ITRAQ技术需注意的问题与答疑 下载本文

16.可信程度低于80%的数据有意义吗?

可信程度低于此值的,如果有感兴趣的蛋白可以通过ELISA、WB、Q-PCR、液态芯片等技术手段进一步验证,毕竟LC/MS是研究蛋白组学的方法之一,如全面研究还是要综合各种研究方法。

17.两样本的比值都代表什么?

两样本的比值如果在0.9-1.1之间的,可以认为两样本的含量是一样的,即比值为1:1;而小于0.9或大于1.1均可认为两样本之间的比值是有差异的。

18.质谱图中显示的是各种蛋白吗?

不是各种蛋白而是蛋白被打碎后的离子图谱,由于质谱法是电场和磁场将运动的离子(带电荷的原子、分子或分子碎片)按它们的质荷比分离后进行检测的方法。测出的是离子的准确质量,由此来确定离子的化合物组成。

19.目前开展该项业务的公司有很多,能否推荐下哪家公司做的比较好?

目前能开展itraq的公司挺多的,个人推荐广州辉骏生物做的相对还是不错的。现在据说服务质量挺好,周期大约1个月左右。

20.如果打算开展该项试验,需要提供什么样的样品形式?

最好是提供抽提好的蛋白,冻成干粉,然后用干冰快递过来。组织蛋白抽提不能用含二维电泳的变性剂来裂解蛋白。如果组织的话,存放到-80度冰箱中,然后用干冰快递过来,上海本地的,也可以将组织用冻存管装好,投入液氮中运过来即可。