选修3《现代生物科技专题》知识点总结

专题1 基因工程 基因工程的概念

基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNA重组技术。

操作水平：DNA分子水平 原理：基因重组

优点：1.突破物种界限 2.定向改造生物的遗传特性 （一）基因工程的基本工具

1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶） （1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。

（2）功能：能够识别特定的核苷酸序列，并在特定的切点切割，因此具有专一性。 （3）作用的化学键：切割磷酸二酯键

(4)结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。 2.“分子缝合针”——DNA连接酶

(1)作用：将两个具有相同粘性末端的DNA片段连接起来，形成重组DNA （2）连接的化学键：磷酸二酯键 （3）与DNA聚合酶作用的异同:

DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。 DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。

不同点 连接的DNA 模板 连接的对象 相同点 作用实质 DNA连接酶 双链 不要模板 2个DNA片段 DNA聚合酶 单链 要模板 单个脱氧核苷酸添加到已存在的单链DNA片段上 形成磷酸二酯键 蛋白质 化学本质 3.“分子运输车”——运载体 第一步：目的基因的获取

1.从基因文库中获取（不知道目的基因的核苷酸序列的情况下采用） 2.人工合成。

常用方法有：（1）反转录法（已经获得mRNA的情况下采用）

（2）化学合成法（知道目的基因的核苷酸序列、基因比较小的情况下采用） 3.PCR技术扩增目的基因（知道目的基因两端的核苷酸序列、基因比较大的情况下采用） （1）PCR的含义：是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。 （2）目的：获取大量的目的基因 （3）原理：DNA双链复制

（4）过程：第一步：变性，加热至90～95℃DNA解链为单链；（高温解旋）

第二步：复性，冷却到55～60℃，引物与两条单链DNA结合；

第三步：延伸，加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始进行互补链的合成。

（5）特点：指数(2n)形式扩增 第二步：基因表达载体的构建(核心)

1.目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。

2.组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因

（1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录mRNA。

（2）终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段 ，位于基因的尾端，使转录停止。

（3）标记基因的作用：鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素基因。 第三步：将目的基因导入受体细胞_

1.转化的概念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 2.常用的转化方法：

（1）将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是 农杆菌转化法，其次还有 基因枪法和 花

粉管通道法等。

（2）将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是 显微注射技术。方法的受体细胞多是 受精卵。 （3）将目的基因导入微生物细胞：感受态细胞法：用 Ca2+ 处理细胞（使其成为 感受态细胞 ，再将重组表达载体DNA分子 溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程）

原核生物作为受体细胞的优点： 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少 第四步：目的基因的检测和表达

1.首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子杂交(DNA-DNA)技术。

2.其次还要检测目的基因是否转录出mRNA，方法是采用分子杂交(DNA-RNA)技术。 3.最后检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法是采用抗原—抗体杂交技术。

（1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。

②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。 ③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。 ④对受体细胞无害。

（2）最常用的载体是质粒,它是一种环状DNA分子。 （3）其它载体：噬菌体、动植物病毒 (二)基因工程的基本操作程序

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4.有时还需进行个体生物学水平的鉴定。如生物抗虫或抗病的鉴定等。 （三）基因工程的应用 基因工程的应用

1.植物基因工程：抗虫、抗病、抗逆转基因植物，利用转基因改良植物的品质。

2.动物基因工程：提高动物生长速度；改善畜产品品质；用转基因动物生产药物：如乳腺生物反应器和膀胱生物反应器，方法是将目的基因导入哺乳动物的受精卵中，使其发育成转基因动物。 3.基因治疗是把正常基因导入病人的体内，使该基因的表达产物发挥功能，从而达到治疗的目的，这是治疗遗传病最有效的手段。

4.基因诊断：又称为DNA诊断，是采用基因检测的方法来判断患者是否出现了基因异常或携带病原体。

（四）蛋白质工程的概念

蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求。（基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质）

转录 翻译

蛋白质工程的基本途径：从预期的蛋白质功能出发 设计预期的蛋白质结构 推测应有的氨基酸序列

找到相对应的脱氧核苷酸序列（基因） ★ 蛋白质工程与基因工程区别

脱分化 再分化 发育

（2）过程：离体的植物器官、组织或细胞 愈伤组织 胚状体 植物体 常用的植物激素生长素和细胞分裂素。

（3）用途：微型繁殖、作物脱毒（选材应该选择茎尖组织）、制造人工种子、单倍体育种（最大的优点是明显缩短育种年限，得到的全为纯种）、筛选突变体、细胞产物的工厂化生产。

（4）地位：是培育转基因植物、植物体细胞杂交培育植物新品种的最后一道工序。 2.植物体细胞杂交技术

（1）原理：细胞膜的流动性、植物细胞的全能性 （2）过程：

去壁的方法：酶解法；诱导融合的方法：物理法包括离心、振动、电激等。化学法是用聚乙二醇（PEG）作为诱导剂。

（4）意义：克服了远缘杂交不亲和的障碍。

（二）动物细胞工程 1. 动物细胞培养

（1）概念：动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在

适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。

（2）原理：细胞增殖

（3）动物细胞培养的流程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰

蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。 （4）细胞贴壁和接触抑制：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。细胞数目

不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互抑制时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。

专题2 细胞工程

（一）植物细胞工程 1.植物组织培养技术

（1）原理：植物细胞的全能性

全能性表达的难易程度：受精卵＞生殖细胞＞干细胞＞体细胞；植物细胞＞动物细胞

（5）动物细胞培养需要满足以下条件

①无菌、无毒的环境：培养液应进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以

防培养过程中的污染。此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。

②营养：合成培养基成分：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。通常需加入血清、

血浆等天然成分。

③温度：适宜温度：哺乳动物多是36.5℃＋0.5℃；pH：7.2～7.4。

④气体环境：95%空气＋5%CO2。O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。

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（5）动物细胞培养技术的应用：制备病毒疫苗、制备单克隆抗体、检测有毒物质、培养医学研

究的各种细胞。

2.动物体细胞核移植技术和克隆动物

（1）哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植（比较容易）和体细胞核移植（比较难）。 （2）选用去核卵(母)细胞的原因：卵(母)细胞比较大，容易操作；卵(母)细胞细胞质多，营养丰富。卵细胞的细胞质可使体细胞细胞核全能性得到表达。 （3）体细胞核移植的大致过程是：（右图）

核移植

早期胚胎培养

胚胎移植

（4）体细胞核移植技术的应用：

①加速家畜遗传改良进程，促进良畜群繁育； ②保护濒危物种，增大存活数量； ③生产珍贵的医用蛋白； ④作为异种移植的供体； ⑤用于组织器官的移植等。

（5）体细胞核移植技术存在的问题：克隆动物存在着健康问题、表现出遗传和生理缺陷等。 3.动物细胞融合

（1）动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。融合后

形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。

（2）动物细胞融合与植物原生质体融合的原理基本相同，诱导动物细胞融合的方法与植物原生

质体融合的方法类似，常用的诱导因素有聚乙二醇、灭活的病毒、电刺激等。

（3）动物细胞融合的意义：克服了远缘杂交的不亲和性，成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤

和生物生物新品种培育的重要手段。 4.单克隆抗体

（1）抗体：一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。从血清中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差。

（2）单克隆抗体的制备过程：

两次筛选:第一次筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。 （3）杂交瘤细胞的特点：既能大量繁殖，又能产生专一的抗体。 （4）单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。

（5）在腹腔内增殖的优点：不需要特定的培养基，不需要严格的外界条件。 （6）筛选的时候用：特定的选择性培养基进行筛选。

（7）单克隆抗体的作用：

① 作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质的细微差异，并跟一定抗原发生特异性结合，具有准确、高效、简易、快速的优点。

② 用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗癌症治疗，可制成“生物导弹”（借助单克隆抗体的导向作用），也有少量用于治疗其它疾病。

专题3 胚胎工程 3.1 体内受精和早期胚胎发育

胚胎工程的建立 1. 精子的发生

场所：睾丸的曲细精管

时间：从初情期开始，到生殖机能衰退

过程：（1） 精原细胞→多个初级精母细胞（通过数次有丝分裂）

（2） 1个初级精母细胞→2个次级精母细胞→4个精子细胞（通过减数分裂，即

MI和MII）

（3）精子细胞→精子（通过变形）

单克隆抗体 小鼠内 体内培养 从腹水提取 细胞培养 选择培养细胞 培养基 体外培养 从培养液提取 细胞融合 杂交瘤细胞 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 抗原注入小鼠体内 分离 第 3 页 共 6 页

2.卵子的发生

场所：卵巢

时间：从胎儿时期开始（胎儿时期完成了卵泡的形成和在卵巢内的储备）

过程：（1）卵原细胞→初级卵母细胞

（2）1个初级卵母细胞→1个次级卵母细胞＋第一极体（排卵前后完成） （3）1个次级卵母细胞→1个卵子＋第二极体（精子和卵子结合中完成）

3.受精

概念：精子和卵子结合成合子（受精卵）的过程。 场所：雌性的输卵管内

过程：（1）受精前的准备阶段1：精子获能

（2）受精前的准备阶段2：卵子的准备（到减数第二次分裂中期，具备与精子受

精的能力） （3）受精阶段

a.精子穿越放射冠和透明带：顶体反应，透明带反应 b.进入卵黄膜：卵黄膜封闭作用

4. 早期胚胎发育

卵裂期：细胞在透明带中进行有丝分裂，细胞数不断增加，但胚胎的总体积并

不增加，或略减小。

桑椹胚：胚胎细胞达32个左右，每一个细胞都是全能细胞

囊胚：有囊胚腔，出现孵化过程。开始出现分化：内细胞团，将来发育成胎

儿的各种组织。滋养层发育成胎膜和胎盘。 原肠胚：出现外中内三个胚层和原肠腔

3.2 体外受精和早期胚胎培养

方法一：用促性腺激素处理，使其超数排卵，从中输卵管冲取

卵子（针对实验动物，家畜猪、羊等）

卵母细胞的采集 方法二：从屠宰母畜卵巢中采集

方法三：借助超声波探测仪、内窥镜、腹腔镜等工具直接从活体母畜卵巢中吸取（针对大家畜或大型动物，如牛）

1.体外受精 卵母细胞的培养：在体外人工培养成熟

精子的采集：方法有假阴道法、手握法和电刺激法等

精子的获能：方法有培养法（通过获能培养液）、化学诱导法（通过肝素或钙离子载体A23187）

获能溶液或专用的受精溶液

受精：获能的精子 ＋培养成熟的卵子 完成受精

2. 胚胎早期培养 条件：受精卵在发育培养液中培养

培养液成分：无机盐、有机盐、维生素、激素、氨基酸、核苷酸、血清等 3. 试管动物技术：通过人工操作使卵子和精子在体外成熟和受精，并通过培养发育为早期胚胎（桑葚胚或囊胚）后，再经移植产生后代的技术。

3.3 胚胎工程的应用及前景 一、胚胎移植

1.概念：是指将雌性动物的早期胚胎，或者通过体外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物的体内，使之继续发育为新个体的技术。其中提供胚胎的个体叫供体（遗传特性和生产性能优秀），接受胚胎的个体叫受体（有健康的体质和正常繁殖能力）。

2.应用：胚胎移植是转基因、核移植、或体外受精等技术的最后一道“工序” 3.现状：在牛的胚胎移植中，技术方法更为简便、实用。

4.意义：可充分发挥雌性优良个体繁殖潜力。供体主要职能只是产生优良特性的胚胎，缩短繁

c.原核形成和配子结合 殖周期。

5.生理学基础： 胚胎移植成功与否关系到：供体和受体的生理状况

1）供、受体生殖器官的生理变化相同，为胚胎提供相同的生理环境

2）早期胚胎没有与母体子宫建立组织联系，为胚胎收集提供可能 3）受体对外来胚胎基本不发生免疫排斥反应，为胚胎的存活提供可能

4）胚胎能与受体子宫建立正常的生理和组织联系，但其遗传物质在孕育过程中

不受影响

6.基本程序

1）供、受体的选择和处理（使用激素进行同期发情处理、（促性腺激素）超数排卵处理） 2）配种或人工受精

3）胚胎收集（冲卵（早期胚胎））、检查（胚胎发育到桑椹胚或囊胚）、培养或保存（－196℃的液氮）

4）胚胎移植：手术法（引出子宫和卵巢将其注入）；非手术法（用移植管将其送入子宫） 5）移植后的检查（是否妊娠）等

7.胚胎移植时间

不同动物胚胎移植的时间不同。(牛、羊一般要培育到桑椹胚或囊胚阶段才能进行移植，小鼠、家兔等实验动物可在更早的阶段移植，人的体外受精胚胎可在8-16个细胞阶段移植。) 二、胚胎分割

1.概念：采用机械方法将早期胚胎切割成2、4或8等份等，经移植获得同卵双胎或多胎的技术。 2.仪器设备：实体显微镜和显微操作仪

3.意义：来自同一胚胎的后代具有相同的遗传物质，属于无性繁殖。

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