中，灭菌15min或过滤除菌。

10*M （5%Methanol 甲醇） 保存期为2个月。将5ml的甲醇与95ml水混匀，过滤除菌。

10*GY （10%Glycerol 甘油） 保存期为1年以上。将100ml甘油和900ml水混匀后，高压灭菌或过滤除菌。

100*AA （0.5% of each Amino Acid，各种氨基酸） 4℃保存 保存期为1年。分别将500mg的L-谷氨酸、L-蛋氨酸、L-赖氨酸、L-亮氨酸和L-异亮氨酸溶于100ml水中，过滤除菌。

1M 磷酸钾溶液（potassium phosphate buffer，pH6.0），将1mol/L的K2HPO4溶液132ml与1mol/L的KH2PO4溶液868ml混匀，其pH为6.0，如需调节pH，则使用磷酸和氢氧化钾调节pH。 1.2 常用溶液及缓冲夜

1.2.1 碱裂解法抽提质粒DNA所用溶液：

溶液Ⅰ：50mmol / L glucose，100mmol / L EDTA，25mmol / L Tris－HCI (pH 8.0) 溶液Ⅱ：0.2mol／L NaOH，1％ SDS（临用时配制）

溶液Ⅲ：29.44g KAc，11.5ml Acetic acid，加ddH2O至100 ml。 4℃保存。

1.2.2 10% 甘油 （Glycerol）：

将100ml甘油和900ml水混匀后，高压灭菌或过滤除菌。保存期为1年以上。 1.2.3 Rnase-H2O：

1ul Rnase 加入1ml 灭菌 dd H2O。4℃保存。

1.2.4 TE缓冲液：

10mmol / Tris-CI（pH 8．0）， lmmol / L EDTA（pH 8.0） 1.2.5 STE缓冲液：

0.1mol / L, 10mmol / L Tris-HCl (pH 8.0), 1mmol / L EDTA (pH 8.0) 1.2.6 SCE缓冲液：

1mol / L Sorbitol (山梨醇), 10mmol / L 柠檬酸钠 ， 10mmol / L EDTA 1.2.7 1M potassium phosphate buffer （pH 6.0）： 132 ml 1M K2HPO4 868 ml 1M KH2PO4

1.2.8 50X TAE 琼脂糖凝胶电泳缓冲液，pH 8.0（1L）： 242 g Tris

57.1 ml Acetic Acid 37.2 g EDTA

二．毕赤酵母表达的培养基配制［5］ 2.1 LB（Luria－Bertani）培养基：

Trypton l％ Yeast Extract 0.5％ NaCl l％ PH 7.0

制作平板时加入 2％琼脂粉。121℃高压灭菌 20min。可于室温保存。用于培养pPICZαA原核宿主菌TOP10F’时可加入Zeocin 25ug / ml。 2.2 LLB（Low Salt LB）培养基：

Trypton l％ Yeast Extract 0.5％

NaCl 0.5％ PH 7.0

制作平板时加入 2％琼脂粉。121℃高压灭菌 20min。可于室温保存数月。用于培养pPICZαA原核宿主菌TOP10F’时，加入Zeocin 25ug / ml，可以4℃条件下保存1～2周。

2.3 YPD （又称YEPD）

Yeast Extract Peptone Dextrose Medium，（Yeast Extract Peptone Dextrose Medium，酵母浸出粉/胰蛋白胨/右旋葡萄糖培养基） Trypton 2% dextrose (glucose) 2% +agar 2% +Zeocin 100 μg/ml

液体YPD培养基可常温保存；琼脂YPD平板在4℃可保存几个月。加入Zeocin 100ug / ml，成为YPDZ培养基，可以4℃条件下保存1～2周。

2.4 YPDS + Zeocin 培养基（Yeast Extract Peptone Dextrose Medium）： yeast extract 1% peptone 2% dextrose (glucose) 2% sorbitol 1 M +agar 2% + Zeocin 100 μg/ml

不管是液体YPDS培养基，还是YPDS + Zeocin 培养基，都必须存放4℃条件下，有效期1～2周。

2.5 MGY

Minimal Glycerol Medium （最小甘油培养基）

（34%YNB；1%甘油；4*10-5%生物素）。将800ml灭菌水、100ml的10*YNB母液、2ml的500*B母液和100ml的10*GY母液混匀即可，4℃保存，保存期为2个月。 2.6 MGYH

Minimal Glycerol Medium + Histidine （最小甘油培养基 + 0.004%组氨酸） 在1000ml的MGY培养基中加入10ml的100*H母液混匀，4℃保存，保存期为2个月。 2.7 RD

Regeneration Dextrose Medium （葡萄糖再生培养基）

（含有：1mol/L的山梨醇；2%葡萄糖；1.34%YNB；4*10-5%生物素；0.005%氨基酸） 1. 将186g的山梨醇定容至700ml，高压灭菌； 2. 冷却后于45℃水浴；

3. 将100ml的10*D、100ml的10*YNB；2ml的500*B；10ml的100*AA等母液和88ml无菌水混匀，预热至45℃后，与步骤2的山梨醇溶液混合。4℃保存。 2.8 RDH

Regeneration Dextrose Medium + Histidine （葡萄糖再生培养基 + 0.004%组氨酸）

在RD培养基配制的第三步中，在加入10ml的100*H母液，同时无菌水的体积减少至78ml即可，其余配制方法与RD相同。4℃保存。 2.9 RD及RDH平板的制备

1. 将186g的山梨醇和15~20g琼脂粉定容至700ml，高压灭菌；冷却后于60℃水浴； 2. 参照RD/RDH液体培养基配制的步骤4，将100ml的10*D、100ml的10*YNB；2ml的500*B；10ml的100*AA等母液、（10ml的100*H母液）和88（78）ml无菌水混匀，预热至45℃后，与步骤1的山梨醇/琼脂液混匀；