Subjects: Demonstration of Insulin Binding Globulin in the Circulation of Insulin-Treated Subjects\Invest. 35 (1956): 170-190

第一步：製備血漿（其insulin之濃度待測）或已知濃度之insulin溶液（作為對照之用）。

第二步：加入抗體（anti-insulin），同時也加入已知量的標示insulin，混合均勻。 第三步：靜置在4℃，4天。

第四步：加入滑石粉（talcum powder）或活性炭以吸著自由態之insulin（包括標示的insulin）。

第五步：遠心沉澱後，自由態之insulin隨著滑石粉或活性炭沉到管底，insulin與抗體之複合物（complex）則懸浮在上層液。

第六步：取出上層液，測量其放射性活性，算出insulin之量。

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? 1971,Engvall Perlmann酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay）ELISA ? 1940,荧光标记应用于免疫组化,

但用于荧光免疫分析，在70-80年代,因本底较高

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2.分类:不同标准多种分类方法 ① 按待测物:测定抗原,半抗原,抗体 ② 按反应性质:

?竞争性（competitive）

?非竞争性（non-competitive） ③ 按是否需要分离:

?均相免疫（homogeneous） ?非均相免疫（heterogeneous） ④ 按标记物种类:

放射性同位素——放射免疫分析; 酶———————酶免疫分析; 荧光染料————荧光免疫分析; 发光试剂————发光免疫分析 其它 ⑤ 按标记对象. ?标记抗体 ?标记抗原

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常见分类方式 3.竞争.非竞争性免疫分析: ① 非竞争免疫分析:

反应通式：待测抗原 标记抗体

Ag + Ab* = AgAb*

原理：通过测定Ab*的减少或AgAb*的增加,间接测定Ag 反之同理：

待测物 标记抗体 待测抗体

Ag* + Ab = AgAb*

此类方法亦称免疫计量分析（immunometric assay）

AgAb* Ag

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