A．反转录酶 B．多聚核苷酸激酶 C．引物酶 D．RNA聚合酶 E．末端转移酶 22．重组DNA技术常用的限制性核酸内切酶为（B）
A．Ⅰ类酶 B．Ⅱ类酶 C．Ⅲ类酶 D．Ⅳ类酶 E．Ⅴ类酶 23．在分子生物学领域，分子克隆专指(C)
A．细胞克隆 B．RNA克隆 C．DNA克隆 D．抗体克隆 E．mRNA克隆 24．用于重组DNA的限制性核酸内切酶识别核苷酸序列的(D)
A．正超螺旋结构 B．负超螺旋结构 C．螺旋结构 D．回文结构 E．锌指结构 25．在基因工程中通常所使用的质粒是(B)
A．细菌的染色体DNA B．细菌染色体外的DNA C．病毒染色体DNA D．病毒染色体外的DNA E．噬菌体DNA
26．构建基因组DNA文库时，首先需分离细胞的（A）
A．染色体DNA B．线粒体DNA C．总mRNA D．tRNA E．rRNA 27．建cDNA文库时，首先需分离细胞的（C）
A．染色体DNA B．线粒体DNA C．总mRNA D．tRNA E．rRNA 28．设计聚合酶链反应的引物时，应考虑引物与模板的（C） A．5＇端特定序列互补 B．5＇端任意序列互补
C．3＇端特定序列互补 D．3＇端任意序列互补 E．中间序列互补 30．确切地讲，cDNA文库包含 （E）
A．一个物种的全部基因信息 B．一个物种的全部mRNA信息 C． 一个生物体组织或细胞的全部基因信息
D．一个生物体组织或细胞的全部mRNA信息 E．一个生物体组织或细胞所表达mRNA信息
31．利用聚合酶链反应扩增特异DNA序列重要原因之一是（C）
A． 反应体系内存在特异DNA模板 B．反应体系内存在特异RNA模板 C．反应体系内存在特异DNA引物 D．反应体系内存在特异RNA引物 E． 反应体系内存在的TaqDNA聚合酶具有识别特异DNA序列的作用 33．下列描述最能确切表达质粒DNA作为克隆载体特性的是（D） A．小型环状双链DNA分子 B．携带有某些抗药性基因
C．在细胞分裂时恒定地传给子代细胞 D．具有自我复制功能 E．获得目的基因
三、填空题(每空0．5分)
1．通过自动获取或人为地供给外源______，使细胞或培养的受体细胞获得新的______，这就是转化作用。【DNA；遗传表型】
3．一个完整的基因克隆过程应包括：目的基因的获取，______的选择与改造，_________和__________连接为重组DNA，重组DNA分子导入_________，筛选出含感兴趣基因的重组DNA转化细胞。【克隆载体；目的基因；载体DNA；受体细胞】
4．限制性核酸内切酶是一类识别并水解_________________的核酸___________酶。
【双链DNA特异序列；内切】
5．科学家感兴趣的外源基因又称___________，其来源有几种途径：化学合成，酶促合成cDNA，制备的基因组DNA及_________技术。【目的基因；PCR】
6．外源DNA离开染色体是不能复制的。将_______与______连接，构建成重组DNA分子，外源DNA则可被复制。 【外源基因；载体DNA】
7．根据克隆载体性质不同，将重组DNA分子导人细菌的方法有_______、________及感染。【转化；
转染】
四、名词解释题(每小题2分)
1．质粒 【是存在于细菌染色体外的小型环状双链DNA分子。质粒分子本身是含有复制功
能的遗传结构，能在宿主细胞独立自主地进行复制，并在细胞分裂时恒定地传给子代细胞。质粒带有某些遗传信息，所以会赋予宿主细胞一些遗传性状。因为质粒DNA有自我复制功能及所携带的遗传信息等特性，故可作为重组DNA操作的载体。】
5．目的基因 【应用重组DNA技术有时是为分离、获得某一感兴趣的基因或DNA序列，
或是为获得感兴趣基因的表达产物——蛋白质。这些感兴趣的基因或DNA序列就是目的基因，又称目的DNA。目的DNA有两种类型，即cDNA和基因组DNA。】 7．cDNA文库 【以mRNA为模板，利用反转录酶合成与mRNA互补的DNA，即cDNA，
再复制成双链cDNA片段，与适当载体连接后转入受体菌。不同细菌包含了不同mRNA为模板的cDNA分子或片段，这样生长的全部细菌所携带的各种cDNA分子或片段就代表了整个组织或细胞表达的各种mRNA信息，即cDNA文库。】
8．基因组DNA文库 【利用限制性核酸内切酶将染色体DNA切割成一定基因水平的许多
片段，其中即含有人们感兴趣的基因片段。将这些片段分于与适当的克隆载体拼接成重组DNA分子，继而转入受体菌，使每个细菌内都携带一种重组DNA分子。不同细菌所包含的重组DNA分子可能为不同的染色体DNA片段，这样全部转化细菌所携带的各种染色体片段就代表了染色体的整个基因组。存在于转化细菌内、由克隆载体所携带的所有基因组DNA片段的集合称基因组DNA文库。基因组DNA文库涵盖了基因组全部基因信息。】 √五、简答题
1．解释质粒，为什么质粒可作为基因载体。 （4分）
【参见“质粒”’名词解释；质粒的复制及表达功能、选择标志基因。】 2．何谓基因工程?简述基因工程的基本过程。 （7分） 3．何谓目的基因?写出其主要来源或途径。 （6分）
【参见“目的基因”名词解释。】
目前获取目的基因大致有如下几种途径或来源。
1．化学合成法：如果已知某基因的核苷酸序列，或根据某种基因产物的氨基酸序列推导出该多肽编码基因的核苷酸序列，再利用DNA合成仪通过化学合成原理合成目的基因。该方法适用于碱基数较少的目的基因，或大范围碱基突变的目的基因。
2．基因组DNA：直接从生物体提取总DNA，采用物理方法(剪切或超声波)或限制性内切酶将染色体DNA切割成许多片段，继而将它们与适当克隆载体结合，将重组DNA转入受体菌中扩增，每个细菌内都携带一种重组DNA分子的多个拷贝。全部细菌所携带的各种染色体DNA片段就涵盖了基因组全部信息，即基因文库（gene library）。建立基因文库后，结合适当的筛选方法从众多的转化子菌株中选出含某一基因的菌株，扩增分离得到目的基因。这种方法是为了构建基因文库，从中调用目的基因。
3． cDNA：以mRNA为模板，利用反转录酶合成与mRNA互补的DNA，再复制成双链cDNA片段，与适当载体连接后转入受体菌，扩增为cDNA文库。用适当方法cDNA文库中就可以筛选分离到目的基因。
4．聚合酶链反应：在有模板DNA、引物及dNTP存在时，向DNA合成体系中引入热稳定的Taq DNA聚合酶。反应体系经变性、退火及扩增循环自动。反复进行需要的目的DNA片段的酶促合成，使其按指数增长。
4． 何谓基因载体，说出哪些DNA可作为基因的载体。（5分）
【参见“基因载体”名词解释。】
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