（4）为了纯化获得的H细菌，在微生物的实验室培养过程中，关键是无菌操作；实验结束后，为避免微生物污染环境和操作者，使用过的培养基应该进行灭菌后才能倒掉． 故答案为：

（1）氮源、碳源

（2）恒温培养箱 等量无菌水

（3）种群 45 多 当两个或多个细胞连在一起时在平板上观察到的是一个菌落 （4）无菌操作（防止杂菌污染） 灭菌

【点评】本题考查微生物的培养与应用的相关知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识的网络结构能力．

12．Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞．科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗．其技术流程如图：

（1）步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的细胞核，此技术属于细胞工程范畴．

（2）步骤②中，重组胚胎培养到囊胚期时，可从其内细胞团中分离出ES细胞．培养ES细胞时，为满足细胞代谢的需要，可在培养基中加入的天然成分是动物血清．

（3）步骤③中，在构建含有Rag2基因的表达载体时，可以根据Rag2基因的脱氧核苷酸序列设计引物，利用PCR技术扩增Rag2基因片段．并且同时用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段，这样做的目的是：防止DNA片段的自身环化．为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有HindⅢ和PstⅠ酶的酶切位点． （4）为检测Rag2基因的表达情况，可提取治疗后的小鼠骨髓细胞的蛋白质，用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验．

【考点】人体免疫系统在维持稳态中的作用．

【专题】图文信息类简答题；基因工程；克隆技术；胚胎工程．

【分析】1、动物核移植的概念：将动物的一个细胞的细胞核移入一个去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体．

2、胚胎干细胞简称ES或EK细胞，来源于早期胚胎或原始性腺（即囊胚期的内细胞团）． 3、在基因工程中，目的基因和质粒需要用同种限制酶进行切割，形成相同的黏性末端，再用DNA连接酶连接成重组质粒． 4、目的基因分子水平上的检测：

①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因﹣﹣DNA分子杂交技术； ②检测目的基因是否转录出了mRNA﹣﹣分子杂交技术；

③检测目的基因是否翻译成蛋白质﹣﹣抗原﹣抗体杂交技术．

13

【解答】解：（1）核移植是将体细胞核移植到去核的卵母细胞中，所以实验前要去除卵母细胞的细胞核．此技术属于细胞工程范畴．

（2）重组胚胎培养到囊胚期时，可从其内细胞团中分离出ES细胞．培养ES细胞时，为满足细胞代谢的需要，可在培养基中加入的天然成分是动物血清．

（3）步骤③中，在构建含有Rag2基因的表达载体时，可以根据Rag2基因的脱氧核苷酸序列设计引物，利用PCR技术扩增Rag2基因片段．并且同时用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段，这样做的目的是：防止DNA片段的自身环化．为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有HindⅢ和PstⅠ酶的酶切位点． （4）为检测Rag2基因的表达情况，可提取治疗后的小鼠骨髓细胞的蛋白质，用抗Rag2 蛋白的抗体进行杂交实验． 故答案为：

（1）细胞核 细胞

（2）囊胚 内细胞团 动物血清

（3）脱氧核苷酸序列 PCR 防止DNA片段的自身环化 HindⅢ和PstⅠ （4）抗Rag2 蛋白的抗体

【点评】本题以基因治疗的流程图为载体，考查了基因工程、细胞工程以及胚胎工程等方面的知识，难度适中．考生要能够识记细胞核移植的过程；识记囊胚包括内细胞团和滋养层两部分；明确基因工程中质粒和目的基因需要利用同种限制酶进行切割；掌握目的基因检测和鉴定的一般方法等．

14