十二烷基硫酸钠毛细管凝胶电泳法(CE-SDS法)标准操作规程SOP 下载本文

好蓝色橡胶通用样品瓶瓶盖,放置样品盘中待分析。

4、缓冲液瓶的准备:SDS凝胶分离缓冲液分别加1.2ml(B列)与1.1ml(C列),超纯水、酸性清洗液及碱性清洗液分别加1.5ml,废液瓶中加超纯水0.8ml。按照下图位置放入相应的缓冲液瓶。 分离方法:□高分辨率方法 □高效方法

入口缓冲液,放置于 侧缓冲液托盘(入口缓冲液摆放见下图)

出口缓冲液,放置于 侧缓冲液托盘(出口缓冲液排放见下图)

5、在计算机中打开软件32Karat,建立新的序列程序,输入对应的供试品名称与位置,并选择相应的分离方法对供试品进行分析测定。供试品分离方法关键参数见下表。

电泳参数 样品进样 样品分离 检测器波长

设定值 5kV电动进样 秒 15kV下运行 分钟 □ PDA检测器 nm □ UV检测器 nm 第 3 页/共 5 页

6、序列运行完成后,点击“File”选择“Data”与“Method”选择对应的数据与方法;点击“Integration Events”添加积分参数;点击“Analyze”对数据进行积分,保存积分参数和处理结果。 三、 结果计算

1、空白对照图谱中,在迁移时间 min范围内,按下表进行判定。

空白对照判断标准 应无明显干扰峰出现 2、系统适用性结果

□ 非还原型电泳或还原后呈现单一主带的还原型电泳

样品 主峰迁移时间(min) 主峰校正峰面积百分比 系统适用性1 系统适用性2 空白对照结果判定 □ 符合要求 □ 不符合要求 系统适用性1与系统适用性2图谱中主峰迁判断标准 移时间的极差应≤2.0min;主峰校正峰面积百分比极差应≤0.6% 检测结果 检测标准品结果判定 □ 主峰迁移时间的极差为 min □ 主峰校正峰面积百分比极差为 □ 符合要求 □ 不符合要求 □ 还原后呈现轻链、重链的还原型电泳

样品 重链迁移时间(min) 轻链校正峰面积百分比 重链校正峰面积百分比 系统适用性1 系统适用性2 系统适用性1与系统适用性2图谱中重链迁判断标准 移时间的极差应≤2.0min;轻链校正峰面积百分比极差应≤0.6%;重链校正峰面积百分比极差均应≤0.6%

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□ 重链迁移时间的极差为 min 检测结果 □ 轻链校正峰面积百分比极差为 □ 重链校正峰面积百分比极差为 检测标准品结果判定 □ 符合要求 □ 不符合要求 3、本次实验,空白对照和系统适用性(□ 均符合要求 □ 未全部符合要求),则本次实验结果(□ 有效 □ 无效)。 四、 结果判定

1、 标准规定:□

□N/A

2、 检验结果: 3、 检验结论:□ 符合规定 □ 不符合规定 □ 复检 □ N/A 五、 备注

1、附检测图谱共 页。

2、 以下无内容。

操作人/日期: 复核人/日期:

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十二烷基硫酸钠毛细管凝胶电泳法(CE-SDS法)测定记录

(适用于多个样品)

品 名 规 格 检验依据 一、实验材料 1、 试药与试液

名 称 系统适用性样品( ) SDS凝胶分离缓冲液 稀释液(SDS样品缓冲液) 碱性清洗液(0.1mol/L氢氧化钠溶液) 酸性清洗液(0.1mol/L盐酸溶液) Internal Standard ( kD) 2-巯基乙醇 碘乙酰胺溶液(0.25mol/L) 复溶溶剂(灭菌注射用水) 原液缓冲液( ) 成品缓冲液( ) 2、 仪器与用具 名 称 毛细管电泳仪 生产厂家/型号 □ AB SCIEX / PA 800plus □ AB SCIEX / CESI 8000 Plus □ 上海精宏实验设备有限公司/DKB-501S □ 其它 设备编号 编号/批号(来源) 批号/编号 开检日期 年 月 日 水浴锅

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