水产养殖与水域生态实验室实验方法-水化学

每毫升使用液含1.00μg亚硝酸盐氮。使用液使用当天配置。 C. 步骤

（1）绘制曲线：在6支50ml比色管中，分别加入0、1.00、3.00、5.00、7.00和10.00ml亚硝酸盐氮标准使用液，用不含亚硝酸盐的水稀释至标线。加入1.0ml显色剂，加塞，混匀。静置20min。在2h内以水为参比，测量吸光度（波长540nm，比色皿光程10mm），绘制校准曲线：y=ax+b，其中a、b为常数。 注：测定前先对比色皿进行校正。

（2）水样测定：将水样摇匀后经0.45μm滤膜过滤（滤器使用前先用水样润洗一遍），取50ml过滤水样于50ml比色管中（水样中硝酸盐含量较高，则进行适度稀释），每个比色管中分别加1.0ml显色剂，摇匀。静置20min。在2h内以水为参比，测量吸光度。 （3）计算

将水样的吸光值代入标准曲线方程，求出亚硝酸盐氮含量。计算方法如下：

NO2-N（N：mg/L）=aA+b

5 高锰酸盐指数—酸性高锰酸钾法

A. 方法原理

加入硫酸使水样呈酸性后加入一定量的高锰酸钾溶液，在沸水浴中加热反应一定的时间，利用高锰酸钾氧化水样中有机物。加入过量草酸钠溶液还原剩余的高锰酸钾，用高锰酸钾溶液回滴过量的草酸钠，计算求出高锰酸盐指数。高锰酸钾指数是一个相对的条件性指标，其测定结果与溶液的酸度、高锰酸盐浓度、加热温度和时间有关。因此测定时必须严格控制条件以使结果具有可比性。

方法的适用范围：适用于氯离子含量不超过300mg/L的水样。当水样的高锰酸盐指数值超过10mg/L时则酌情分取少量试样，并用水稀释后再进行测定。

方法的精密度和准确度：五个实验室分析高锰酸盐指数为4.0mg/L的葡萄糖标准溶液，实验室内相对标准偏差为4.2%；实验室间相对标准偏差为5.2%。 B. 仪器与化学试剂 ①50ml酸式滴定管 ②250ml锥形瓶 ③沸水浴、调温电炉 ④定时钟

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⑤高锰酸钾贮备液（1/5KMnO4=0.1mol/L）：溶解3.2g高锰酸钾于1200ml水中，煮沸0.5~1h，使体积减少到1000ml左右，放置过夜。用G-3号玻璃砂芯滤器过滤，滤液贮存于棕色试剂瓶中避光保存（贮备液）。贮备液使用前用0.1000mol/L的草酸钠标准液标定浓度。 ⑥高锰酸钾标准溶液（1/5KMnO4=0.01mol/L）：吸取100ml的高锰酸钾贮备液，用水稀释至1000ml（标准溶液），标准溶液浓度为0.01mol/L，贮于棕色瓶中，使用当天标定。 ⑦草酸钠标准贮备液（1/2Na2C2O4=0.1000mol/L）：在105~110℃烘优级纯无水草酸钠1h后冷却，准确称取0.6705g，溶于水中，在100ml容量瓶中定容（贮备液）。

⑧草酸钠标准使用液（1/2Na2C2O4=0.0100mol/L）：吸取10.00ml草酸钠贮备液于100ml容量瓶中，用水稀释至标线。

⑨（1+3）硫酸：按体积比配制，趁热滴加高锰酸钾溶液至呈微红色。 C. 步骤

（1）将水样摇匀，取100ml水样（如高锰酸钾指数高于10mg/L，则应进行稀释）于250ml的锥形瓶中。

注：水样有机质较多时，如稀释倍数太小，加热后溶液可能失去淡红色（高锰酸钾被消耗完），这时无法继续测定。

（2）加入5ml（1＋3）硫酸，混匀。

（3）加入10.00ml 0.01mol/L高锰酸钾溶液，摇匀，立即放入沸水浴中加热30min（沸水浴液面要高于反应溶液的液面，从水样沸腾起计时）。

注：在水浴中加热完毕后水样应保持淡红色，如颜色变浅或全部褪去说明高锰酸钾用量不够。此时，应将水样稀释倍数加大后再测定，使加热氧化后残留的高锰酸钾应为其加入量的1/2~1/3。

（4）取下锥形瓶，趁热加入10.00ml 0.0100mol/L草酸钠标准溶液，摇匀。立即用0.01mol/L高锰酸钾溶液滴定水样至微红色，记录高锰酸钾溶液消耗量。

注：（1）在酸性条件下，草酸钠和高锰酸钾的反应温度应保持在60~80℃，所以滴定操作必须趁热进行，若溶液温度过低，需适当加热。

（2）用0.01mol/L高锰酸钾溶液滴定水样时颜色突变不很明显，因此要特别注意颜色变化。

（5）高锰酸钾溶液浓度标定：将已滴完的水样溶液加热至约70℃，准确加入10.00ml草酸钠标准溶液（0.0100mol/L），再用0.01mol/L高锰酸钾溶液滴定至显微红色，记录高锰酸钾溶液的消耗量，按下式求得高锰酸钾溶液的校正系数（K）

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K＝10.00/V

式中：V—高锰酸钾溶液消耗量（ml）

若水样需要稀释时，应取100ml水作为空白，空白测定步骤与水样测定步骤相同。 注：高锰酸钾标准溶液视水样有机物含量而定，高锰酸钾溶液的浓度不能太高或太低。 （6）计算

水样不经过稀释时：高锰酸盐指数（O2，mg/L）=[(10+V1)K-10] ×M×8×1000/100 式中：V1—滴定水样时，高锰酸钾溶液的消耗量(ml)；

K—校正系数；

M—草酸钠溶液浓度（mol/L）； 8—氧（1/2O）摩尔质量。

水样经过稀释时：高锰酸盐指数（O2，mg/L）={ [(10+V1)K-10] –[(10+ V0) K -10]×C}×M×8×1000/ V2

式中：V0——空白试验中高锰酸钾溶液的消耗量(ml)；

V2——分取水样量(ml)；

C——稀释的水样中含水的比值，例如，10.0ml水样，加90ml水稀释至100ml，则C=0.90。

6 生化耗氧量—稀释接种法

A. 方法原理

生化需氧量（BOD）指在规定条件下（20℃±1℃培养5d），微生物分解水中的某些可氧化物质，特别是有机物所进行的生物化学过程中消耗溶解氧的量。此生物氧化全过程进行的时间很长，如在20℃下培养时完成此过程需100多天。目前国内外普遍规定是在20℃±1℃下培养5d，分别测定样品培养前后的溶解氧，二者之差即为BOD5 （毫克氧/升）。 B. 仪器和试剂

①恒温培养箱（20℃±1℃） ②5~20L细口玻璃瓶 ③1000~2000ml量筒

④玻璃搅棒：棒底端固定一个直径比量筒底小，并带有几个小孔的硬橡胶板，棒长度应比所用量筒高度长200mm。

⑤250~300ml溶氧瓶：带有磨口玻璃塞并具有供水封用的钟形口。

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⑥虹吸管，供分取水样和添加稀释水用。

⒂稀释水：向5~20L玻璃瓶内加入一定量的稀释水，控制水温20℃左右，用无油空气压缩机或薄膜泵将吸入的空气先后经活性碳吸附管及水洗涤管后，导入稀释水内曝气2~8h（曝气亦可导入适量纯氧），使稀释水中溶氧近饱和。稀释水的pH值应为7.2，BOD5应小于0.2mg/L。将瓶口盖两层洗涤晾干的纱布，置于20℃培养箱中放置数小时，使水中溶氧含量达8mg/L左右。 C. 步骤

（1）水样预处理

①水样pH若超出6.5~7.5时，可用稀盐酸或氢氧化钠溶液调节pH近7，但盐酸或氢氧化钠溶液用量不要超过水样体积的0.5%。若水样的酸度或碱度很高，可改用高浓度的碱或酸液进行中和。

④从水温较低的水域或富营养化湖泊中采集的水样，可能含过饱和溶氧，此时应将水样迅速升温至20℃左右，在不满瓶的情况下充分振摇，并时时开塞放气，以赶出过饱和的溶氧。从水温较高的水域或废水排放口取得的水样，应迅速使其冷却至20℃左右并充分振摇，使与空气中氧分压接近平衡。 （2）水样不需稀释时测定BOD：

①溶解氧较高、有机物含量较少的地表水，可不经稀释而直接以虹吸法将约20℃的混匀水样转入两个溶氧瓶内，转移过程中应注意不产生气泡。以同样的操作使两个溶氧瓶充满水样后溢出少许，加塞。瓶内不应产生气泡。

②其中1瓶随即测定溶氧，另2瓶的瓶口水封后放入培养箱中，在20℃±1℃培养5天。培养过程中注意添加封口水。

③从开始放入培养箱起算，经过5昼夜后，弃去封口水，测定溶氧瓶内的溶氧。 （3）水样需稀释时测定BOD：

①稀释倍数的确定：根据实践经验提出下述计算方法，供稀释时参考。 ②稀释操作：

直接稀释法：直接稀释法是在溶解氧瓶内直接稀释。在已知两个容积相同（其差<1ml）的溶解氧瓶内，用虹吸法加入部分稀释水（或接种稀释水）使刚好充满，加塞，勿留气泡于瓶内。其余操作与上述一般稀释法相同。 （4）计算

①不经稀释直接培养的水样： BOD5(mg/L) =C1-C2

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