7.2.1.1 超纯水：电阻率不低于18.2MΩ·cm，本方法所有试液均用超纯水配制。 7.2.1.2 SDS-MW Analysis Kit：Beckman生产，货号390953，该试剂盒中包含SDS-MW凝胶分离缓冲液、SDS-MW样品缓冲液（样品稀释液）、酸性清洗液（0.1mol/L盐酸溶液）、碱性清洗液（0.1mol/L氢氧化钠溶液）、内标物质（10kDa Internal Standard）。也可采用北京博思雅生化技术研究院生产的SDS试剂盒，货号BSYK018，该试剂盒中包含CE-SDS Gel Buffer、CE-SDS Sample Buffer（样品稀释液)。也可采用同类型其它品牌的商品化试剂盒。

7.2.1.3 烷基化溶液（0.25mol/L碘乙酰胺溶液）：称取约0.046g碘乙酰胺，加入1ml超纯水溶解混匀，可于2~8℃避光保存7天。 7.2.1.4 2-巯基乙醇。

7.2.1.5 系统适用性样品：如无特殊规定，应采用经特殊处理后的系统适用性专用样品（处理方法见各项目下规定）；也可选用相应原研药或各项目自制工作对照品。 7.2.2 仪器与用具

7.2.2.1 毛细管电泳仪：AB SCIEX公司PA 800plus或CESI 8000 Plus。 7.2.2.2 毛细管卡盒：适用于7.2.2.1中毛细管电泳仪的毛细管卡盒。

7.2.2.3 毛细管：非涂层-熔融石英毛细管（内径50μm），切割至总长为30.2cm，高分辨率方法有效分离长度为20cm，高效方法有效长度为10cm。 7.2.2.4 孔塞：孔塞大小8（100μm×800μm）。

7.2.2.5 其他：CE通用样品瓶、蓝色橡胶通用样品瓶瓶盖、200μl微量管（内插管）、移液器、水浴锅（或金属浴）、台式离心机、离心管、超滤管。 7.3 操作步骤 7.3.1 供试品制备 7.3.1.1 供试品稀释

（1）空白对照：取当次检测供试品对应的缓冲液（如原液缓冲液或制剂缓冲液），分别用稀释液（SDS样品缓冲液）进行稀释（稀释倍数同供试品），作为空白对照。 （2）系统适用性：取各项目下规定的系统适用性样品，用稀释液（SDS-MW样品缓冲液）稀释至终浓度约为1.0mg/ml。

（3）原液：根据待测原液浓度，用稀释液（SDS-MW样品缓冲液）稀释至终浓度约为1.0mg/ml。

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（4）成品：若为液体制剂，根据标示含量，直接用稀释液（SDS-MW样品缓冲液）稀释至终浓度约为1.0mg/ml；若为冻干制剂，则先用水复溶后，根据复溶后理论含量，再用稀释液（SDS-MW样品缓冲液）稀释至终浓度约为1.0mg/ml。

7.3.1.2 非还原供试品溶液制备：取稀释后供试品溶液各95μl，各加入10kDa Internal Standard 2μl，再各加入0.25mol/L碘乙酰胺溶液5μl，涡旋混匀。

7.3.1.3 还原供试品溶液制备：取稀释后供试品溶液各95μl，各加入10kDa Internal Standard 2μl，再各加入2-巯基乙醇5μl，涡旋混匀。

7.3.1.4 将各供试品溶液在70℃孵育，非还原供试品溶液孵育5分钟，还原供试品溶液孵育5~10分钟。冷却至室温后以每分钟6000转离心1分钟。从样品管中分别取出样品至200μl微量管中，将200μl微量管放入CE通用样品瓶中，盖好蓝色橡胶通用样品瓶瓶盖，放置样品盘中待检测分析。 7.3.2 缓冲液瓶的准备和摆放

7.3.2.1 按下图和下表加入各入口缓冲液，并用蓝色橡胶通用样品瓶瓶盖盖好。

图7.1 入口缓冲液摆放图示 表7.1 入口缓冲液加入体积及用途

CE通用瓶位置 A1至A6 B4至B6 B1至B3 C1至C3 D1至D3 入口缓冲液加入体积 超纯水1.5ml 超纯水1.5ml SDS凝胶分离缓冲液1.2ml SDS凝胶分离缓冲液1.1ml 碱性清洗液（0.1mol/L氢氧化钠溶液）1.5ml 入口缓冲液用途 冲洗毛细管 冲洗毛细管 冲洗毛细管 供试品分离 每针之前冲洗毛细管 第 6 页/共 10 页

E1至E3 F1至F3 酸性清洗液（0.1mol/L盐酸溶液）1.5ml 超纯水1.5ml 每针之前冲洗毛细管 每针之前冲洗毛细管 7.3.2.2 按下图和下表加入各出口缓冲液，并用蓝色橡胶通用样品瓶瓶盖盖好。

图7.2 出口缓冲液摆放图示 表7.2 出口缓冲液加入体积及用途

CE通用瓶位置 A1至A6 B1至B3 B4至B6 C1至C3 D1至D3 E1至E3 F1至F3 7.3.3 编辑方法并调用方法

表7.3 电泳操作参数（高分辨率分离法）

分离参数 参数 检测器波长 毛细管温度 设置 214nm或220nm，带宽10nm 20℃ 第 7 页/共 10 页

出口缓冲液加入体积 超纯水1.5ml 超纯水0.8ml 超纯水1.5ml SDS凝胶分离缓冲液1.1ml 超纯水0.8ml 超纯水0.8ml 超纯水0.8ml 出口缓冲液用途 冲洗毛细管 冲洗SDS凝胶分离缓冲液的废液瓶 冲洗毛细管 供试品分离 冲洗碱性清洗液的废液瓶 冲洗酸性清洗液的废液瓶 冲洗超纯水的废液瓶

样品温度 分析方法 10±2℃ 步骤 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 事件 碱性溶液冲洗 酸性性溶液冲洗 水冲洗 总结 0.1mol/L 氢氧化钠，70psi下3分钟，向前 0.1mol/L 盐酸，70psi下1分钟，向前 70psi下1分钟，向前 SDS凝胶冲洗/灌装 SDS凝胶灌装，70psi下10分钟，向前 凝胶后浸润1 凝胶后浸润2 样品注射 注射后浸润 电压分离 自动归零 水浸润0.0分钟 水浸润0.0分钟 5 kv下20秒，反相极性 水浸润0.0分钟 15 kv下40分钟，温度为20℃，Ramp=1.00分钟，反相极性 5分钟 表7.4 电泳操作参数（高效分离法）

分离参数 参数 检测器波长 毛细管温度 样品温度 分析方法 设置 214nm或220nm，带宽10nm 20℃ 10±2℃ 步骤 1 2 3 4 5 6 7 事件 碱性溶液冲洗 酸性性溶液冲洗 水冲洗 总结 0.1mol/L 氢氧化钠，70psi下3分钟，反向 0.1mol/L 盐酸，70psi下1分钟，反向 70psi下1分钟，反向 SDS凝胶冲洗/灌装 SDS凝胶灌装，70psi下10分钟，反向 凝胶后浸润1 凝胶后浸润2 样品注射 水浸润0.0分钟 水浸润0.0分钟 5 kv下20秒，正常极性 第 8 页/共 10 页