选择题(单选或多选)
1.因研究重组DNA技术而获得诺贝尔奖的科学家是( )
(a)A．Kornberg (b)W．Gilbert (c)P．Berg (d)B．McClintock 2.第一个作为重组DNA载体的质粒是( ) (a)pBR322 (b)ColEl (c)pSCl01 (d)pUCl8
3.关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( )不太恰当。 (a)由作用于同一DNA序列的两种酶构成
(b)这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶
(c)这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰 (d)不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统 4.Ⅱ型限制性内切核酸酶： ( )
(a)有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列 (b)仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供 (c)限制性识别非甲基化的核苷酸序列 (d)有外切核酸酶和甲基化酶活性
(e)仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供 5.下面有关限制酶的叙述哪些是正确的?( ) (a)限制酶是外切酶而不是内切酶
(b)限制酶在特异序列(识别位点)对DNA进行切割
(c)同一种限制酶切割DNA时留下的末端序列总是相同的
(d)一些限制酶在识别位点内稍有不同的点切割双链DNA，产生黏末端 (e)一些限制酶在识别位点内相同的位置切割双链DNA，产生平末端 6.第一个被分离的Ⅱ类酶是： ( )
(a)EcoK (b)HindⅢ (c)HindⅡ (d)EcoB
7.在下列进行DNA部分酶切的条件中，控制那一项最好?( ) (a)反应时间 (b)酶量 (c)反应体积 (d)酶反应的温度 8.在下列试剂中，那一种可以螯合Ca2+离子?( ) (a)EDTA (b)柠檬酸钠 (c)SDS (d)EGTA
9.在下列工具酶中，那一种可以被EGTA抑制活性?( )
(a)S1单链核酸酶 (b)末端转移酶 (c)碱性磷酸酶 (d)Bal 31核酸酶 10.限制性内切核酸酶可以特异性地识别： ( )
(a)双链DNA的特定碱基对 (b)双链DNA的特定碱基序列 (c)特定的三联密码 (d)以上都正确
11.下列关于限制性内切核酸酶的表示方法中，正确一项的是( )。 (a)Sau3A I (b)E．coRI (c)hind III (d)Sau 3A1 12.限制性内切核酸酶的星号活性是指：( )
(a)在非常规条件下，识别和切割序列发生变化的活性。 (b)活性大大提高 (c)切割速度大大加快
(d)识别序列与原来的完全不同
13．下面哪一种不是产生星号活性的主要原因?( ) (a)甘油含量过高 (b)反应体系中含有有机溶剂
(c)含有非Mg2+的二价阳离子 (d)酶切反应时酶浓度过低
14．关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( )不太恰当 (a)由作用于同一DNA序列的两种酶构成
(b)这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶
(c)这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰 (d)不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统
15．在长模板链的指导下引物延伸合成长的DNA互补链时应选用( ) (a)T4DNA聚合酶 (b)Klenow酶．
(c)大肠杆菌DNA聚合酶I (d)T7DNA聚合酶
16．末端转移酶是合成酶类，( ) (a)作用时不需要模板
2+
(b)在Ca的存在下，可以在突出的3，末端延长DNA链
2+
(c)在Ca的存在下，可以在隐蔽的3，末端延长DNA链 (d)上述说法有两种是正确的
17．在基因工程中，可用碱性磷酸酶( )
(a)防止DNA的自身环化 (b)同多核苷酸激酶一起进行DNA的5，末端标记 (c)制备突出的3，末端 (d)上述说法都正确 18．下列酶中，除( )外都具有磷酸酶的活性
(a)λ核酸外切酶 (b)外切酶Ⅲ (c)单核苷酸激酶 (d)碱性磷酸酶 19． 下列哪一种酶作用时需要引物? ( )
(a)限制酶 (b)末端转移酶 (c)反转录酶 (d)DNA连接酶 20．S1核酸酶的功能是( )
(a)切割双链的DNA (b)切割单链的RNA (c)切割发夹环 (d)以上有两项是正确的 21．Klenow酶与DNA聚合酶相比，前者丧失了( )的活性。
(a)5，--3，合成酶， (b)3，--5，外切酶 (c)5，---3，外切酶 (d)转移酶 22下面关于松弛型质粒(relaxed plasmid)性质的描述中，( )是不正确的 (a)质粒的复制只受本身的遗传结构的控制，而不受染色体复制机制的制约，因而有较多的拷贝数
(b)可以在氯霉素作用下进行扩增 (c)通常带有抗药性标记
(d)同严紧型质粒融合后，杂合质粒优先使用松弛型质粒的复制子
23． 基因工程中所用的质粒载体大多是改造过的，真正的天然质粒载体很少，在下列载体中只有( )被视为用作基因工程载体的天然质粒载体 (a)pBR322 (b)pSCl01 (c)pUBll0 (d)pUCl8 24． 下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大?( )
(a)质粒 (b)黏粒 (c)酵母人工染色体(YAC) (d) ?噬菌体 (e) cDNA表达载体 25. 松弛型质粒： ( )
(a)在寄主细胞中拷贝数较多 (b)可用氯霉素扩增
(c)一般没有选择标记 (d)上述(a)、(b)两项正确
26．Col El是惟一用作基因工程载体的自然质粒，这种质粒： ( ) (a)是松弛复制型 （b)具有，四环素抗性 (c)能被氯霉素扩增 (d)能产生肠杆菌素
27．同一种质粒DNA，以三种不同的形式存在，电泳时，它们的迁移速率是：( ) (a)OCDNA>SCDNA>LDNA (b)SCDNA>LDNA>OCDNA (c)LDNA>OCDNA>SCDNA (d)SCDNA>OCDNA>LDNA
28．pBR322是一种改造型的质粒，含有两个抗性基因，其中四环素抗性基因来自： ( ) (a)ColEl (b)Ri质粒 (c)pSCl01 (d)pUCl8
29．关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法最正确?( ) (a)在不同的宿主中具有不同的复制机制 (b)在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点 (c)在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶 (d)在不同的宿主细胞中具有不同的复制速率
30．能够用来克隆32kb以下大小的外源片段的质粒载体是( ) (a)charomid (b)plasmid (C)cosmid (d)phagemid 31．第一个作为重组DNA载体的质粒是( ) (a)pBR322 (b)ColEl (c)pSCl01 (d)pUCl8 32. Ti质粒：( )
(a)可从农杆菌转到植物细胞中 (b)作为双链DNA被转移
(c)在植物中导致肿瘤 (d)介导冠瘿碱的合成，作为细菌的营养物和植物的生长激素 (e)需要细菌的vir基因帮助转移 (f)在植物细胞中作为染色体外质粒
33．黏粒(cosmid)是一种人工建造的载体，( )
(a)它具有COS位点，因而可进行体外包装 (b)它具有质粒DNA的复制特性 (c)进入受体细胞后，可引起裂解反应 (d)进入受体细胞后，可引起溶源化反应 34．有两种确定核酸中核苷酸序列的方法：化学序列分析法(Maxam-Glbert)和酶学序列分析法(Sanger)。酶学测序法的基本原理／优点是：( ) (a)碱基与特殊染料间不同的相互作用
(b)一个合成引物的延伸和DNA修复合成的可靠终止 (c)限制性位点与DNA末端标记的相关性 (d)可同时对DNA双螺旋的两条链进行测序
(e)反应是DNA特异的，RNA不会带来干扰。这样既减少纯化步骤，也节约了开支。 35．关于cDNA的最正确的说法是：( )
(a)同mRNA互补的单链DNA (b)同mRNA互补的双链DNA (c)以mRNA为模板合成的双链DNA (d)以上都正确
36．用碱法分离质粒DNA时，染色体DNA之所以可以被除去，是因为：( ) (a)染色体DNA断成了碎片 (b)染色体DNA分子量大，而不能释放 (c)染色体变性后来不及复性 (d)染色体未同蛋白质分开而沉淀 37. 关于碱解法分离质粒DNA，下面哪一种说法不正确?( ) (a)溶液I的作用是悬浮菌体 (b)溶液Ⅱ的作用是使DNA变性 (c)溶液Ⅲ的作用是使DNA复性
(d)质粒DNA分子小，所以没有变性，染色体变性后不能复性
38. Clark做了一个有趣的实验，发现TaqDNA聚合酶可以不需要模板，在双链DNA的末端加一个碱基，主要是加( )
(a)dGTP (b)dATP (c)dCTP (d)dTTP
39．根据构建方法的不同，基因文库分为基因组文库、cDNA文库等。在下列文库中，( )属cDNA文库
(a) YAC文库 (b) MAC文库 (c) 扣减文库 (d) BAC文库
40．下面关于多克隆位点(multiple clone site,MCS)的描述，不正确的—句是( ) (a)仅位于质粒载体中 (b)具有多种酶的识别序列
(c)不同酶的识别序列可以有重叠 (d)一般是人工合成后添加到载体中 41．在cDNA技术中，所形成的发夹环可用( )
(a)限制性内切核酸酶切除 (b)用31外切核酸酶切除 (c)用S1核酸酶切除 (d)用51外切核酸酶切除 42．在DNA的酶切反应系统中，通常：( )
2+
(a)用SSC缓冲液 (b)加入Mg作辅助因子
(c)加入BSA等保护剂 (d)上述说法中，有两项是正确的 43． 黏性末端连接法，不仅操作方便，而且( )
(a)产生新切点 (b)易于回收外源片段 (c)载体不易环化 (d)影响外源基因的表达 44．在下列表型中，( )是基因工程上理想的受体菌表型
++*-----+++-(a)rmrec (b)rmrec (C)rmrec (d)rmrec
45．关于DNA接头在基因工程中的作用，下列说法中哪一项不正确?( ) (a)给外源DNA添加适当的切点 (b)人工构建载体 (c)调整外源基因的可读框 (d)增加调控元件 46．cDNA文库包括该种生物的( )
(a)某些蛋白质的结构基因 (b)所有蛋白质的结构基因 (c)所有结构基因 (d)内含子和调控区
47．下列关于建立cDNA文库的叙述中，哪一项是错误的?( ) (a)从特定组织或细胞中提取DNA或RNA (b)用反转录酶合成mRNA的对应单链DNA (c)以新合成的单链DNA为模板合成双链DNA (d)新合成的双链DNA甲基化
48．下列对黏性末端连接法的评价中，哪一项是不正确的? ( ) (a)操作方便 (b)易于回收片段
(c)易于定向重组 (d)载体易于自身环化，降低重组率
49．关于感受态细胞性质的描述，下面哪一种说法不正确?( ) (功具有可诱导性 (b)具有可转移性
(c)细菌生长的任何时期都可以出现 (d)不同细菌出现感受态的比例是不同的 50．下面关于用T4多核苷酸激酶标记5' 端制备探针的描述中( )是不正确的。 (a)既能标记DNA，又能标记RNA (b)既能标记双链DNA又能标记单链DNA
(c)只能标记突出的5' 端不能标记其他类型末端 (d)DNA或RNA必须有5'-OH的存在
51．Southem印迹的DNA探针( )杂交。 (a)只与完全相同的片段
(b)可与任何含有相同序列的DNA片段 (c)可与任何含有互补序列的DNA片段’．
(d)可与用某些限制性内切核酸酶切成的DNA片段 (e)以上都是
52． 用下列方法进行重组体的筛选，只有( )说明外源基因进行了表达。 (a)Southem印迹杂交 (b)Northem印迹杂交 (c)Western印迹 (d)原位菌落杂交
53．下列哪一个不是Southern印迹法的步骤?( ) (a)用限制酶消化DNA (b)DNA与载体的连接
(c)用凝胶电泳分离DNA片段 (d)DNA片段转移至硝酸纤维素膜上 (e)用一个标记的探针与膜杂交 54． 报告基因( )
(a)以其易于分析的编码序列代替感兴趣基因的编码序列 (b)以其易于分析的启动子区代替感兴趣基因的启动子区 (c)能用于检测启动子的活性 (d)能用于确定启动子何时何处有活性
55． 在利用lacZ失活的显色反应筛选法中，IPTG的作用是( ) (a)诱导宿主的α肽的合成 (b)诱导宿主的ω肽的合成 (c)作为酶的作用底物 (d)作为显色反应的指示剂
56. 切口移位是指在( )作用下，使( )带上放射性标记。 (a)DNA聚合酶I，RNA (b)DNA聚合酶I，DNA (c)DNA聚合酶Ⅲ，RNA (d)DNA聚合酶Ⅲ，DNA
57．用于核酸分子杂交的探针可以是放射性标记的( ) (a)DNA (b)RNA (c)抗体 (d)抗原
58．Southern印迹是用DNA探针检测DNA片段，而Northern印迹则是：( ) (a)用RNA探针检测DNA片段 (b)用RNA探针检测RNA片段 (c)用DNA探针检测RNA片段 (d)用DNA探针检测蛋白质片段 59．用免疫化学法筛选重组体的原理是( )
(a)根据外源基因的表达 (b)根据载体基因的表达 (c)根据mRNA同DNA的杂交 (d)根据DNA同DNA的杂交 60．随机引物标记探针，下列各项中哪一项是不正确的?( ) (a)双链DNA、单链DNA、RNA都是可以标记的 (b)不需要用Dnase I预处理 (c)反应时可用Klenow酶 (d)反应时可用DNA聚合酶1
61．在切口移位标记DNA探针时只能使用( )
(a)Klenow酶 (b)DNA聚合酶I (c)DNA聚合酶Ⅱ (d)DNA聚合酶Ⅲ 62．要对一双链的DNA分子进行31末端标记，可用( )
(a)Klenow酶 (b)DNA聚合酶I (c)T4DNA聚合酶 (d)T7DNA聚合酶 答 案:
1．c；2．c； 3．b； 4．b 5．b，C，d，e； 6．c； 7．b； 8．d；9．d； 10．B； 11．d； 12．a； 13．d； 14．b 15．d； 16．c；17．a，b；18．a；19．c；20．d；21．c；22．C； 23．b； 24．C；25．d；26．a，C，d；27．b；28．c； 29．b；30．a；31．c； 32．a,c,d,e， 33．a，b，c；34．b； 35．c；36．c； 37．d； 38．b；39．c；40．a；41．c； 42．a，b，c； 43．b； 44．b； 45．d； 46．a；47．a； 48．c； 49．c；50．b；51．c； 52．c； 53．b； 54．a,c,d；55．a； 56．b；57．a，b； 58．c；59．a；60．d；61．b； 62．c； 1、 基因工程操作的三大基本元件是【 】 I 供体 II 受体 III 载体 IV 抗体 V 配体 Ａ I + II + III Ｂ I + III + IV Ｃ II + III + IV Ｄ II + IV + V Ｅ III + IV + V
2、 根据当今生命科学理论，基因工程的用途是【 】
I 分离纯化基因 II 大量生产生物分子 III 构建新型物种 IV 提高基因重组效率 Ａ I + II + III Ｂ I + II + IV Ｃ I + III + IV Ｄ II + III + IV Ｅ I + II + III + IV
3、基因工程的三大理论基石是【 】 Ａ 经典遗传学、细胞生物学、微生物学 Ｂ 分子遗传学、分子生物学、生化工程学 Ｃ 动物学、植物学、微生物学
Ｄ 生物化学、生化工程学、化学工程学 Ｅ 生理学、仿生学、免疫学
4、根据基因工程的定义，下列各名词中不能替代基因工程的是【 】 Ａ 基因诱变 Ｂ 分子克隆 Ｃ DNA重组 Ｄ 遗传工程 Ｅ 基因无性繁殖
5、基因工程的单元操作顺序是【 】 Ａ 增，转，检，切，接 Ｂ 切，接，转，增，检 Ｃ 接，转，增，检，切 Ｄ 检，切，接，增，转 Ｅ 切，接，增，转，检
6、基因工程作为一种技术诞生于【 】 Ａ 上世纪 50 年代初 Ｂ 上世纪 60 年代初 Ｃ 上世纪 70 年代初 Ｄ 上世纪 80 年代初
Ｅ 上世纪 90 年代初
7、利用基因工程扩增基因是依据【 】 Ａ 基因定向重排 Ｂ 强化启动基因 Ｃ 增强子重组 Ｄ SD 顺序的存在 Ｅ 载体自主复制
8、下列有关基因的叙述，错误的是【 】 Ａ 蛋白质是基因表达的唯一产物
Ｂ 基因是 DNA 链上具有编码功能的片段 Ｃ 基因也可以是 RNA
Ｄ 基因突变不一定导致其表达产物改变结构 Ｅ 基因具有方向性
9、限制性核酸内切酶是由细菌产生的，其生理意义是 【 】 Ａ 修复自身的遗传缺陷 Ｂ 促进自身的基因重组 Ｃ 强化自身的核酸代谢 Ｄ 提高自身的防御能力 Ｅ 补充自身的核苷酸消耗
10、天然 PstI 限制性内切酶的来源是 【 】 Ａ Bacillus amyloliquefaciens Ｂ Escherichia coli Ｃ Haemophilus influenzae Ｄ Providencia stuartii Ｅ Streptomyces lividans
11、下列五个 DNA 片段中含有回文结构的是 【 】 Ａ GAAACTGCTTTGAC Ｂ GAAACTGGAAACTG Ｃ GAAACTGGTCAAAG Ｄ GAAACTGCAGTTTC Ｅ GAAACTGCAGAAAG 12、T 4 -DNA 连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段 DNA 片段连接在一起，其底物的关键基团是 【 】
Ａ 2' -OH 和 5' -P Ｂ 2' -OH 和 3' -P Ｃ 3' -OH 和 2' -P Ｄ 3' -OH 和 5' -P Ｅ 5' -OH 和 3' -P
13、下列有关连接反应的叙述，错误的是 【 】 Ａ 连接反应的最佳温度为 37 ℃
Ｂ 连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于 10% Ｃ 连接反应缓冲体系的 ATP 浓度不能高于 1mM Ｄ 连接酶通常应过量 2-5 倍 Ｅ DTT 可以维持连接酶的结构
14、若将含有 5' 末端 4 碱基突出的外源 DNA 片段插入到含有 3' 末端 4 碱基突出的载体质粒上，又必须保证连接区域的碱基对数目既不增加也不减少，则需用的工具酶是 【 】 I T 4 -DNA 聚合酶 II Klenow III T 4 -DNA 连接酶 IV 碱性磷酸单酯酶 Ａ III Ｂ I + III Ｃ II + III Ｄ I + II + III Ｅ I + II + III + IV
15、提高重组率的方法包括 【 】
I 加大外源 DNA 与载体的分子之比 II 载体分子除磷 III 连接酶过量 IV 延长连接反应时间
Ａ I + II
Ｂ I + II + III Ｃ I + III + IV Ｄ II + III + IV Ｅ I + II + III + IV
16、下列各组用于外源基因表达的受体细胞及其特点的对应关系中，错误的是 【 】 Ａ 大肠杆菌－繁殖迅速 Ｂ 枯草杆菌－分泌机制健全 Ｃ 链霉菌－遗传稳定
Ｄ 酵母菌－表达产物具有真核性
Ｅ 动物细胞－具有完善的蛋白质糖基化功能 17、基因工程的受体细胞必须具备 【 】
I 限制性缺陷 II 营养缺陷 III 感染寄生缺陷 Ａ I
Ｂ I + II Ｃ I + III Ｄ II + III Ｅ I + II + III
18、克隆菌扩增的目的是 【 】
I 增殖外源基因拷贝 II 表达标记基因 III 表达外源基因 Ａ I
Ｂ I + II Ｃ I + III Ｄ II + III Ｅ I + II + III
19、载体的功能是 【 】
I 运送外源基因高效进入受体细胞 II 为外源基因提供复制能力 III 为外源基因提供整合能力 Ａ I
Ｂ I + II Ｃ I + III Ｄ II + III Ｅ I + II + III
20、下列有关质粒分子生物学的叙述，错误的是 【 】 Ａ 质粒是共价环状的双链 DNA 分子
Ｂ 天然 质粒一般不含有限制性内切酶的识别序列 Ｃ 质粒在宿主细胞内能独立于染色体 DNA 自主复制 Ｄ 松弛复制型的质粒可用氯霉素扩增 Ｅ 质粒并非其宿主细胞生长所必需
21、带有多个不同种复制起始区的质粒是 【 】 Ａ 穿梭质粒 Ｂ 表达质粒 Ｃ 探针质粒 Ｄ 整合质粒 Ｅ 多拷贝质粒
22、多聚接头（ Polylinker ）指的是 【 】
Ａ 含有多种限制性内切酶识别及切割顺序的人工 DNA 片段 Ｂ 含有多种复制起始区的人工 DNA 片段 Ｃ 含有多种 SD 顺序的人工 DNA 片段 Ｄ 含有多种启动基因的人工 DNA 片段 Ｅ 含有多种特定密码子的人工 DNA 片段
23、载体质粒 pBR325 共有三个选择性标记： Ap r 、 Tc r 、 Cm r 。它们分别含有一个单一酶切位点： PstI 、 SphI 和 EcoRI 。若将一外源基因取代此载体上不含 Cm r 标记基因的 PstI-SphI 限制性 DNA 片段，那么用于转化子和重组子筛选的试剂应是 【 】 Ａ Ap Ｂ Tc Ｃ Cm
Ｄ Ap + Tc Ｅ Ap + Cm 24、经抗药性遗传标记法筛选出的转化体中，往往会出现无载体或无重组 DNA 分子的菌落，其原因很可能是 【 】 Ａ 标记基因发生突变 Ｂ 载体或重组分子不稳定
Ｃ 载体或重组分子整合入受体染色体中 Ｄ 载体空载
Ｅ 筛选药物诱导受体细胞产生抗性
25、鸟枪法克隆目的基因的第一步是随机或非随机切割外源 DNA ，其方法有 【 】 I 超声波处理 II 酶解 III 机械搅拌 Ａ III Ｂ I + II Ｃ I + III Ｄ II + III Ｅ I + II + III
26、强化基因转录的元件是 【 】 Ａ 密码子 Ｂ 复制子 Ｃ 启动子
Ｄ 内含子 Ｅ 外显子
27、pIJ486 是链霉菌的启动子探针质粒（如下图所示），其中 neo 和 tsr 分别为新霉素和硫链丝菌素的抗性基因。为了准确克隆和筛选具有启动子活性的外源 DNA 片段，最为理想的插入位点应是 【 】
28、酶切法鉴定重组体时，最常用的方法是：（D） A.用多种限制性酶将其切出 B.用S1核酸酶将其切出 C.用DNA酶将其切出
D.用重组时的限制性酶将其切出 E.用其它限制性酶将其切出
29、免疫印迹法筛选重组体的原理是：（E） A.根据载体抗性基因的表达 B.根据载体报告基因的表达 C.根据DNA与DNA的杂交 D.根据DNA与mRNA的杂交 E.根据外源基因的表达
30、关于PCR扩增停滞的原因有很多种，但下列各项中（）项不是主要原因。 A.底物（模板）过剩 B.dNTP的大量消耗 C.产物的聚集
D.非特异性产物的竞争性抑制
31、有关PCR的描述下列哪项正确：(ABC) A.polymerase chain reaction的字首缩写 B.1993年获诺贝尔化学奖 C.已广泛的应用于医学各学科 D.能够准确对扩增模板定量
32．“工程菌”是指（ c）
A．用物理或化学方法诱发菌类自身某些基因得到高效表达的菌类细胞株系 B．用遗传工程的方法，使同种不同株系的菌类杂交，得到的新细胞株系 C．用基因工程的方法，使外源基因得到高效表达的菌类细胞株系 D．从自然界中选取能迅速增殖的菌类
33．下列关于基因成果的概述，错误的是（a ） A．在医药卫生方面，主要用于诊断治疗疾病
B．在农业上主要是培育高产、稳产、品质优良和具有抗逆性的农作物 C．在畜牧养殖业上培育出了体型巨大、品质优良的动物 D．在环境保护方面主要用于环境监测和对污染环境的净化
34、在加热或紫外线照射下，可导致两条DNA链中间的氢链断裂，而核酸分子中所有的共价键则不受影响的称为（ ）。
A. DNA变性 B. DNA复性 C. DNA重组 D. DNA杂交 35、一般影响核酸变性的温度可选在（ ）。
A. 60—70℃ B. 70—80℃ C. 80—90℃ D. 90—100℃
36、关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下述描述中只有（）不恰当
A, 由作用于同一 DNA 序列的两种酶构成, B, 这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对 DNA 进行修饰 C, 不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统 D, 这一系统的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶
37、在分子生物学领域，重组 DNA 又称（）
A.酶工程 B.DNA 工程 C.细胞工程 D. 基因工程 38 下列哪种克隆载体对外源 DNA 的装载量最大（） A.酵母人工染色体（YAC) B.质粒C.λ 噬菌体 40、有关理想质粒载体的特点，正确的是（B）
A为线性单链DNA
B含有多种限制酶的单一切点 C含有同一限制酶的多个切点 D其复制受宿主控制 选 择:
1．科学家们经过多年的努力，创立了一种新兴的生物技术——基因工程，实施该工程的最终目的是（ ）
A．定向提取生物体DNA分子
B．定向对DNA分子进行人工“剪切” C．定向改造生物的遗传性状
D．在生物体外对DNA分子进行改造
2．下列哪项不是基因工程中用来运载目的基因的载体？（ ） A．细菌质粒 B．噬菌体
C、动植物病毒 D．细菌核区的DNA
3．基因工程中，常用的细菌、酵母菌等微生物作为受体细胞，原因是（ ） A．结构简单，操作方便 B．繁殖速度快 C．遗传物质含量少 D．性状稳定，变异少
4．质粒是基因工程中最常用的运载体，它的主要特点是（ ） ①能自主复制 ②不能自主复制 ③结构很小 ④蛋白质 ⑤环状RNA ⑥环状DNA ⑦能“友好”地“借居”
A．①③⑤⑦ B．②④⑥ C．①③⑥⑦ D．②③⑥⑦
5．在基因工程中用来修饰改造生物基因的工具是（ ） A．限制酶和连接酶 B．限制酶和水解酶 C．限制酶和运载体 D．连接酶和运载体 6．有关基因工程的叙述正确的是（ ） A．限制性内切酶只在获得目的基因时才用 B．重组质粒的形成在细胞内完成 C．质粒都可作运载体
D．蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料
7．不属于目的基因与运载体结合过程的是（ ） A．用一定的限制酶切割质粒露出黏性末端 B．用同种限制酶切割目的基因露出黏性末端 C．将切下的目的基因的片段插入到质粒切口处 D．将重组DNA导入受体细胞中进行扩增 8．科学家将含有人的 抗胰蛋白酶基因的DNA片段注射到羊的受精卵中，该受精卵发育的羊能分泌含 抗胰蛋白酶的奶。这一过程涉及（ ） ①DNA按照碱基互补配对原则自我复制 ②DNA以其一条链为模板合成RNA ③RNA以自身为模板自我复制
④按照RNA密码子的排列顺序合成蛋白质 A．①③ B．③④ C．①②③ D．①②④
9．实施基因工程第一步的一种方法是把所需的基因从供体细胞内分离出来，这要利用限制性内切酶。从大肠杆菌中提取的一种限制性内切酶ECORI，能识别DNA分子中的GAATTC序列，切点在G与A之间。这是应用了酶的（ ） A．高效性 B．专一性 C．多样性
D．催化活性受外界条件影响
10．基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的，在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是（ ） A．人工合成目的基因 B．目的基因与运载体结合 C．将目的基因导入受体细胞 D．目的基因的检测和表达
11．下列有关基因工程技术的叙述中正确的是（ ） A．重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶和运载体 B．所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列 C．选用细菌作为重组质粒的受体细胞是因为细菌繁殖快 D．只要目的基因进入了受体细胞就能成功实现表达 12．下列说法正确的是（ ）
A．DNA连接酶最初是从人体细胞中发现的 B．限制酶的切口一定是GAATTC碱基序列
C．质粒是基因工程中惟一用作运载目的基因的运载体
D．利用运载体在宿主细胞内对目的基因进行大量复制的过程可称为“克隆” 13．下列关于限制酶的说法不正确的是（ ）
A．限制酶广泛存在于各种生物中，微生物中很少分布 B．一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 C．不同的限制酶切割DNA的切点不同 D．限制酶的作用是用来提取目的基因
答 案1．C 2．D 3．B 4．C 5．A 6．D 7．D 8．D 9．B 10．C 11．C 12．D 13．A 选 择：
1．1982年，美国科学家将人的生长激素基因转移到了小鼠体内，得到了超级小鼠，此转基因技术的受体细胞是（ ）
A．卵细胞 B．去核卵细胞 C．受精卵细胞 D．乳腺上皮细胞 2．下列实践与基因工程无关的是（ ） A．选择“工程菌”来生产胰岛素 B．培育转基因抗虫棉 C．人工诱导多倍体
D．利用DNA探针检测饮用水是否含有病毒 3．“工程菌”是指（ ）
A．用物理或化学方法诱发菌类自身某些基因得到高效表达的菌类细胞株系 B．用遗传工程的方法，使同种不同株系的菌类杂交，得到的新细胞株系 C．用基因工程的方法，使外源基因得到高效表达的菌类细胞株系 D．从自然界中选取能迅速增殖的菌类
4．不属于基因工程方法生产的药物是（ ） A．干扰素 B．白细胞介素 C．青霉素 D．乙肝疫苗
5．下列关于基因成果的概述，错误的是（ ） A．在医药卫生方面，主要用于诊断治疗疾病
B．在农业上主要是培育高产、稳产、品质优良和具有抗逆性的农作物 C．在畜牧养殖业上培育出了体型巨大、品质优良的动物 D．在环境保护方面主要用于环境监测和对污染环境的净化
6．我国科学工作者培育成的抗棉铃虫的转基因抗虫棉，其抗虫基因来源于（ ） A．普通棉的突变基因
B．棉铃虫变异形成的致死基因 C．寄生在棉铃虫体内的线虫基因 D．苏云金芽孢杆菌中的抗虫基因
7．用DNA探针检测饮用水中病毒的具体方法是（ ） A．与被检测病毒的DNA碱基序列进行比较 B．与被检测病毒的DNA碱基序列进行组合 C．与被检测病毒的DNA碱基序列进行杂交 D．A、B、C三种方法均可
8．用 珠蛋白的DNA探针叶以检测出的遗传病是（ ） A．镰刀状细胞贫血症 B．白血病 C．坏血病 D．苯丙酮尿症
9．有关基因工程的成果及应用的说法正确的是（ ） A．用基因工程方法培育的抗虫植物也能抗病毒
B．基因工程在畜牧业pan style='font-family:宋体; \复制 B．能进行转录和翻译 C．能合成生长素抑制因子 D．能会成人的生长激素 答 案：
1．C 2．C 3．C 4．C 5．A 6．D 7．C 8．A 9．D 10．C 单选题
1、构建cDNA文库时，选用下列哪种载体较好？（ ） ①质粒 ②SV40病毒
③Ti质粒 ④YAC（酵母人工染色体） 2、在Northern杂交中，探针主要用什么来进行标记？（ ） ①同位素 ②EB（溴化乙锭） ③染料 ④DNA
3、构建GST蛋白表达系统的载体是为了是目标蛋白以哪种方式表达？（ ） ①融合表达 ②分泌表达 ③独立表达 ④包含体表达
4、PCR反应中Taq酶常常没有错配碱基纠错功能，因为它没有（ ） ①5’－3’聚合酶活性 ②5’－3’外切酶活性 ③3’－5’外切酶活性 ④3’－5’聚合酶活性 5.以下哪种酶需要引物？（ ）
①限制性核酸内切酶 ②末端转移酶 ③逆转录酶 ④DNA连接酶
6、II型限制性核酸内切酶的切割位点是（ ）
① 识别序列内 ②识别序列1000bp以外 ③识别位点下游24－26bp处 ④DNA分子任一位点 7、Ti质粒中能插入到植物基因组中的DNA区段是（ ） ①复制远点区 ②毒素蛋白区 ③T-DNA区 ④冠婴碱代谢区
8、艾滋病病毒HIV是通过下列哪个基因编码的产物识别人体T淋巴 细胞的？（ ）
①env ②pol ③gag ④LTR
9、T4DNA连接酶能催化下列哪种分子相邻的5'端磷酸基团与3'端羟基末端之间形成磷酸二酯键？（ ）
①双链DNA ②单链DNA ③mRNA ④rRNA
10、下列基因中，哪个不能作为基因工程载体的报告基因？（ ） ①lacZ ②GFP
③Ampr
④ori 答 案：
1. ① 2. ① 3. ① 4. ③ 5. ③ 6. ① 7. ③ 8. ① 9. ① 10. 选 择：
001 生物工程的上游技术是【 】 Ａ 基因工程及分离工程 Ｂ 基因工程及发酵工程 Ｃ 基因工程及酶工程 Ｄ 基因工程及细胞工程 Ｅ 基因工程及蛋白质工程
002第一个由重组大肠杆菌生产的人类蛋白（多肽）药物是【 】 Ａ 生长激素（Growth hormone） Ｂ 胰岛素（Insulin） Ｃ 干扰素（Interferon）
Ｄ 白细胞间溶菌素（Interleukin）
Ｅ 生长激素释放抑制素（Somatostatin）
④ 003 限制性核酸内切酶是由细菌产生的，其生理意义是 【 】 Ａ 修复自身的遗传缺陷 Ｂ 促进自身的基因重组 Ｃ 强化自身的核酸代谢 Ｄ 提高自身的防御能力 Ｅ 补充自身的核苷酸消耗
004 天然 PstI 限制性内切酶的来源是 【 】 Ａ Bacillus amyloliquefaciens Ｂ Escherichia coli Ｃ Haemophilus influenzae Ｄ Providencia stuartii Ｅ Streptomyces lividans
005 根据酶切活性对盐浓度的要求，限制性核酸内切酶可分成 【 】 Ａ 2 大类 Ｂ 3 大类 Ｃ 4 大类 Ｄ 5 大类 Ｅ 6 大类
006 下列五个 DNA 片段中含有回文结构的是 【 】 Ａ GAAACTGCTTTGAC Ｂ GAAACTGGAAACTG Ｃ GAAACTGGTCAAAG Ｄ GAAACTGCAGTTTC Ｅ GAAACTGCAGAAAG
007 下列五个 DNA 片段，最可能含有 SstI 酶切位点的是 【 】 Ａ GGAGAGCTCT Ｂ GAGCACATCT Ｃ CCCTGTGGGA Ｄ ATCCTACATG Ｅ AACCTTGGAA
008 从 dam 型大肠杆菌受体细胞中分离出的质粒 DNA 能被 BamHI 、 BglII 和 Sau3AI 降解（如果上述酶切位点存在），但对 BclI 和 MboI 不敏感（尽管上述酶切位点存在），其原因是 【 】
Ａ Dam 甲基化酶使 BclI 和 MboI 识别序列甲基化，但对 BamHI 、 BglII 以及 Sau3AI 不起作用
Ｂ Dam 甲基化酶既可使 5'-GATC-3' 序列中的腺嘌呤 N 6 甲基化，也可使胞嘧啶 C 5 甲基化，这两种甲基化作用对限制性内切酶活性的影响不同 Ｃ Dam 甲基化酶能使所有 5'-GATC-3' 序列中的腺嘌呤 N 6 甲基化，但不同的限制性内切酶对这种甲基化作用的敏感性不同
Ｄ Dam 甲基化酶的作用位点在 5'-GATC-3' 序列内部，但该酶与 DNA 靶序列的结合还依赖于 5'-GATC-3' 序列左右两端的其它碱基组成
Ｅ Dam 甲基化酶既能使 5'-GATC-3' 序列中的腺嘌呤 N 6 单甲基化，也能使其双甲基化，只有后者才能抵御相应限制性内切酶的切割作用
009 下列 DNA 片段中，通过加热并用 S1 核酸酶处理即可使 DNA 断裂的是 【 】 Ａ CCGATCAAGCTGTTCCCGGAGGTGCCCGCCCTAAGGAGACTCGGT GGCTAGTTCGACAAGGGCCTCCACGGGCGGGATTCCTCTGAGCCA Ｂ AAGGTCGGCGGGTTCCCACCCGTGAGCATCGGGCCTTGCCGTTAT TTCCAGCCGCCCAAGGGTGGGCACTCGTAGCCCGGAACGGCAATA Ｃ TATGATCATCCGCCGGGTGTCACTGATCCATGGCCCAAGGGTTTC ATACTAGTAGGCGGCCCACAGTGACTAGGTACCGGGTTCCCAAAG Ｄ GAGGATCCCTTTGCGATTCACCTAGGGTATCTCTGTAGGGCCTAG CTCCTAGGGAAACGCTAAGTGGATCCCATAGAGACATCCCGGATC Ｅ GCATCGGCCCCCGGTAAATATTCTCGGGGCGGGTAGCCGCCTAGT CGTAGCCGGGGGCCATTTATAAGAGCCCCGCCCATCGGCGGATCA 010 Bal31 工具酶是一种 【 】 Ａ 只切双链 DNA 的外切酶 Ｂ 双链单链 DNA 均切的外切酶
Ｃ 双链单链 DNA 和 RNA 均切的外切酶 Ｄ 双链单链 RNA 均切的外切酶 Ｅ 只切双链 RNA 的外切酶
011 下列有关连接反应的叙述，错误的是 【 】 Ａ 连接反应的最佳温度为 37 ℃
Ｂ 连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于 10% Ｃ 连接反应缓冲体系的 ATP 浓度不能高于 1mM Ｄ 连接酶通常应过量 2-5 倍 Ｅ DTT 可以维持连接酶的结构
012 某一质粒的多克隆位点上含有下列单一限制性内切酶识别序列： AluI 、 BglII 、 ClaI 、 DpnI 、 EcoRV ， 若将含有 EcoRI 粘性末端的外源基因克隆在这个质粒上，并保留 EcoRI 酶切位点，则合适的插入位点是 【 】 Ａ AluI Ｂ BglII Ｃ ClaI Ｄ DpnI Ｅ EcoRV
013 若将含有 5' 末端 4 碱基突出的外源 DNA 片段插入到含有 3' 末端 4 碱基突出的载体质粒上，又必须保证连接区域的碱基对数目既不增加也不减少，则需用的工具酶是 【 】 I T 4 -DNA 聚合酶 II Klenow III T 4 -DNA 连接酶 IV 碱性磷酸单酯酶 Ａ III Ｂ I + III Ｃ II + III Ｄ I + II + III Ｅ I + II + III + IV
014 若载体 DNA 用 M 酶切开，则下列五种带有 N 酶粘性末端的外源 DNA 片段中，能直接与载体拼接的是 【 】 M N Ａ A/AGCTT T/TCGAA Ｂ C/CATGG ACATG/T
Ｃ CCC/GGG G/GGCCC Ｄ G/GATCC A/GATCT Ｅ GAGCT/C G/AGCTC
015 下列各组分别用两种不同的限制性内切酶切开的 DNA 片段经补平并连接后，其重组分子内能产生 ClaI 限制性内切酶酶切位点的是 【 】 Ａ BglII / BamHI Ｂ HindIII / BamHI Ｃ MluI / BamHI Ｄ SpeI / BamHI Ｅ XbaI / BamHI
016 质粒 DNA 和外源 DNA 各用两种限制性内切酶切开，经连接转化后获得重组子。下列各组重组子中有可能含有两种相反基因极性的是 【 】 Ａ ApaI / ClaI Ｂ BamHI / BglII Ｃ BclI / SmaI Ｄ HindIII / KpnI Ｅ SphI / PstI
017 提高重组率的方法包括 【 】
I 加大外源 DNA 与载体的分子之比 II 载体分子除磷 III 连接酶过量 IV 延长连接反应时间
Ａ I + II
Ｂ I + II + III Ｃ I + III + IV Ｄ II + III + IV Ｅ I + II + III + IV
018 下列各组用于外源基因表达的受体细胞及其特点的对应关系中，错误的是 【 】 Ａ 大肠杆菌－繁殖迅速 Ｂ 枯草杆菌－分泌机制健全 Ｃ 链霉菌－遗传稳定
Ｄ 酵母菌－表达产物具有真核性
Ｅ 动物细胞－具有完善的蛋白质糖基化功能 019 基因工程的受体细胞必须具备 【 】
I 限制性缺陷 II 营养缺陷 III 感染寄生缺陷 Ａ I
Ｂ I + II Ｃ I + III Ｄ II + III Ｅ I + II + III
020 促红细胞生长素（ EPO ）基因能在大肠杆菌中表达，但却不能用大肠杆菌的基因工程菌生产人的促红细胞生长素，这是因为 【 】Ａ 人的促红细胞生长素对大肠杆菌有毒性作用
Ｂ 人的促红细胞生长素基因在大肠杆菌中极不稳定
Ｃ 大肠杆菌内毒素与人的促红细胞生长素特异性结合并使其灭活
Ｄ 人的促红细胞生长素对大肠杆菌蛋白水解酶极为敏感 Ｅ 大肠杆菌不能使人的促红细胞生长素糖基化 021 原生质体转化方法不大适用于 【 】 Ａ 大肠杆菌 Ｂ 枯草杆菌 Ｃ 酵母菌 Ｄ 链霉菌 Ｅ 植物细胞
022 某一重组转化系统的重组率为 10% ，转化率为 10 7 / m g DNA ，经切接单元操作后的载体转化率为原来的 1% 。若欲获得 10,000 个重组克隆，需在重组实验中投入载体 【 】 Ａ 0.1 m g Ｂ 0.5 m g Ｃ 1.0 m g Ｄ 2.0 m g Ｅ 10 m g
023 克隆菌扩增的目的是 【 】
I 增殖外源基因拷贝 II 表达标记基因 III 表达外源基因 Ａ I
Ｂ I + II Ｃ I + III Ｄ II + III Ｅ I + II + III
024 载体的功能是 【 】
I 运送外源基因高效进入受体细胞 II 为外源基因提供复制能力 III 为外源基因提供整合能力 Ａ I
Ｂ I + II Ｃ I + III Ｄ II + III Ｅ I + II + III
025 下列有关质粒分子生物学的叙述，错误的是 【 】 Ａ 质粒是共价环状的双链 DNA 分子
Ｂ 天然 质粒一般不含有限制性内切酶的识别序列 Ｃ 质粒在宿主细胞内能独立于染色体 DNA 自主复制 Ｄ 松弛复制型的质粒可用氯霉素扩增 Ｅ 质粒并非其宿主细胞生长所必需
026 带有多个不同种复制起始区的质粒是 【 】 Ａ 穿梭质粒 Ｂ 表达质粒 Ｃ 探针质粒 Ｄ 整合质粒 Ｅ 多拷贝质粒
027 多聚接头（ Polylinker ）指的是 【 】
Ａ 含有多种限制性内切酶识别及切割顺序的人工 DNA 片段
Ｂ 含有多种复制起始区的人工 DNA 片段 Ｃ 含有多种 SD 顺序的人工 DNA 片段 Ｄ 含有多种启动基因的人工 DNA 片段 Ｅ 含有多种特定密码子的人工 DNA 片段
028 l -DNA 体外包装的上下限是天然 l -DNA 长度的 【 】 Ａ 25 - 50 % Ｂ 50 - 100 % Ｃ 75 - 100 % Ｄ 75 - 105 % Ｅ 100 - 125 %
029 l -DNA 体外包装系统通常分成分离的两部分，其原因是 【 】 Ａ 安全
Ｂ 包装蛋白含量太大难于溶解 Ｃ 便于操作 Ｄ 提高转染率
Ｅ 包装蛋白组份的冷冻保藏条件不同 030 琥珀突变是指 【 】 Ａ 起始密码的突变 Ｂ 终止密码子的突变 Ｃ 精氨酸密码子的突变 Ｄ 谷酰胺密码子的突变 Ｅ 丙氨酸密码子的突变
031 考斯质粒（cosmid）是一种 【 】 Ａ 天然质粒载体
Ｂ 由 l -DNA 的 cos 区与一质粒重组而成的载体 Ｃ 能裂解受体细胞的烈性载体 Ｄ 具有溶原性质的载体
032 下列各常用载体的装载量排列顺序，正确的是 【 】 Ａ Cosmid > l -DNA > Plasmid Ｂ l -DNA > Cosmid > Plasmid Ｃ Plasmid > l -DNA > Cosmid Ｄ Cosmid > Plasmid > l -DNA Ｅ l -DNA > Plasmid > Cosmid
033 目前在高等动物基因工程中广泛使用的载体是 【 】 Ａ 质粒 DNA Ｂ 噬菌体 DNA Ｃ 病毒 DNA Ｄ 线粒体 DNA
Ｅ 叶绿体 DNA受体细胞内复制并包装的载体
034 载体质粒 pBR325 共有三个选择性标记： Ap r 、 Tc r 、 Cm r 。它们分别含有一个单一酶切位点： PstI 、 SphI 和 EcoRI 。若将一外源基因取代此载体上不含 Cm r 标记基因的 PstI-SphI 限制性 DNA 片段，那么用于转化子和重组子筛选的试剂应是 【 】 Ａ Ap Ｂ Tc
Ｃ Cm
Ｄ Ap + Tc Ｅ Ap + Cm
035 经抗药性遗传标记法筛选出的转化体中，往往会出现无载体或无重组 DNA 分子的菌落，其原因很可能是 【 】 Ａ 标记基因发生突变 Ｂ 载体或重组分子不稳定
Ｃ 载体或重组分子整合入受体染色体中 Ｄ 载体空载
Ｅ 筛选药物诱导受体细胞产生抗性 036 若某质粒带有 lacZ 标记基因，那么与之相匹配的筛选方法是在筛选培养基中加入 【 】 Ａ 半乳糖 Ｂ 葡萄糖 Ｃ 蔗糖
Ｄ 5- 溴 -4- 氯 -3- 吲哚基 - b -D- 半乳糖苷（ X-gal ） Ｅ 异丙基巯基 - b - 半乳糖苷（ IPTG ）
037 下列载体常用选择性标记中属于营养缺陷型的是 【 】 Ａ tsr Ｂ Ap r Ｃ lacZ Ｄ Tc r Ｅ Trp -
038 在菌落原位杂交法中使用的 0.4N NaOH 溶液的作用是 【 】 I 破细胞壁 II 蛋白质变性 III DNA 变性 IV RNA 降解 Ａ I + II + III Ｂ I + II + IV Ｃ I + III + IV Ｄ II + III + IV Ｅ I + II + III + IV
039 下列各组专业术语中，含义最为接近的是 【 】 Ａ 终止子与终止密码子 Ｂ 基因表达与基因转译 Ｃ DNA 退火与 DNA 复性 Ｄ 转化与转染 Ｅ 重组子与转化子
040 分子杂交的化学原理是形成 【 】 Ａ 共价键 Ｂ 离子键 Ｃ 疏水键 Ｄ 配位键 Ｅ 氢键
041 下列设计的探针中，最佳的是 【 】 Ａ ACATTAAATTATT
Ｂ GGGCA
Ｃ ACCTTGATAAGGT Ｄ CGGACTTGACCATC Ｅ TTTAGG
042 下列三种探针同位素标记法中，必须使用 a - 32 P-dNTP 的是 【 】 I T 4 -PNP 标记 II 缺口前移标记 III 反转录标记 Ａ I
Ｂ I + II Ｃ I + III Ｄ II + III Ｅ I + II + III
043 能有效降低菌落原位杂交本底的方法是 【 】
I 延长嚗光时间 II 高离子强度溶液清洗薄膜 III 高温杂交 Ａ I
Ｂ I + II Ｃ I + III Ｄ II + III Ｅ I + II + III
044 某一重组 DNA （ 6.2 kb ） 的载体部分有两个 SmaI 酶切位点。用 SmaI 酶切后凝胶电泳上出现四条长度不同的带子，其长度总和与已知数据吻合，该重组分子插入片段上的 SmaI 酶切位点共有 【 】Ａ 5 个 Ｂ 4 个 Ｃ 3 个 Ｄ 2 个 Ｅ 至少 2 个
045 Subcloning 法一般用于 【 】 Ａ 基因杂交 Ｂ 基因定位 Ｃ 基因表达 Ｄ 基因调控 Ｅ 基因突变
046 双脱氧末端终止法测定 DNA 序列是基于 【 】 Ａ DNA 的聚合反应 Ｂ DNA 的连接反应 Ｃ DNA 的降解反应 Ｄ 特殊的 DNA 连接酶
Ｅ 聚合单体 2' 和 5' 位的脱氧
047 多项研究结果表明，苍蝇体内存在一种新型高效广谱抗菌蛋白。为克隆其基因，最快速有效的筛选方法是 【 】 Ａ 噬菌斑模型 Ｂ 透明圈模型 Ｃ 颜色反应模型 Ｄ 免疫杂交模型 Ｅ 凝胶电泳模型
048 放射免疫原位杂交法所使用的菌体破碎方法是 【 】 I 氯仿蒸汽 II 碱溶液 III 烈性噬菌体 Ａ III Ｂ I + II Ｃ I + III Ｄ II + III Ｅ I + II + III
049 下列三种方法中，能有效区分重组子与非重组子的是 【 】 I 限制性酶切 II PCR 扩增 III 抗药性筛选 Ａ I
Ｂ I + II Ｃ I + III Ｄ II + III Ｅ I + II + III
050 下列能区分期望重组子的筛选方法是 【 】 Ａ 抗药性 筛选法 Ｂ 营养缺陷 筛选法 Ｃ 显色 筛选法 Ｄ 次级克隆法 Ｅ 菌落原位杂交法
051 鸟枪法克隆目的基因的战略适用于 【 】 Ａ 原核细菌 Ｂ 酵母菌 Ｃ 丝状真菌 Ｄ 植物 Ｅ 人类
052 鸟枪法克隆目的基因的第一步是随机或非随机切割外源 DNA ，其方法有I 超声波处理 II 酶解 III 机械搅拌 Ａ III Ｂ I + II Ｃ I + III Ｄ II + III Ｅ I + II + III
053 从凝胶上回收 DNA 片段有多种方法，其中无需将凝胶切下来的是 【 】Ａ 冻融法 Ｂ 滤纸法 Ｃ 吸附法 Ｄ 溶解法
Ｅ 低融点凝胶法
054 mRNA 分离纯化技术的关键是 【 】 Ａ 细胞的温和破碎
Ｂ 分离系统中不得含有痕量的 SDS Ｃ 高离子强度缓冲液的使用
】 【 Ｄ 密度梯度超离心 Ｅ 严防核酸酶的降解
055 cDNA 第一链合成所需的引物是 【 】 Ａ Poly A Ｂ Poly C Ｃ Poly G Ｄ Poly T Ｅ 发夹结构
056 cDNA 合成中所涉及的三种工具酶是 【 】
I T 4 -DNA 连接酶 II Klenow 聚合酶 III S1 核酸酶 IV Bal31 核酸酶 V 逆转录酶 Ａ I + II + III Ｂ I + III + IV Ｃ II + III + IV Ｄ II + III + V Ｅ III + IV + V
057 cDNA 法获得目的基因的优点是【 】 Ａ 成功率高 Ｂ 不含内含子 Ｃ 操作简便
Ｄ 表达产物可以分泌 Ｅ 能纠正密码子的偏爱性
058 Taq DNA 聚合酶的发现使得 PCR 技术的广泛运用成为可能，这是因为 【 】 Ａ Taq DNA 聚合酶能有效地变性基因扩增产物 Ｂ Taq DNA 聚合酶催化的聚和反应不需要引物 Ｃ Taq DNA 聚合酶具有极强的聚和活性 Ｄ Taq DNA 聚合酶能使多轮扩增反应连续化
Ｅ Taq DNA 聚合酶能使扩增反应在 DNA 变性条件下进行
059 为了利用 PCR 技术扩增下列染色体 DNA 片段上的虚线部分，应选用的引物顺序是 【 】
Ａ I + II Ｂ I + III Ｃ I + IV Ｄ II + III
Ｅ II + IV
060 基因工程中采用人工合成目的基因战略的主要原因是 【 】 Ａ 便于目的基因的分离纯化 Ｂ 便于目的基因的高效表达 Ｃ 便于目的基因的重组克隆 Ｄ 便于目的基因的顺序测定 Ｅ 便于目的基因的大量扩增
061 人工合成 DNA 的单元操作包括 【 】 I 基团保护 II 缩合 III 去保护 IV 洗涤 Ａ I + II Ｂ II + IV
Ｃ I + II + III Ｄ II + III + IV Ｅ I + II + III + IV
062 基因文库的构建方法包括 【 】
I 合成法 II cDNA 法 III 鸟枪法 IV PCR 法 Ａ I + II Ｂ I + III Ｃ II + III Ｄ II + IV Ｅ III + IV
063 建立人的基因文库所需的技术是 【 】 Ａ 分子克隆技术 Ｂ 体外转录技术 Ｃ 体外翻译技术 Ｄ 产物分泌技术 Ｅ 基因诱导表达技术
064 构建基因文库一般使用的载体是 【 】 I 质粒 II l -DNA III Cosmid Ａ I Ｂ II Ｃ III
Ｄ II + III Ｅ I + II + III
065 评估基因文库完备性的数学公式是 【 】 Ａ N = ln （ P-1 ） / ln （ f-1 ） Ｂ N = lg （ P+1 ） / lg （ f+1 ） Ｃ N = ln （ 1-P ） / ln （ 1-f ） Ｄ N = lg （ 1-P ） / ln （ 1-f ） Ｅ N = lg （ 1-f ） / ln （ 1-P ）
066 构建基因文库极为重要的原则是防止外源 DNA 片段之间的连接，其方法是 【 】 I DNA 片段分级分离 II 除去 DNA 片段末端的磷酸基团 III 用 TdT 酶增补人工粘性末端 Ａ II Ｂ I + II
Ｃ I + III Ｄ II + III Ｅ I + II + III
067 强化基因转录的元件是 【 】 Ａ 密码子 Ｂ 复制子 Ｃ 启动子 Ｄ 内含子 Ｅ 外显子
068 启动子的特征之一是 【 】 Ａ GC 富积区 Ｂ TATA Box Ｃ 转录起始位点 Ｄ 长度平均 1 kb Ｅ 含有某些稀有碱基
069 影响启动子功能的因素包括 【 】
I 本身长度 II 与基因之间的距离 III 本身碱基排列顺序 Ａ I Ｂ II Ｃ III Ｄ I + II Ｅ II + III 070 pIJ486 是链霉菌的启动子探针质粒（如下图所示），其中 neo 和 tsr 分别为新霉素和硫链丝菌素的抗性基因。为了准确克隆和筛选具有启动子活性的外源 DNA 片段，最为理想的插入位点应是 【 】
Ａ ApaI Ｂ BclI Ｃ EcoRV Ｄ KpnI Ｅ PstI
071下列基因调控元件中属于反式调控元件的是 【 】 Ａ 阻遏蛋白
Ｂ 启动子 Ｃ 操作子 Ｄ 终止子 Ｅ 增强子
072 强化 mRNA 翻译的元件是 【 】 Ａ 启动子 Ｂ 复制起始区 Ｃ 增强子 Ｄ 回文结构 Ｅ SD 顺序
073下列 mRNA 5' 端序列中，具有典型的原核生物 Shine-Dalgarno 序列特征的是 【 】 Ａ 5'??UAUAAG??3' Ｂ 5'??AGGAGG??3' Ｃ 5'??AUAUCU??3' Ｄ 5'??CCUCCA??3' Ｅ 5'??GGCCCG??3'
074 下列亮氨酸密码子在大肠杆菌蛋白质结构基因中出现频率最低的是 【 】 Ａ CUA Ｂ CUC Ｃ CUG Ｄ UUA Ｅ UUG
075 下面给出的 DNA 顺序是某链霉菌一个蛋白质结构基因的中间片段，其基因方向及阅读框架是 【 】
5'...GCAGGGACTCGGAAGGCACCGACATGTCCTGC...3' ...123456789...
Ａ 从右至左， . .. 876 ， 543 ... Ｂ 从右至左， ... 987 ， 654 ... Ｃ 从左至右， ... 123 ， 456 ... Ｄ 从左至右， ... 234 ， 567 ... Ｅ 从左至右， ... 345 ， 678 ...
076 为了使人类有经济价值的基因在大肠杆菌中高效表达，有时可以采用同步克隆表达受体菌 tRNA 基因的方法，其机理是 【 】 Ａ 增强基因的转录
Ｂ 纠正受体菌密码子的偏爱性 Ｃ 促进氨酰基 tRNA 合成酶的表达 Ｄ 稳定 mRNA 在核糖体上的定位 Ｅ 启动 mRNA 的翻译
077 高等哺乳类动物基因在大肠杆菌中高效表达时，其产物往往失去水溶性，原因是 【 】 Ａ 表达产物浓度过高 Ｂ 表达产物不能正确折叠 Ｃ 表达产物不含糖基侧链 Ｄ 表达产物难以形成二硫键
Ｅ 表达产物中极性氨基酸残基比例下降
078 下列五种重组 DNA 分子中，目的基因有可能获得高效表达的是 【 】启动子 SD 序列目的基因终止子
Ａ
Ｂ
Ｃ
Ｄ
Ｅ
079 包涵体是一种 【 】
Ａ 受体细胞中难溶于水的蛋白颗粒 Ｂ 大肠杆菌的亚细胞结构
Ｃ 噬菌体或病毒 DNA 的体外包装颗粒 Ｄ 用于转化动物细胞的脂质体 Ｅ 外源基因表达产物的混合物
080 在基因工程中，外源基因表达产物的重折叠通常是指 【 】 Ａ 氢键的形成 Ｂ 离子键的形成 Ｃ 疏水键的形成 Ｄ 酰胺键的形成 Ｅ 二硫键的形成
081 Chaperone 协助蛋白质形成正确空间构象的机制是 【 】 Ａ 结合折叠不正确的蛋白分子以阻断蛋白质的错误折叠途径 Ｂ 强化蛋白分子内容二硫键的正确形成
Ｃ 促进肽基脯氨酸顺式键与反式键之间的转换 Ｄ 蛋白质正确构象与错误构象之间的平衡 Ｅ 催化错误构象蛋白质的降解
082 某一表达质粒上含有一个能在大肠杆菌中高效表达的基因 A ，若将外源基因 B 插入基因 A 的 3' 末端，并维持基因 B 的阅读框架不变，使两者在受体细胞中产生融合蛋白，则正确的重组策略是 【 】
Ａ A 基因用 BamHI 切开， B 基因用 BamHI 切开，连接 Ｂ A 基因用 BglII 切开， B 基因用 BamHI 切开，连接 Ｃ A 基因用 EcoRV 切开， B 基因用 SmaI 切开，连接 Ｄ A 基因用 PvuII 切开， B 基因用 SmaI 切开，连接 Ｅ A 基因用 SmaI 切开， B 基因用 SmaI 切开，连接
083 外源基因在大肠杆菌中以融合蛋白的形式表达的优点是 【 】
I 融合基因能稳定扩增 II 融合蛋白能抗蛋白酶的降解 III 表达产物易于亲和层析分离 Ａ III Ｂ I + II Ｃ I + III Ｄ II + III Ｅ I + II + III
084 有利于基因的蛋白质产物分泌的元件是 【 】 Ａ 核糖体 Ｂ 信号肽 Ｃ 终止子
Ｄ 亲水性氨基酸 Ｅ 多聚腺苷酸
085 下列蛋白质 N 末端序列中，符合分泌型蛋白结构特征的是 【 】Ａ MLSLRQSIRFFKPATRTLCSSRYLL Ｂ MLVTAGVAAA
Ｃ MKRKHAIGPLLLAGLLAGVVAVLP Ｄ MFSNLSKRWAQRTLSKSFYSTANA Ｅ MVHAPNQSSTTWYHSCACGLIYWT
086 一般而言，分子量小的蛋白质更不稳定，其原因是 【 】 Ａ 分子量越小，形成良好空间构象的可能性越低 Ｂ 分子量越小，表达效率越高 Ｃ 分子量越小，分泌效果越佳
Ｄ 分子量越小，形成多聚体的概率越大 Ｅ 分子量越小，越容易被加工修饰
087 越来越多的研究结果表明，与抗菌素生物合成有关的基因往往连锁在一起形成基因簇，它包括 【 】
I 合成基因 II 抗性基因 III 运输基因 IV 调控基因 Ａ I + II + III Ｂ I + II + IV Ｃ I + III + IV Ｄ II + III + IV Ｅ I + II + III + IV
088 利用染色体走读法分离抗菌素生物合成基因簇的第一步通常是克隆 【 】 Ａ 限速步骤的生物合成基因 Ｂ 生物合成途径分支步骤的基因 Ｃ 抗菌素抗性基因 Ｄ 基因表达调控基因
Ｅ 控制途径第一步反应的基因 089 第二代基因工程是指 【 】 Ａ 途径工程 Ｂ 代谢工程 Ｃ 蛋白质工程 Ｄ RNA 基因工程 Ｅ 细胞器基因工程
090 蛋白质工程的战略是设计定做新型蛋白质，但其具体操作是在基因水平上进行的，这些操作技术包括基因定向突变及人工合成，其中 M13 法和 PCR 法定点突变的原理是 【 】 Ａ 在 DNA 聚合反应所需的引物中直接引入突变 Ｂ 在 DNA 聚合反应过程中通过碱基对错配引入突变 Ｃ 在 DNA 模板单链中用化学试剂诱导突变 Ｄ 在 DNA 连接反应过程中引入突变 Ｅ 化学修饰 DNA 体外复制产物
091 下列生化产品中二级基因产物的是 【 】 Ａ 抗菌素 Ｂ 胰岛素 Ｃ 干扰素 Ｄ 生长激素 Ｅ 白细胞介素
092 利用 DNA 同源重组技术人们可以 【 】 Ａ 灭活基因 Ｂ 表达基因 Ｃ 复制基因 Ｄ 纯化基因 Ｅ 合成基因
093 重组分子的不稳定性表现在 【 】
I DNA 片段缺失或重排 II 外源基因整合入受体细胞染色体 DNA 上 III 重组质粒丢失 Ａ I
Ｂ I + II Ｃ I + III
Ｄ II + III Ｅ I + II + III
094 基因工程菌中重组质粒的丢失机制是 【 】 Ａ 重组质粒渗透至细胞外
Ｂ 重组质粒被细胞内核酸酶降解 Ｃ 重组质粒在细胞分裂时不均匀分配 Ｄ 重组质粒杀死受体细胞
Ｅ 重组质粒刺激受体细胞提高其通透性 选 择：
1、利用基因工程扩增基因是依据（） Ａ 基因定向重排 Ｂ 强化启动基因 Ｃ 增强子重组 Ｄ SD 顺序的存在 Ｅ 载体自主复制
2、限制性核酸内切酶是由细菌产生的，其生理意义是 【 】 Ａ 修复自身的遗传缺陷 Ｂ 促进自身的基因重组 Ｃ 强化自身的核酸代谢 Ｄ 提高自身的防御能力 Ｅ 补充自身的核苷酸消耗
3、天然 PstI 限制性内切酶的来源是 【 】 Ａ Bacillus amyloliquefaciens Ｂ Escherichia coli Ｃ Haemophilus influenzae Ｄ Providencia stuartii Ｅ Streptomyces lividans 4、下列五个 DNA 片段中含有回文结构的是 （） Ａ GAAACTGCTTTGAC Ｂ GAAACTGGAAACTG Ｃ GAAACTGGTCAAAG Ｄ GAAACTGCAGTTTC Ｅ GAAACTGCAGAAAG
5、提高重组率的方法包括 （）
I 加大外源 DNA 与载体的分子之比 II 载体分子除磷 III 连接酶过量 IV 延长连接反应时间
Ａ I + II
Ｂ I + II + III Ｃ I + III + IV Ｄ II + III + IV Ｅ I + II + III + IV
6、带有多个不同种复制起始区的质粒是 【 】 Ａ 穿梭质粒 Ｂ 表达质粒
Ｃ 探针质粒 Ｄ 整合质粒 Ｅ 多拷贝质粒
7、目前在高等动物基因工程中广泛使用的载体是 【 】 Ａ 质粒 DNA Ｂ 噬菌体 DNA Ｃ 病毒 DNA Ｄ 线粒体 DNA Ｅ 叶绿体 DNA
8、下列三种方法中，能有效区分重组子与非重组子的是I 限制性酶切 II PCR 扩增 III 抗药性筛选 Ａ I
Ｂ I + II Ｃ I + III Ｄ II + III Ｅ I + II + III
9、下列能区分期望重组子的筛选方法是 【 】 Ａ 抗药性 筛选法 Ｂ 营养缺陷 筛选法 Ｃ 显色 筛选法 Ｄ 次级克隆法 Ｅ 菌落原位杂交法
10、强化基因转录的元件是 【 】 Ａ 密码子 Ｂ 复制子 Ｃ 启动子 Ｄ 内含子 Ｅ 外显子
11、强化 mRNA 翻译的元件是 【 】 Ａ 启动子 Ｂ 复制起始区 Ｃ 增强子 Ｄ 回文结构 Ｅ SD 顺序
12、包涵体是一种 【 】
Ａ 受体细胞中难溶于水的蛋白颗粒 Ｂ 大肠杆菌的亚细胞结构
Ｃ 噬菌体或病毒 DNA 的体外包装颗粒 Ｄ 用于转化动物细胞的脂质体 Ｅ 外源基因表达产物的混合物
13、关于感受态细胞的下列说法不正确的是（ C ） A．有人工感受态细胞和自然感受态细胞。 B．具有可诱导性。 C．有可转移性。
】 【 D．不同种细菌出现感受态的生理时期不同。 E．不同种细菌出现感受态的比例不同 单项选择题
1．PCR反应中，所设计引物的长度一般为（ ）
A．5～10核苷酸 B. 15～30核苷酸 C. 50个核苷酸 D.长度任意 E. 以上答案均不对
2．引物设计时G＋C含量在引物中一般占（ c ）
A. 20～40﹪ B. 30～60﹪ C. 45～55﹪ D.越高越好 E.含量随意 3．以下说法错误的是（ e ）
A.引物中的碱基组成应该尽可能的随机分布。 B.引物自身不应该存在互补序列
‘‘
C.设计引物时应考虑使3端引物和5端引物具有相似的Tm值
‘’
D.引物的5和3端必须和模板严格配对结合
E.引物与非特异扩增区的序列的同源性不要超过70﹪ 4．下列说法正确的是（ ）
A. PCR反应常用的缓冲液为10－50mmol/L的Tris-HCl（室温 PH 8.3－8.8） B.10mmol/L的KCl能促进引物的退火 C.加入的BSA有利于破坏模板的二级结构 D.二甲基亚砜有利于保护TaqDNA酶的活性。
2+
E. Mg能降低Taq DNA聚合酶的活性。
5. TaqDNA聚合酶活性需要以下哪种离子（ c ）
+ +2+2+-A．KB. Na C. Mg D. Ca E. Cl
6．适用于DNA序列中单个碱基突变的检测的方法是：( d ) A．筑巢PCR B. 多重PCR C. 锚定PCR D. LCR
7．以下哪种PCR技术广泛应用于组织胚胎学和肿瘤学的研究（ a ） A．原位PCR B．差异显示PCR C．不对称PCR D．反向PCR
8.已知一段设计好的引物的序列为GTGGATCCATGGCTCCTCTGAAGATTC,其Tm值为（ ） A. 78 B. 80 C. 82 D. 84 E. 无法计算
9．以下哪种PCR技术可以克服序列未能全知的障碍而获取目的扩增片段（ c ） A.共享引物PCR B不对称PCR C锚定PCR D.筑巢PCR
10．一位疑似杜氏肌营养不良症的患者，可以采用以下哪种方法协助诊断（ ） A.原位PCR B.多重PCR C.不对称PCR. D. 锚定PCR 11．以下关于dNTP的说法错误的是（ e ）
B. dNTP具有较强的酸性，使用时应将pH调至7.0-7.5
C. PCR反应中，四种dNTP必须按比例配制，以减少反应的错配率。 D. dNTP的浓度过高会增加碱基的错配率
E. dNTP的浓度低，反应速度下降，但特异性提高
12. TaqDNA聚合酶可以不要模板在ds DNA的末端加上一个( )碱基. A. dGTP B. dCTP C. dATP D. dTTP 13. 有关PCR的描述哪个不对( d ) A.是一种酶促反应
B.引物决定扩增的特异性 C.扩增的对象是DNA序列 D.扩增的对象是氨基酸序列
14. 催化PCR的酶是 ( c ) A. RNA聚合酶 B. DNA聚合酶 C.Taq DNA聚合酶 D.反转录酶
15. PCR产物具有特异性是因为( c ) A. Taq DNA酶保证了产物的特异性 B.合适的变性,退火,延伸温度 C.选择特异性的引物 D.引物的Tm值不同.
16．LCR的说法正确的是 ( ) A.体系中采用DNA聚合酶 B.须设计一对引物
C.反应需经过变性,复性,连接
D. LCR中,酶将dNTP加到引物的3-OH端 E. LCR具有高度敏感性. 多 项 选 择 题
1．下列关于退火温度说法正确的是（ ） A. 合适的退火温度应低于引物Tm值5℃左右。 B. 引物与模板的退火温度一般在45－55℃之间
C. 在Tm值允许的范围内，选择偏低的退火温度可以提高PCR反应的特异性。 D. 退火时间至少需要一分钟。
2．进行PCR实验时以下措施有助于防止污染和结果的假阳性（ ） B.隔离不同的操作区
C.分装试剂，减少重复取样所致的污染 D .严格实验操作 E.设立实验对照
‘‘
3．适用于扩增3或5端未知序列的PCR技术是（ ） A．反向PCR B. 锚定PCR C. 多重PCR D.不对称PCR 4． 以下关于PCR技术应用说法正确的是（ ）
B.筑巢PCR和共享引物PCR有利于增强PCR反应的特异性，适用于模板含量极少的样品的检
测
C.不对称PCR可以大量制备单链DNA，可用于DNA的序列测定 D.彩色PCR适用于基因诊断和自动化DNA序列测定 E.定量PCR可用于基因表达和调控的研究
F.差异显示PCR可用于筛选和克隆受发育，突变等各种因素影响下差异表达的基因 5. 关于引物设计说法正确的是（ ）
B.为保证PCR反应的特异性，所设计的引物长度一般>30个核苷酸 C.引物设计时G＋C含量在引物中一般为45～55﹪
D.按经验，引物自身存在的连续互补序列一般不超过3个碱基
‘
E.两个引物之间不应存在互补序列，尤其避免3端的互补重叠
‘
F.引物的3端可以游离而不影响PCR反应的进行 6. 以下关于PCR的说法正确的是（ ） A.PCR的模板可以是DNA也可以是RNA
B.PCR的模板必须从组织细胞中分离出来
C.PCR反应的特异性取决于引物和模板DNA的结合位点。 D.PCR反应初期，目的DNA片断的增加呈指数扩增。
25
E.PCR反应一般需要含10－10拷贝的模板 7．以下关于PCR反应条件错误的是（ ）
B.PCR缓冲液中加入二甲基亚砜有利于破坏模板的二级结构，提高反应的特异性。
C.Mg浓度过高会降低TaqDNA酶的活性，Mg浓度过低又会使酶催化非特异性扩增增强。 D.4种dNTP应以等摩尔浓度配制，以减少错配误差。 E.引物浓度一般为0.5-1umol/L
8. PCR反应时应设立哪种对照（ ） A. 阴性对照 B. 阳性对照 C. 试剂对照
D. 以上答案都正确
9. 逆转录反应体系包括（ ） B..RNA模板，四种dNTP C..RNA酶抑制剂 D.合适的缓冲液体系 E.逆转录酶
F.寡聚胸腺嘧啶核苷酸引物
10. 有关PCR的模板说法正确的是 ( ) A.模板可以是DNA也可以是RNA
B.大多数PCR反应中对DNA模板纯度要求不高 C.模板用量低
D.标本处理的基本要求是除去杂质
11. 以下有关RT-PCR反应的说法你认为正确的有( ) A.反应体系一般有20μl
B.反应体系中有缓冲液, 四种dNTP, MgCl2, DTT, 牛血清白蛋白, Oligo(dT)引物RNA模板和
逆转录酶
C.逆转录于42℃进行,随后即进行PCR
D.RT-PCR的最终反应过程依然是以DNA为模板的PCR反应 12. PCR的产物累积的特征是( ) B.反应初期,目的DNA片断呈指数扩增
C.PCR进行到一定时间出现反应中的停滞效应
D.到达平台期的的PCR循环数取决于反应体系中酶的耗竭程度 E.PCR平台期的出现多数不可避免
F.到达平台期时若扩增目的DNA片断不足,可继续加入模板,酶和缓冲液进行PCR反应
2+
13. 有关Mg在PCR中的作用说法不正确的是( )
2+
A.Taq DNA 酶的活性维持需要Mg
2+
B.Taq DNA酶的活性与反应体系中的Mg总浓度有关
2+
C.Mg过低,酶催化非特异性扩增增加
2+
D.Mg过高会降低酶的活性
E.总量应低于dNTP的量, 常用1.5mmol/L 14. PCR中使用的底物dNTP应该是( )
A.使用前应将pH值调至7.0-7.5
B.dNTP浓度高可以加快反应速度,但却增加了出错率 C.降低反应速度可以提高反应特异性
D. PCR中, 4种 dNTP必须按一定比例配制
2+
E.Mg会与dNTP结合,应注意二者浓度之间的关系 15. Taq DNA酶的特点是( ) A.75-80℃时具有最高的聚合酶活性
2+
B.活性的维持需要Mg的参与
C.Taq DNA酶和klenow片断一样具有校正功能 D.Taq DNA酶的忠实性很高 E.具有类似末端转移酶的活性
16. 有关引物的说法正确的是( ) A.引物浓度一般为0.1-1.5μmol/L
8
B.引物与模板的的比至少为10:1
C.引物浓度过高会引起错配和非特异扩增,降低扩增效率 D.引物Tm值位于55-80℃较理想 17. PCR反应温度应该是( )
A.为使DNA变性完全,变性温度越高,时间越长越好 B.按模板DNA的复杂程度来调整变性温度和变性时间 C.于反应管中加入1-2d 石蜡油防止反应液的蒸发 D.dNTP破坏增加,对PCR反应产生不利影响 18.有关退火温度正确的是( )
A.引物与模板退火温度一般在45-55℃ B.退火温度过低,使非特异扩增增加 C.退火温度过高, PCR扩增含量下降 D.退火时间一般为1-2分钟
E.Tm值的允许范围内,应该选择较低的退火温度 19.延伸温度应有如下特点( ) A.一般为72℃
B.PCR延伸时间越长, 产物的得率越高 C.Taq DNA酶在延伸温度时有较高的酶活性 D.PCR延伸时间根据待扩增片断的长度而定 20.PCR循环次数设定时应注意( ) B.应由最初靶分子浓度而定
C.理论上20-25个循环后, PCR产物累积达最大值 D.PCR的循环次数一般为25-30次 E.循环次数过多时会引起停滞效应 21.PCR样品制备时应注意( ) B.应有专门的区域制备模板
C.提取DNA样品和RNA样品时要带手套且经常更换 D.纯化样品对污染有极大的影响
E.普通分子克隆工具不能用做样品的处理和靶序列
F.提取核酸所用的试剂要求新鲜配制或者适当储存未经使用的试剂. 22.操作中应该注意( )
A.使用的溶液应该没有核酸,核酸酶 B.试剂水都是高质新鲜蒸馏水
C.工具(枪头,试管) 都是一次性并且高压灭菌 D.应有专门的操作区 E.试剂应该分装保存
23. PCR反应总为阴性时应该( ) A.增加Taq DNA酶的浓度 B.增加靶DNA的量
C.增加扩增循环或者降低退火温度 D.提纯样品
E.取10μl扩增液再行PCR
24. PCR反应出现非特异产物时,应该采取的措施是( ) A.增加退火温度
B.降低Taq DNA酶浓度 C.减少退火及延伸时间 D.减少引物浓度 E.减少扩增循环次数
25.PCR可以广泛应用于( ) A.遗传性疾病的基因诊断 B.检测癌基因 C.检测病原微生物 D.法医鉴定 E.DNA序列测定
26.对RNA的体外扩增过程,描述正确的是( ) A.分为循环相和非循环相 B.也具有变性,复性,延伸三步
C.反应体系中含有dNTP和NTP两种类型的核苷酸 D.反应中含有两种特异性引物 E.待测RNA作为模板进入循环相 27.RNA-PCR技术的特点为( ) A.扩增效率高 B.扩增时间短 C.特异性不强
D.需严防DNA的污染
28.下列说法错误的是( )
C.RNA-PCR中, 非循环反应与循环反应不处在同一反应体系 D.RNA-PCR中,扩增产物以2的指数递增
E.反应温度一般为37-42℃, 时间一般为30分钟到1小时 F.RNA-PCR需采用25个循环达到需要量
G.依赖于逆转录酶, RnaseH和T7RNA聚合酶共同作用 29. 利用PCR技术测序有下列哪几种方法( ) A.双链直接测序 B.基因扩增转录测序
C.不对称PCR产生单链测序
D.双链克隆后测序
答 案：
1.A B 在Tm值允许的范围内，选择偏高的退火温度可以减少引物和模板的非特异性结合，提高PCR反应的特异性；退火时间一般选择30秒－1分钟，足以使引物和模板结合完全 2.A B C D 隔离不同的操作区, 分装试剂，减少重复取样所致的误差, 严格实验操作污染, 设立实验对照 3.A B
4.A B C D E
5.B C DA PCR的引物设计长度一般为15～30个核苷酸，过长会提高相应的退火温度，并
‘
使延伸温度>TaqDNA聚合酶的最适温度，影响产物的生成。 引物的3端碱基是延伸的起点，必须与模板严格配对结合
6. A C D E 原位PCR无需从组织细胞中分离模板 7.B DB Mg浓度过低会降低TaqDNA酶的活性，Mg浓度过高又会使酶催化非特异性扩增增强。引物浓度一般为0.1-0.5μmol/L 8. A B C D 9. A B C D E
10. ABCD PCR反应的模板可以是DNA,也可以是RNA(先逆转录生成cDNA, 后行PCR反应), 大多数用途的PCR对DNA模板的要求并不严格(大量的实验数据表明存在一定量的蛋白质或者SDS对实验过程影响不大),并且模板用量很低但依然要达到一定的水平.对于PCR的标本处理最基本的就是出去杂质.
11.AD 反应体系中应该还包括RNA酶抑制剂, 当逆转录反应于42℃进行后,应该将反应混合物加热再95℃5分钟,灭活逆转录酶,然后取2μl反应产物行以DNA为模板的PCR反应 12. BD PCR的扩增过程遵循酶的催化动力学原理,在PCR的反应初期, 目的DNA片断呈指数扩增, 随着目的DNA产物的积累,酶的催化反应趋于饱和,出现平台期.并且到达平台期所需的PCR循环数目取决于样品中模板的拷贝数,PCR扩增效率,DNA聚合酶的种类和活性,以及非特异产物的竞争等因素.
2+
13.BCDE Mg过低,会显著降低酶的活性, 过高又使酶催化非特异性扩增增强, Taq DNA酶
2+2+
的活性与反应体系中的游离Mg有关, 而Mg又和引物,模板,dNTP分子中的磷酸基团结合从
2+2+
而使游离Mg浓度下降,所以Mg的总量应该高于dNTP的量.
14.ABCE PCR反应中,应该使四种dNTP等摩尔浓度配制,以减少错配误差和提高使用效率 15. ABE TaqDNA酶没有3-5的外切酶活性因而没有校正功能.并且TaqDNA酶体外扩增DNA的忠实性是所有已知忠实性的DNA聚合酶中最低的. 16. BCD 引物的浓度一般是0.1-0.5μmol/l
17. BCD 变性温度过高时间过长, TaqDNA酶容易失活, dNTP破坏增加,对PCR反应产生不利影响
18. ABC 在Tm值的允许范围内,选择偏高的退火温度可以减少引物与模板之间的非特异结合,提高PCR反应的特异性,退火时间一般为30秒至1分钟. 19.ACD 延伸时间过长易发生非特异性扩增
20. ABCD 理论上20-25次循环后PCR产物累积达最大值,但是实际上每次PCR产物得率达不到100%, 所以一般设定为25-30次 21.ABCDE 22. ABCDE 23.ABCDE
24. ABCDE 25.ABCDE
26.ACD RNA的体外扩增不需经过变性,复性; 并且进入循环相的是反义RNA.
27.AB RNA-PCR技术的特异性很强,由于只有4-6次循环, 错配率减低了很多. 并且因为反应没有热变性,所以双链DNA不能作为模板扩增, 所以不必防止DNA的污染
28.ABD RNA-PCR中,循环相和非循环相处于同一反应体系,产物的扩增以10的指数递增,所以只需要4-6次循环即达到所需量. 29. ABCD
单 选：
1． 决定基因表达空间特异性的因素是（C）
A．器官分布 B．个体差异 C．细胞分布 D．发育时间 E．生命周期 2．目前认为基因表达调控的主要环节是（B） A．基因活化 B．转录起始 C．转录后加工 D．翻译起始 E．翻译后加工
3．一个操纵子通常言有（B）
A．一个启动序列和一个编码基因 B．一个启动序列和数个编码基因 C．数个启动序列和一个编码基因 D．数个启动序列和数个编码基因 E．两个启动序列和数个编码基因答案
4．有利于基因的蛋白质产物分泌的元件是 【b 】 Ａ 核糖体 Ｂ 信号肽 Ｃ 终止子
Ｄ 亲水性氨基酸 Ｅ 多聚腺苷酸
5．包涵体是一种 【 a】
Ａ 受体细胞中难溶于水的蛋白颗粒 Ｂ 大肠杆菌的亚细胞结构
Ｃ 噬菌体或病毒 DNA 的体外包装颗粒 Ｄ 用于转化动物细胞的脂质体 Ｅ 外源基因表达产物的混合物
7、操纵子的基因表达调节系统属于（b） A复制水平调节 B转录水平调节 C翻译水平调节 D逆转录水平调节 E翻译后水平调节 单 选：
1、基因治疗的载体采用下列哪种载体比较合适？（ ） ①逆转录病毒 ②Ti质粒 ③噬菌体 ④质粒pBR322
2、采用原核细胞表达系统的优点之一是可以与下面什么过程直接相连（ ） ①发酵工程 ②转基因动物 ③转基因植物 ④基因治疗
3、以mRNA为模板合成cDNA时，所用的工具酶是（ ） ①DNA聚合酶I ②DNA连接酶 ③逆转录酶 ④核酸酶 4、YAC是（ ）
①酵母人工染色体 ②人工Y染色体 ③细菌人工染色体 ④粘粒
5、用Sanger双脱氧法进行DNA测序时，凝胶上读出的序列是（ ） ①模板链的 ②模板链的互补链的 ③mRNA的 ④cDNA的 6、同位素标记探针是指在探针上连接（ ） 32
①P ②生物素 ③荧光素 ④酶
7、Southern杂交时，探针与膜上的什么成分杂交？（ ） ①DNA ②RNA ③蛋白质 ④染色体
8、同一种限制性核酸内切酶分别切割目的基因DNA与载体DNA时，酶切片段不能互相连接的是（ ）
①目的基因与目的基因之间 ②载体DNA与载体DNA之间 ③目的基因与载体DNA之间 ④目的基因与mRNA之间
9、pBR322是一种什么样的载体？（ ） ①粘粒 ②质粒
③噬菌体 ④人工微小染色体 10、PCR引物成对存在，位于目的基因的（ ） ①5'端 ②3'端 ③C端 ④N端 答 案：
1. ① 2. ① 3. ③ 4. ① 5. ② 6. ① 7. ① 8. ④ 9. ② 10. ① 单 选：
1、构建CDNA文库时，选用下列哪种载体较好？（ ） ①质粒 ②SV40病毒
③Ti质粒 ④YAC（酵母人工染色体） 2、Northern杂交时，探针与膜上的什么成分杂交？（ ） ①DNA ②RNA ③蛋白质 ④染色体
3、以mRNA为模板合成CDNA时，所用的工具酶是（ ） ①DNA聚合酶I ②DNA连接酶 ③逆转录酶 ④核酸酶 4、BAC是（ ）
①酵母人工染色体 ②人工Y染色体 ③细菌人工染色体 ④粘粒
5、用酶促合成法进行DNA测序时，凝胶上读出的序列是（ ） ①模板链的 ②模板链的互补链的
第2页 共6页 ③mRNA的 ④cDNA的
6、同位素标记探针是指在探针上连接（ ） 32
①P ②生物素 ③荧光素 ④酶
7、同一种限制性核酸内切酶分别切割目的基因DNA与载体DNA时，酶切片段不能互相连接的是（ ）
①目的基因与目的基因之间 ②载体DNA与载体DNA之间 ③目的基因与载体DNA之间 ④目的基因与mRNA之间
8、下列基因中，哪个不能作为基因工程载体的报告基因？（ ） ①lacZ ②GFP
③Ampr
④ori 9、M13噬菌体是（ ）
①双链噬菌体 ②单链噬菌体 ③质粒 ④粘粒 10、常规PCR反应所用到的酶是（ ） ①核酸酶 ②逆转录酶 ③DNA连接酶 ④Taq酶 答 案：
1. ① 2. ② 3. ③ 4. ③ 5. ② 6. ① 7. ④ 8. ④
② 10. ④ 9.