2将电磁阀门盖打开，按手动开关的快滴或慢滴，标准液流下，气泡亦下，待导管内无气泡时，盖上门盖。

3调节液滴速度。拧动右边电磁阀螺丝，使慢滴速度为0.02-0.03ml左右/次。拧动左边电磁阀螺丝，使快滴速度成线状。

（三）将极化电压，灵敏度，门限值按照测定的样品，调节到规定范围

（四）安装活化的电极（电极一般在使用前，经清洁液浸泡0.5-1分钟，并冲洗干净）注意电极活化不宜时间过长，过长会影响分析，使电极的铂片与烧杯的圆周方向一致电极应处于溶液漩涡的下游位置，便于迅速分散均匀。

（五）将标准液注入滴定管 内，按慢滴开关，使滴定管内标准液为零刻度，

（六)将测定样品的烧杯置搅拌器上，并将电极，滴定管口插入液面。打开搅拌棒相碰。 （七）把开关置自动挡。滴定开始。待红灯亮，则终点到，记录滴定管上的读数。 (八)将开关回复到手动位置，用蒸馏水冲洗电极，从（五）开始，重复操作。

第八章 紫外一可见分光光度法

实验二十五 吸收曲线的测绘

一、目的与要求

1.掌握分光光电比色法的原理。 2.熟悉测绘吸收曲线的一般方法。

二、方法提要

有色溶液对可见光的吸收具有选择性。利用分光光电比色计能连续变换波长的性能，可以测绘有色溶液在可见光的吸收曲线。虽然由于仪器所能提供的单色光不够纯，得到的吸收曲线不够精密准确，但亦足以反映溶液吸收最强的光带波段，可用作光电比色时选择波长的依据。本次实验用72型（或721型）分光光度计测绘有色溶液在可见光区的吸收曲线。有色溶液可以用维生素B12的水溶液，浓度约100ug/ml，也可以用高锰酸甲溶于硫酸溶液（0.05mol/L）或者邻二氮菲与二价铁络合物的溶液,还可以用其它的有色溶液.用与配制溶液相同的溶剂或试剂作空白溶液(100％T).

三、仪器与试剂

1．72型（或721型）分光光度计

2．维生素B12溶液（100ug/ml）或高锰酸甲溶液（0.05mol/L）或邻二氮菲铁溶液

（0.15％）。

四、操作步骤

将被测溶液与空白溶液分别盛装于1cm厚的比色皿中,安置于仪器中的比色皿架上.按仪器使用方法进行操作.从仪器波长范围的上限(700nm)或下限(420nm)开始,每隔20nm测量一次,每次用空白调节100％透光后测定溶液的吸光度.在有吸收峰或吸收谷的波段，再以5nm（或更小）的间隔测定一些点，必要时重复一次。记录不同波长处的测得值。

以波长为横座标，吸光度为纵座标，将测得值逐点描绘在坐标纸上并连成光滑曲线，即得吸收曲线。从曲线上可查见溶液吸收最强的光带波长。

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五、思考题

1单色光不纯对于测得的吸收曲线有些什么影响？保留本次测得的吸收曲线，待今后用分光光度计测得与本次实验相同样品的吸收曲线时，比较其可见光部分的吸收曲线。 2 利用邻组同学的实验结果，比较同一溶液在不容仪器上测得的吸收曲线的形状，吸收峰波长以及相同浓度的吸光度等有无不同，试作解释。

实验二十六 用邻二氮菲测定水中含铁量

一、目的与要求

1.了解邻二氮菲测定Fe（Ⅱ）的原理与方法。

2.掌握用72型或721型分光光度计进行定量测定的方法。 3.了解比色皿（吸收池）配对性的检验与校正法方。

二、方法提要

邻二氮菲（1，10—邻二氮杂菲）是有机络合剂之一。它与Fe2+能形成红色络离子。

生成的络离子在510nm附近有一吸收峰，摩尔吸收系数达1.13104反应灵敏，适用于微量测定。在PH3~9范围内，反应能迅速完成，且显色稳定，在含铁0.5~8ppm范围内，浓度与吸光度符合Beer定律。若用精密分光光度计测定，可用吸光系数计算法。用光电比色法测定，则设备较简便，可用标准曲线法，也可用标准对比法。

被测溶液用PH4.5~5的缓冲液保持其酸度，并用盐酸羟胺还原其中的Fe3+，同时防止Fe2+被空气氧化。

比色皿（或称吸收池）不配套，可影响吸收光度的测量值，应检验其透光度与厚度的一致性，必要时加以校正。

图 10-2 邻二氮菲铁的吸收光谱

三、仪器与试剂

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1.72型（或721型）分光光度计 2.标准铁溶液（约0.05mg/ml） 3.邻二氮菲溶液（0.15％，新配制） 4.盐酸羟胺溶液（2％，新配制） 5.醋酸盐缓冲液

四、操作步骤

1.试液制备

（1）标准铁溶液的制备：取分析纯(NH4)2SO42FeSO426H2O约0.35g，精密称定，在1L容量瓶中用HCL溶液（0.1mol/L）溶解并稀释至刻度，计算此标准液每ml中的准确含铁量。

（2）醋酸盐缓冲液 醋酸钠136g与冰醋酸120ml加水溶成500ml，摇匀。

2.标准曲线制备

分别吸取标准铁溶液0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00ml于50ml容量瓶中，依次加入醋酸盐缓冲液5ml，盐酸羟胺溶液5ml，邻二氮菲溶液5ml，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置10分钟，以不加标准液的一份作空白，用1cm比色皿在72型分光光度计上测定每份溶液的吸光度，测定前，先用中等浓度的一份在490~510nm间测定5至10个点，选吸收光度最大处的波长为测定波长。将测得各溶液的吸光度为纵坐标，浓度（或含铁量）为横坐标，绘制成标准曲线，若线性好则用最小二乘法回归成直线方程式。

3.水样测定

以井水，河水或自来水为样品，准确吸取澄清水样35ml（或适量）置于50ml容量瓶中，按上述制备标准曲线的方法配制溶液并测定吸光度。最后按测得的吸光度求出水中含铁量。

五、注意事项

必要时应在测定前先行核对比色皿的一致性。

1.透光度一致性的核对与校正 将同样厚的四个比色皿分别编号标记，都装空白溶液，在所用波长（510nm）处测定各比色皿的透光率，结果应相同。若有显著差异，应将比色皿重新洗涤后再装空白溶液测试，经洗涤可使透光率差异减小时，可通过多次洗涤使透光率一致。若经几次洗涤，各比色皿的透光率差异基本无变化，可用下法校正，以透光率最大的比色皿为100％透光，测定其余各皿的透光率，分别换算成吸光度作为各比色皿的校正值。测定溶液时，以上述100％透光的比色皿作空白，用其它各皿装溶液，测得值以吸光度计算，减去所用比色皿的校正值。例如：【表】 表 10-3 溶液吸光度测量值的校正 比色皿 用空白溶液核校值 有色溶液测量值的校正 标号 1 2 3 4 测得透光率 99% 100% 98% 95% 校正值 （即吸光度） 0.0044 0.0088 0.0223 测得值 T% 62.5% 100% 39.0% 23.8% A 0.2041 0.0 0.4089 0.6234 0.200 空 白 0.400 0.601 校正后测得值 2.厚度核对 核对比色皿的厚度，需先经过透光一致性的检验。核对厚度的方法是用同一个吸光溶液（吸光度在0.5~0.7间为宜）分别盛于各比色皿中，在同一条件下测定其吸光度。测得值应相同（若有透光校正值应扣除）。若各比色皿测得值间有超出允许误差的差值，则说明厚度有差别，测值大的厚度大。若不能更换选配，必要时亦可用校正值，即以其中一个为标准，将其测得值与其它比色皿的测得值之比作为换算成同一厚度时用的因数。

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六、思考题

1.据邻二氮菲铁络离子的吸收光谱，其最大波长为510nm，本次实验中用72型分光光度计测得最大吸收波长是多少？若有差别，试作解释。

2.根据制备标准曲线测得的数据判断本次实验所得浓度与吸光度间的线性好不好？分析其原因。

3.显色反应的操作中加入的各标准液与样品液有不同的含酸量，对显色有无影响？ 4.根据实验数据据计算邻二氮菲铁络离子在最大吸收光波长处的摩尔吸收系数，若与文献值（1.1*104）差别大，试作出解释。

5.比色皿（吸收池）的透光度和厚度常不能绝对相同，试考虑在什么情况下必须检验校正，或可以忽略不计。

6.透光度完全一致的甲乙两比色皿，盛同一浓度的吸收光溶液，测得吸光度A甲=0.587，A乙=0.573.用乙皿测另一浓度的溶液吸收度为0.437.试换算成甲皿厚度为准的吸光度（0.448）

实验二十七 紫外-可见光光度计的使用方法与性能检查

一． 目的与要求

1．以751G分光光度计为例了解紫外可见分光光度计的基本性能与特点；学习仪器的使用方法；了解检查仪器主要性能的一般方法。

2．根据具体情况选择一些项目进行操作练习，或分次结合其它实验内容进行操作。

二．方法提要

751G分光光度计有氢（或氘灯）与钨灯两种光源，可用于紫外与可见光区；它具有色散力较高的单色器，狭缝可调，可得到较纯的单色光，是较精密的仪器。适用于定性鉴定，也可免除标准品对比，直接利用吸光系数进行定量。

对于较精密的分光光度计有较高的技术指标要求，主要是波长准确度与重现性，单色纯度或单色器的分辨能力以及测光（透光率或吸光度）准确性与重现性等。

751G是单光束手工操作仪器，不能自动扫描吸收光谱。

三．751G分光光度计主要组件及说明

仪器由三大部件组成：

（一）放大器与钨灯电源稳压器

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