图13 逆向检查示意图

检查公式是：

正反应 （Pn-Pn+1）/2＞0.002

负反应 （Pn+1-Pn）/2＞0.002（Q键菜单中的Decision ofReaction设置）

所以，当结果出现*号提示时，有两个方面需要考虑，可能是某一点颠倒了方向，也可能是线性不好。

LAG-TIME(延迟时间)：在速率反应中，有些反应速度过快，导致在读点区有2个以上的点没有读数，例如典型的底物过剩反应。这样选择是否进行延迟读点，系统可以选择延迟后读点进行计算。这个功能要与OD Limit里的MIN OD和MAXOD配合使用。

当下降反应开启了LAG-TINE和设置了ODLIMIT的Min OD，速率反应低于Min OD设置值时，结果会用B提示。

当上升反应开启了LAG-TINE和设置了ODLIMIT的MAX OD，速率反应高于MAX OD设置值时，结果会用D提示。

图14 速率反应过快示意图

图中的a线是正常速率曲线，b和c都过快，而且低于Min OD设置的0.5的范围。

在速率法当中，也可以选择使用样本空白校正，利用单独的反应杯进行样本空白比色，然后再相减。

动态范围（Dynamic Range）：在速率法中，读点区域两点间的吸光度变化也要被监测，不然会漏报高浓度样本。而高浓度样本不完全会造成底物过剩。所以在动态范围里设置最低最高吸光度，用来监测两点间的吸光度变化。超过高值限制则用F提示，超过低值限制则用G提示。

2.3 固定点法（FIXED）：在AU中，有FIXED和FIXED1两个选项。也叫做两点法。

FIXED，是扣除试剂空白的固定点法；

FIXED1，是扣除水空白的固定点法；

固定点法都可以采用单固定点和双固定点法。也可以进行样本空白校正。

图15 固定点法示意图

反应OD的计算公式是：

ΔOD = (Px - Py) - K1 X (Pw - Pz)

K1是体积校正系数，(R1 +S)/(R1 + R2 + S) ；

Px, Py MeasuringPoint-2的第一点和最后一点的吸光度值；

Pw, Pz MeasuringPoint-1试剂样本空白的第一点和最后一点吸光度值。

由于固定点法仅仅是主读点区两点间的差值，而且都在R2之后，所以无论终点法还是速率法都可以这个使用。

而闹得沸沸扬扬的免疫比浊项目用终点法都在R2之后的问题，换成这个方法即可，也可以说选点没有问题，问题出在方法上。而采用这个方法，Measuring Point-1和Measuring Point-2的间隔要相当远才行。例如，单固定点法一般这样选择：Measuring Point-1 Fist12， Last27；双固定点法一般这样选择：Measuring Point-1 Fist2， Last10；Measuring Point-2 Fist12， Last27；

3. 定标方法：分为ACAL自动定标和MCAL人工定标两大类。ACAL可分为AA、AB和7AB三小类，MCAL可以分为MB和7MB两个小类。

3.1 ACAL 自动定标：根据给定的定标液位置和浓度，以及计算公式进行的自动定标曲线绘制。

ACAL AA：是两点线性定标，给出两个定标液浓度，自动计算绘制一条直线（线性定标的曲线）。这种方法适用于零浓度值不过原点的定标，也就是说有截距。

ACLA AB：是单点线性定标，只需要给出一个定标液浓度，自动计算绘制一条经过原点的定标曲线。

根据直线公式：Y=KX+B得知，K为直线的斜率，B则是截距。

图16 AA和AB定标曲线示意图

上图坐标系是扣除水空白的，也就是说不考虑水空白的因素。

如果选择了END1、Rate1和FIXED1这些扣除水空白的测试方法，又是线性定标的话，直接选择AB即可。如果选择AA，则会出现一个零浓度截距ODa，也就是试剂空白，当试剂改变，出现波动的话，可能低值标本会出现负值。因为有可能试剂空白发生改变，低于定标时很多，这样低值样本的OD会低于ODa很多，AA直线延长下来，浓度X轴的值就是负的，到了第二象限去了。

如果选择了END、Rate和FIXED这些扣除试剂空白的测试方法，又是线性定标的话，直接选择AA定标即可。因为每次定标前必须执行试剂空白测定，这个截距会自动被试剂空白校正过来，这样就会把X轴移动到X1位置，相当于AA也是过了修正后的原点。如果这个时候选择AB方法，则很有可能低值标本的吸光度是负值的情况下才能得出低值浓度，到了第四象限去了。

所以说，测试方法和定标方法要结合使用才能达到最佳的状态，并不是绝对的哪一个方法负值概率就低。

无论是试剂空白校正还是水空白校正，前提是要经常做试剂空白和水空白，不然依旧会导致负值出现。

ACAL 7AB：是多点线性或多点非线性定标，最多7个点，最少2个点，默认零浓度点为原点。

图17 7AB定标曲线示意图

7AB定标可选择的公式很多，后面会单独介绍计算公式。

3.2 MCAL 人工定标：根据跟定的数据绘制定标曲线，而不需要定标液。

MCALMB：给出线性定标的直线斜率，也就是K值，默认是过原点的。

MCAL7MB：多点定标，最多7个点，最少两个点。但每两个点间的斜率要人工给出，也就是说只能给出折线，做不了弧线。

图18 MCAL MB和7MB示意图

由此可以看出，MCAL是最不靠谱的定标方法，能不采用就不采用。

3.3 定标公式（Fomula）：与定标方法配合使用，确立定标曲线的绘制方法。

在菜单Parameters>Calibration Parameters>CalibrationSpecific中，会见到下面的图：