《药物分析》实验指导书 下载本文

药材中总黄酮的含量,避免其他非黄酮成分对测定准确度的影响。

三.仪器与试药

紫外—可见分光光度计,三用紫外分析仪,索氏提取器,槐花药材,芦丁对照品,三氯化铝试液,5%亚硝酸钠溶液,10%硝酸铝溶液,氢氧化钠试液,甲醇,乙酸乙酯,甲酸,乙醚。 四.实验步骤 1.薄层色谱鉴别

(1)供试品溶液的制备,取槐花粉末0.2g,置于具塞试管中,加甲醇5ml,密塞,振摇10分钟,滤过,取滤液作为供试品溶液。

(2)对照品溶液的制备:取芦丁对照品适量,加甲醇制成浓度为4mg/ml的溶液,作为对照品溶液。 (3)测定法:吸取两种溶液各10ul,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯—甲酸-水(8:1:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以三氯化铝试液,待溶液挥干后,置紫外光灯(365nm)下检视,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的颜色的荧光斑点。 2.总黄酮含量测定

(1)对照品溶液的制备:取芦丁对照品50mg,精密称定,置于25ml量瓶中,加甲醇适量,置水浴上微热使溶解,放冷,加甲醇至刻度,摇匀。精密量取10ml,置于100ml量瓶中,加水至刻度,摇匀,即得浓度为0.2mg/ml的芦丁对照品溶液。

(2)标准曲线的制备:精密量取对照品溶液1ml,2ml,3ml,4ml,5ml与6ml,分别置于6个25ml量瓶中,各加水使成6.0ml,精密加5%亚硝酸钠溶液1ml,摇匀,放置6分钟,再加10%硝酸铝溶液1.0ml,摇匀,放置6分钟,加氢氧化钠溶液10.0ml,加水稀释至刻度,摇匀,放置15分钟,不加对照品溶液同法配制空白溶液,按照紫外可见分光光度法,在500nm波长处测定各溶液的吸光度,以浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线。

(3)测定法:将槐花粉碎,取槐花粗粉约1g,精密称定,置于索氏提取器中,加乙醚120ml,水浴加热回流至乙醚提取液无色,放冷,弃去乙醚提取液。提取器中再加入甲醇90ml,加热回流至甲醇提取液无色,将提取液置于100ml量瓶中,用少量甲醇洗涤索氏提取器,洗液并入上述100ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀。精密量取上述溶液10ml,置于100ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液。精密量取上述溶液10ml,置于100ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液。精密量取供试品溶液3ml,置25ml量瓶中,按照标准曲线制备项下的方法,自“加水使成6.0ml”起,同法测定吸光度,由标准曲线计算出供试品溶液中芦丁的重量(ug),即得。

槐花按干燥品计算,含总黄酮以芦丁(C27H30O16)计,槐花不得少于8.0%,槐米不得少于20.0%。

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五.注意事项

1.使用乙醚时,注意实验室不得有明火。

2.比色法中显色反应及条件对形成的稳定配位化合物有一定影响,因此实验中需要遵守平行操作原则:如配置标准系列溶液时,空白与标准系列溶液中加入各种反应试剂的量、顺序、反应时间与温度等操作步骤均应保持平行;所有加入的反应试剂均应使用刻度吸管精密量取,准确加入。

3. 注意吸收池(比色皿)的配对使用。

4. 进行含量测定时,洗涤索氏提取器的甲醇量需控制。 六 、 思考题

1. 槐花含量测定法中,为何先用乙醚回流提取并将提取液弃去? 2. 简述比色法测定槐花药材中总黄酮含量的基本原理。 七、 附录

1. 比色法的基本原理与测定方法 待测定样品本身在紫外-可见光区没有强吸收,或在紫外光区虽有吸收,但为了排除干扰、增加选择性或提高测定的灵敏度,可加入适当的显色剂,是待测样品与显色剂的反应产物的最大吸收波长移至可见光区,这种测定方法称为比色法。这种分析法可以用于药物的定性、定量测定。

用比色法测定时,由于显色时有很多因素会影响显色的深浅,所以供试品与对照品或标准品应遵循平行操作原则。在规定的波长处测定对对照品和供试品溶液的吸光度后,按照紫外分光光度法项下对照品比较法来计算供试品浓度。

当吸光度和浓度关系不呈线性时,应取数份浓度呈梯度的对照品溶液,用溶剂补充至同一体积,加入显色剂显色后测定各份溶液的吸光度,然后以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标绘制标准曲线,再根据供试品的吸光度在标准曲线上查得其相应浓度,并求出其含量。 2. 实验试液配制

(1)三氯化铝试液:取三氯化铝1g,加入乙醇使溶解成100ml,即得。 (2)5%亚硝酸钠溶液:取2.5g亚硝酸钠,加水溶解成50ml,摇匀即得。 (3)10%硝酸铝溶液:取5.0g硝酸铝,加水溶解成50ml,摇匀即得。 (4)氢氧化钠试液:取氢氧化钠4.3g,加水溶解成100ml,即得。

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实验九 维生素C制剂分析的综合设计性实验

【实验目的】

1、掌握碘量法的原理和操作方法。

2、掌握常用辅料对制剂含量测定的影响和排除方法。 3、掌握制剂的含量计算方法 【实验原理】

维生素C分子中的烯二醇基具有还原性,能被I2定量地氧化成二酮基:

1分子维生素C与2摩尔I相当(中国药典规定,1个I为1摩尔),所以维生素C的滴定当量等于分子量的1/2。 【实验材料】

试药:维生素C片,维生素C注射液。

仪器:25mL棕色滴定管,50mL移液管,刻度吸管,碘量瓶,100mL量瓶。 【实验内容】

(一)维生素C片(Vitamin C Tablets)

本品为白色或略带淡黄色片,含维生素C(C6H8O6)应为标示量的93.0%~107.0%

[含量测定]取本品20片,精密称定,研细,精密称取适量(约相当于维生素C 0.2g),置100mL量瓶中,加新沸过的冷水100mL与稀醋酸10mL的混合液适量,振摇使维生素C溶解并稀释至刻度,摇匀,

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经干燥滤纸迅速滤过,精密量取续滤液50mL,加淀粉指示液1mL,用碘滴定液(0.1mol/L)滴定,至溶液显蓝色并持续30秒钟不褪。每1mL碘滴定液(0.1mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6。

(二)维生素C注射液(Vitamin C Injection)

本品为维生素C的灭菌水溶液,无色或微黄色的澄明液体。含维生素C(C6H8O6)应为标示量的90.0%~110.0%。本品中可加适量的焦亚硫酸钠为稳定剂。

[含量测定]精密量取本品适量(约相当于维生素C 0.2g),加水15mL与丙酮2mL,摇匀,放置5分钟,加稀醋酸4mL与淀粉指示液1mL,用碘滴定液(0.1mol/L)滴定,至溶液显蓝色并持续30秒钟不褪。每1mL碘滴定液(0.1mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6。 【实验说明】

维生素C在空气中易被氧化,过滤、滴定等操作应迅速。

实验十 双波长分光光度法测定复方制剂含量

【实验目的】

1、掌握双波长分光光度法消除干扰的原理和波长选择原则。 2、掌握紫外-标准对照法测定药物含量及计算方法。 3、熟悉紫外分光光度仪的构造和使用操作。 【实验原理】

复方磺胺嘧啶片系由磺胺嘧啶和甲氧苄啶组成的复方制剂。两者在紫外区有较强的吸收。在盐酸溶液(9→1000)中,磺胺嘧啶在308nm处有吸收,而甲氧苄啶在此波长处无吸收,故可在此波长处直接测定磺胺嘧啶的吸收度而求得含量。甲氧苄啶在277.4nm波长处有较大吸收,而磺胺嘧啶在277.4nm处与308nm处有等吸收点。故可采用双波长法以277.4nm为测定波长,308nm为参比波长,测定甲氧苄啶在该两波长处的ΔA(ΔA=A277nm-A308nm)值来计算含量。

复方氨基比林注射液又称安痛定注射液,系氨基比林、安替比林和巴比妥组成的复方制剂,采用双波长分光光度法测定安替比林的含量。根据巴比妥在酸性溶液中不呈解离状态,而无明显紫外吸收;安替比林在233nm处有较强的吸收;氨基比林在233nm和268nm处有等吸收,选择安替比林的吸收峰波长233nm为测定波长λ1,氨基比林的等吸收波长268nm为参比波长λ2,则△A =A233nm-A268nm只与安替比林的浓度有关,而巴比妥、氨基比林及其他辅料不干扰测定。 【实验材料】

试药:磺胺嘧啶对照品,甲氧苄啶对照品,复方磺胺嘧啶片,安替比林对照品,安痛定注射液。 仪器:紫外分光光度仪,石英比色皿,100mL容量瓶,移液管。 【实验内容】

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