种？ 3、接种材料如何进行消毒处理？
5、组织培养中如何尽量避免出现污染？ 6、植物组织培养技术主要包括哪些环节？各环节的主要工作内容是什么？ 训练：
1、不同消毒剂消毒剂处理效果试验。 2、 污染情况调查。 参考文献
1、谭文澄. 观赏植物组织培养技术.北京：中国林业出版社，2000
2、李浚明编译．植物组织培养教程[第2版]．北京：中国农业大学出版社，2004
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