图6 完整的数据监测常规界面示意图

这张所谓的完整图示，其实也没有13-27点的数据。不过屏幕左侧是完整的，上面清晰的告诉我们，样本测试的日期、校准日期、photocal日期和试剂空白日期。不过这个项目采用的END1方法，所以没有试剂空白数据。

这个结果的反应曲线如下：

图7 反应曲线示意图

上图绿色线条是付波长曲线，蓝色线条是主波长反应曲线，红色线条是反应曲线，也就是主波长减去付波长的拟合线，但图中没有设置显示。由于这是厂家说明书上的演示，所以measuring point-1 测量点1选择的是0-1，measuring point-2没有选择，因为是单试剂。这个读点选择的很有意思，P0点加入R1开始，加入样本后的第一点P1就结束，后面的曲线都是瞎忙活，早就测试完了。就算ALB反应快，但也不至于此。

2、测试方法：AU系列测试方法有终点法、速率法和固定点法。

2.1 终点法：终点法在测试方法选择里有END和END1两个选项。

END是试剂空白校正，也就是测定样本的吸光度值减去该点试剂空白的吸光度值。

END1是水空白校正，也就是测定样本的吸光度值减去该点水空白的吸光度值。

当然，二者都可以选择或者不选择双波长校正，而且二者都可以选择一组读点还是两组读点，以形成一点终点法还是两点终点法。

图8 一点终点法示意图

图9 两点终点法示意图

R1.V是R1试剂的体积；

S.V是样本的体积；

R2.V是R2试剂的体积；

Pz是第一读点，也叫初始读点，在参数设置里是Measuring Point-1，在终点法里是R2之前之后各一个点；

Px是第二读点，也叫最后读点，在参数设置里是Measuring Point-2，在终点法里不使用这组读点。

在如果不使用R2，也就是单试剂，是图8的示意图，第一读点一般选择0-27，第二读点不选择，这样结果会扣除R1的空白。如果选择END方法，则两个点都要减去该点的试剂空白后再相减。由于第一读点本来就是R1的空白，理论上应该与试剂空白P0的是数值相差无几甚至完全相等，所以只需要第二读点减去该点的试剂空白即可。

如果选择END1方法，那么两点的数值均要减去水空白。理论上水空白的曲线是一条水平直线，所以两点减去的值都相同，然后两点间再相减，得出的吸光度值用于浓度计算。

要注意的是：AU640和AU680对Measuring Point的概念是不同的，前者Measuring Point-1是主读点， Measuring Point-2是前一点，也就是空白点。而后者正好相反。Measuring Point两组点都选择，是给双速率法和双固定点法准备的，终点法用不上。

在图9中，是双试剂终点法，需要试剂样本空白，也就是R1+S的空白，所以第一读点的Fist应该在R2加入之前的一个点，也就是图中的Pz，一般选择P10读点；Px则是第一读点的Last点，反应结束的点。

终点法的反应OD值计算公式是：

反应OD=（Px-K2*P0）-（K3*Pz-K2*P0）

K2是R1体积和总反应量的比值，也就是R1.V/（R1.V+S.V+R2.V）；

K3是R1+S的体积和总反应量的比值，也就是（R1.V+S.V）/（R1.V+S.V+R2.V）。

图5中的光路校正其实就是这个K值，由于参数不全，无法计算反推罢了。

如果选择是END方法，而且Measuring Point-1的都选择上的话，那就是两点终点法扣除试剂空白，公式就成为：反应OD=（Px-RBPx）-K3（Pz-RBPz）

也就是各点的吸光度值减去各点的试剂空白吸光度值，再进行体积系数校正。

如果选择是END1方法，而且Measuring Point-1都选择上的话，那就是两点终点法扣除水空白，公式就成为：反应OD=（Px-WB）-K3（Pz-WB）=Px-K3Pz

我们常常习惯使用测量点吸光度值减去水空白（或者杯空白）的方法，并不习惯减去试剂空白，所以END1方法在国内采用的很多。而END减去试剂空白的方法，由于试剂原因和执行时间的问题导致一些结果出现负值，特别是低值标本。

闹得沸沸扬扬的免疫比浊项目用终点法都在R2之后的问题，大可不必使用两点终点法，直接使用一点终点即可，只设置Measuring Point-1（例如：Fist0-Last27）。而非要使用两点终点法，那就只能R2之前之后各一组点，这毫无疑问

见过很多实验室里的试剂空白都是空的，根本不做，因为方法都采用END1、RATE1和FIXED1。

在终点法当中，无论采用一点还是两点，亦或是END还是END1，都有一个先天不足，那就是样本本身的空白无法排除，有的样本本身的颜色就很深，加入试剂后反应度很小，可能会造成假阳性。为了解决这个问题，AU可以采用样本空白校正（sample blank correction）。

在菜单Parameters>Common Test Parameters>Test Name中，选择点击下面的Sample Blank，就会出现样本空白界面，一共只能选择10个项目，分别选择每一个项目的颜色和空白项目名称，然后保存。在进行这个项目测试的时候，就会先占用一个反应杯，用去离子水做试剂稀释样本进行样本本身颜色的比色（样本空白），然后再占用一个反应杯，用参数设定的试剂进行比色（颜色反应），最后颜色反应的吸光度值减去样本空白的吸光度值。

样本空白的计算公式是：反应OD=ODC-K*ODB

ODC是该点的颜色反应吸光度值；

ODB是该点的样本空白吸光度值；

K是样本空白体积和颜色反应体积的比值，一般是1。

根据END或END1方法的不同，还要分别减去该点的试剂空白或者水空白。下图就是样本空白校正的示意图：

图10 样本空白校正示意图

2.2 速率法 Rate：AU中， 有Rate和Rate1两个速率法选项。

Rate，是扣除试剂空白的速率法；

Rate1，是扣除水空白的速率法；

速率法可以使用单速率法和双速率法两种方法。

图11 速率法示意图

当使用单速率法时，只有上图的△OD2，参数中只选择Measuring Point-1就行了，给出开始和结束的两点，仪器根据这两点计算每分钟吸光度变化。这也是最常用的速率法。

当使用双速率法时，就要在R2加入之前选择两个点，作为Measuring Point-1的值，然后在Measuring Point-2里输入R2之后的两个点，这样前者是△OD1，后者是△OD2，计算公式时：

反应OD=（△OD2-△OD1）/min

当然，Rate方法要减去各点的试剂空白再计算△OD，Rate1要减去水空白再计算△OD。

与终点法一样，大多采用Rate1方法。

线性范围（Linearity Limit）：在速率法当中，线性检查是必要的。根据速率法选择的读点数不同，系统将全部读点一分为二，分前半程和后半程两部分分别进行△OD/min计算，然后二者再进行公式计算。

图12 速率法线性检查示意图

前半程的△OD/min为△E1，后半程的△OD为△E2，在菜单参数设置里面有个Linearity Limit选项， [|（△E1-△E2）|÷|（△E1+△E2）/2|]*100≤Linearity Limit为正常线性，否则判断为线性错误，结果有*号提示。这是第一个线性判断依据。

第二个线性判断依据是|（△E1-△E2）|≤0.003，否则也会判断为线性错误。这个0.003是系统默认值。也就是说前半程和后半程的△OD/min差值绝对值不能超过0.003（Q键菜单中的Decision of Linearity Check设置）。

逆向反应检查（Reverse Reaction Check）：在速率法反应中，逆向检查也很有必要，如果在读点范围内有任何一个点出现反转，哪怕是整个读点区的反应趋势没有改变，都会被监测到，在结果中用* 号提示。