实验结束后,每人写出一份实验报告。要求实验报告以小论文格式书写,内容包括摘要、前言、方法、结果、讨论、参考文献(参见附录3)。
附可供参考的课题:
1、 生物电现象的观察(通过实验验证生物电现象的存在)。
2、 胃肠运动的直接观察(观察胃肠运动的各种形式神经和体液对胃肠运动的调节作
用)。
3、 反射弧分析(通过实验分析反射弧的组成。证明任何一个反射活动,只有当实现该
反射的反射弧存在,并保证其完整性时,反射活动才能出现)。
4、 脊髓反射(通过实验,观察和了解兴奋在中枢神经系统内的传导和传导的一般特
征)。
5、 甲状腺对蝌蚪变态的影响(了解甲状腺对动物发育的影响)。
6、 胰岛素和肾上腺素对血糖的影响(了解胰岛素和肾上腺素对血糖的影响)。 7、 麻醉药对动脉血压的影响。 8、 试证明温度对肌肉收缩的影响。 9、 动脉血压对尿量的影响。 10、葡萄糖影响尿量的机制。
实验8 有机磷农药中毒及解救
一、目的要求
1、观察有机磷农药中毒的症状。掌握有机磷农药中毒药物的解救方法及原理。 2、学习阿托品及解磷定的救治作用及胆碱脂酶活力的测定方法。
原理:正常生理情况下,体内乙酰胆碱含量的维持依赖于神经突触部位的乙酰胆碱酯酶。有机磷酸酯类中毒后,胆碱酯酶活性受到抑制,失去水解乙酰胆碱的能力,乙酰胆碱在体内大量积聚,激动M、N受体,动物出现M和N样中毒症状。本实验通过应用抗胆碱药阿托品、胆碱脂酶复活药解磷定的解救作用,进一步分析两药的作
用机制。 二、器材与药品
恒温水浴、分光光度计、试管架、试管、吸管、滤纸、漏斗、兔保定箱、注射器、测瞳尺、刀片、棉球等。
0.1%阿托品、5%敌百虫、1%肝素、2.5%解磷定、PH7.2磷酸盐缓冲液、0.007mol/L乙酰胆碱、碱性羟胺溶液、4N盐酸、10%三氯化铁。 三、实验对象
家兔。 四、实验方法
1、取家兔现两只。以甲、乙编号称重,观察下列指标:活动情况、呼吸、瞳孔大小、唾液分泌、大小便、肌张力及有无肌肉震颤等。
2、将两兔分别固定于兔箱内,以蘸有二甲苯或酒精棉球擦拭耳外缘静脉,使血管扩张,当其充血明显时,用刀片横断耳外缘静脉刀口不要过大过深,让血液自然滴入试管中(管中预先滴入2滴肝素,自然干燥备用), 并轻轻振荡试管,防止凝血,供侧定正常胆碱脂酶活性用。
3、分别给甲乙两兔静脉注射5%敌百虫2.0ml/kg体重,按前述观察并记录中毒症状,待中毒症状明显时,依上法采血供侧定中毒后胆碱脂酶活性用。
4、立即给甲兔静脉注射0.1%阿托品1ml/kg体重,乙兔静脉注射2.5%解磷定2ml/kg体重,然后每隔5分钟上,再测生理指标一次,观察并记录中毒症状有何变化,特别注意两兔的区别,等中毒症状明显减轻后再按上法取血,供解救后测胆碱脂酶活性用。
附:全血胆碱脂酶的测定 【目的和原理】
血中胆碱脂酶能催化乙酰胆碱为乙酸和胆碱。在一定条件下(温度、PH、时间),乙酰胆碱水解的量和胆碱脂酶活力成正比。故在一定量的血液中加入一定量的乙酰胆碱,经过一定反应时间,测定剩余的乙酰胆碱,即可算出水解乙酰胆碱的量,从而推算出胆碱脂酶的活力。
乙酰胆碱可与羟胺作用生成羟肟酸,后者在酸性条件下与Fe形成红棕色络合羟肟酸铁,通过比色即可算出乙酰胆碱的含量。
3+
【实验方法】
取上述四次待测血液样本,测定方法按表操作进行,操作每加一种试剂均需充分摇匀,并严格控制保温时间。
步骤 标准管(ml) 测定管(ml) 1.0 0.1
空白管(ml) 1.0 0.1
磷酸盐缓冲液pH7.2 1.0 血样
碱性羟胺溶液
0.1
37℃水浴保温3min
37℃水浴保温20min
1.0
碱性羟胺溶液 乙酰胆碱底物应用液
33.3%(V/V)盐酸溶液
10%三氯化铁溶液 乙酰胆碱底物应用液
4.0 1.0
4.0
4.0
室温静置2min 2.0
2.0
2.0
2.0
2.0
2.0 1.0
混匀2分钟后,分别过滤,于15分种内用分光光度计比色(波长525),以蒸馏水调零,读取各管光密度值。 计算:
胆碱酯酶活性(单位/ml)?
五、讨论与分析
标准管光密度-测定管光密度?70
标准管光密度1、有机磷类药物引起动物中毒的作用机理是什么? 2、分析阿托品及解磷定的药理作用及解毒机理?
实验9 胰岛素和肾上腺素对血糖的影响
一、目的要求
了解胰岛素调解血糖的机能,掌握肾上腺素,葡萄糖的药理作用。 二、实验原理
胰岛素具有降低血糖的作用。它通过促进易化扩散作用从而增强多种组织摄取糖的机能;同时它不但激活肝细胞内葡萄糖激酶和使糖原合成酶的浓度增高,而且还使肝细胞内环磷酸苷(CAMP)减少。肾上腺素能使(CATP)增加,从而增加磷酸化酶的活性,促进糖原分解,增加血糖浓度。 三、器材与药品
1ml注射器或20ml注射器、台称、恒温水浴槽、大烧杯、镊子、酒精棉球等。 胰岛素、0.1%肾上腺素,20%葡萄糖。 四、实验对象
小白鼠或兔。 五、实验方法
1、 取事先经过饥饿24~36h的兔2只,称其体重后,从耳静脉注射胰岛素10~
20IU/kg。约经1~2h,观察动物有无不安,呼吸急促,痉挛,甚至休克现象的发生。待低血糖症状出现时,给甲兔及时耳静脉注射20%葡萄糖20ml(温热),给乙兔及时皮下注射0.1%肾上肾素(按0.4ml每千克体重)。仔细观察实验动物,并记录观察结果。
2、 用小白鼠进行实验时,选择体重约20g的小白鼠6只,禁食24h,实验前1h给3
只小白鼠分别皮下1~2IU胰岛素;另外3只以同样药品在实验前半小时皮下注射。当小白鼠出现低血糖症状后在两组中各留下1只作对照,其余两只,分别腹腔注射(或尾静脉注射)20%葡萄糖1ml和皮下注射(或尾静脉注射)0.1%肾上腺素0.1ml观察并作记录。