解析：选B 用凝胶色谱法分离蛋白质时，相对分子质量较大的蛋白质迅速通过凝胶间隙，先被洗脱出来；相对分子质量较小的蛋白质进入凝胶内部而被滞留，后被洗脱出来。

2．关于电泳的说法，错误的是( )

A．电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程 B．带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动

C．蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率只取决于它所带净电荷的多少 D．用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，蛋白质的电泳迁移率完全取决于分子的大小

解析：选C 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带净电荷的多少以及分子的大小等因素。SDS能与各种蛋白质形成蛋白质-SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差异，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。

核心要点二

1．样品处理 (1)红细胞的洗涤

①目的：去除杂蛋白，以利于后续步骤的分离纯化。 ②过程：

| 血红蛋白提取和分离的实验操作

(2)血红蛋白的释放

①目的：使红细胞破裂释放血红蛋白。 ②过程：

a．将洗涤好的红细胞倒入烧杯中。

b．加蒸馏水到原血液的体积，其作用是使红细胞吸水涨破。 c．加入40%体积的甲苯，其作用是溶解细胞膜。

d．置于磁力搅拌器上充分搅拌10 min，其作用是加速红细胞破裂。 e．红细胞破裂，释放出血红蛋白。 (3)分离血红蛋白溶液

2．粗分离——透析

(1)目的：除去样品中相对分子质量较小的杂质。

(2)过程：取1 mL的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有300 mL物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液(pH为7.0)的烧杯中，透析12 h。

3．纯化——凝胶色谱操作 (1)凝胶色谱柱的制作

①取长40 cm，内径为1.6 cm的玻璃管，两端用砂纸磨平。

②柱底制作：打孔→挖凹穴→安装移液管头部→覆盖尼龙网，再用100目尼龙纱包好。 ③柱顶制作：打孔→安装玻璃管。

④组装：将上述三者按相应位置组装，并在下端出口连接带开关的尼龙管，尼龙管放入收集器。 (2)凝胶色谱柱的装填

(3)样品的加入和洗脱

4．纯度鉴定

在鉴定的方法中，使用最多的是SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。 5．结果分析与评价

项目 分析 分层明显→样品处理完成 血液样品的处理 凝胶色谱柱的装填 血红蛋白的分离 放一支与凝胶柱垂直的日光灯→直接检查(加入大分子有色物质，如蓝色葡聚糖－2 000或红色葡聚糖)→色带均匀、狭窄、平整→装填成功 血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随洗脱液缓慢流出→分离成功 [题组冲关] 3．下列有关“血红蛋白的提取和分离”实验的叙述，正确的是( ) A．用蒸馏水进行红细胞的洗涤，其目的是去除细胞表面的杂蛋白 B．将血红蛋白溶液进行透析，其目的是去除相对分子质量较大的杂质 C．血红蛋白释放时加入有机溶剂，其目的是使血红蛋白溶于有机溶剂 D．整个过程不断用磷酸缓冲液处理，是为了维持血红蛋白的结构

解析：选D 用生理盐水进行红细胞的洗涤，其目的是去除杂蛋白；将血红蛋白溶液进行透析，其目的是去除相对分子质量较小的杂质；血红蛋白释放时加入有机溶剂，其目的是使血红蛋白中的杂质溶于有机溶剂，以获得较为纯净的蛋白质。

4．如图为血红蛋白的提取和分离的部分实验装置，请回答下列问题：

(1)血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，其在红细胞中的作用体现了蛋白质具有___________________________________________________功能。

(2)甲装置中，B是血红蛋白溶液，则A是____________________________________；乙装置中，C溶液的作用是_______________________________________________。

(3)甲装置用于______，目的是_________________________________________。

用乙装置分离蛋白质的方法称为____________________，是根据_________________分离蛋白质的有效方法。

(4)用乙装置分离血红蛋白时，待_________________________________时，用试管收集流出液，每5 mL收集一管，连续收集。

(5)血红蛋白提取和分离的程序可分为四步：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。其中样品处理包括__________________、____________________________、分离血红蛋白溶液。

解析：图甲为透析装置，图乙为样品的洗脱装置。(1)血红蛋白能运输氧气，体现了蛋白质的运输功能。(2)甲装置中用磷酸缓冲液来透析；乙装置中C溶液为磷酸缓冲液，其作用是洗脱蛋白质。(3)因透析袋能使小分子自由进出，而将大分子保留在袋内，故透析能去除样品中相对分子质量较小的杂质。乙装置是利用凝胶色谱法分离血红蛋白，它是根据蛋白质相对分子质量的大小来分离蛋白质的。(4)洗脱时先流出的是相对分子质量与血红蛋白相比较大的蛋白质，血红蛋白呈红色，故待红色的蛋白质接近色谱柱底端时就可用试管收集流出液。(5)样品处理包括红细胞的洗涤、血红蛋白的释放和分离血红蛋白溶液。

答案：(1)运输 (2)磷酸缓冲液 洗脱血红蛋白 (3)透析(粗分离) 去除样品中相对分子质量较小的杂质 凝胶色谱法 相对分子质量的大小 (4)红色的蛋白质接近色谱柱底端 (5)红细胞的洗涤 血红蛋白的释放

[随堂基础巩固]

1．在实验中，人们用鸡的红细胞提取DNA，用人的红细胞提取血红蛋白的原因是( ) A．鸡的红细胞无血红蛋白，人的红细胞有血红蛋白 B．鸡的红细胞有线粒体，人的红细胞无线粒体

C．鸡的红细胞有细胞核，人的成熟红细胞无细胞核，含较多的血红蛋白 D．鸡的红细胞进行有氧呼吸，人的红细胞进行无氧呼吸

解析：选C 鸡(鸟类)的红细胞具有完整的细胞核，含有核DNA，便于进行DNA的提取；人的成熟红细胞无细胞核，结构简单，血红蛋白含量丰富，便于提取血红蛋白。