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1.（2016·浙江舟山中学高三期中）人组织纤溶酶原激活物（htPA）是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。流程如下：
（1）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射 ，使其超数排卵。采集的精子需要经过 ，才具备受精能力。
（2）将htPA基因与质粒构建重组表达载体的过程中，下列哪项是必需的（ ） A.限制酶和DNA连接酶 B.DNA连接酶和DNA聚合酶 C.DNA聚合酶和逆转录酶 D.限制酶和DNA聚合酶
（3）转基因羊的培育过程中，常用受精卵作为外源基因的受体细胞，主要原因是_________________________________________________________________ _________________________________________________________________。 为了获得母羊，胚胎移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行 。利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这些个体的基因型 。 （4）若在转htPA基因母羊的羊乳中检测到 ，说明目的基因成功表达。 （5）质粒是基因工程中常用的基因载体，下列哪项不是质粒作为基因载体必需的（ ）
A.具控制质粒转移的基因 C.具多个限制酶的单切点
B.具标记基因 D.具有终止密码
解析 （1）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其超数排卵。采集的精子需要经过获能处理，才具备受精能力。（2）将htPA基因与质粒构建重组表达载体的过程中，需要用到的工具酶为限制酶和DNA连接酶。（3）转基因羊的培育过程中，常用受精卵作为外源基因的受体细胞，主要原因是受精卵的全能性易于表达。为了获得母羊，胚胎移植前需对已成功转入目的基因
的胚胎进行性别鉴定。利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这些个体的生殖方式属于无性生殖，这些个体的基因型相同。（4）若在转htPA基因母羊的羊乳中检测到htPA（或人组织纤溶酶原激活物），说明目的基因成功表达。（5）作为载体必须具备的条件：①要具有限制酶的切割位点；②要有标记基因（如抗性基因），以便于重组后重组子的筛选；③能在宿主细胞中稳定存在并复制；④是安全的，对受体细胞无害，而且要易从供体细胞分离出来。终止密码存在于mRNA上，不存在于质粒。
答案 （1）促性腺激素 获能处理（2）A（3）受精卵的全能性易于表达 性别鉴定 相同（4）htPA（或人组织纤溶酶原激活物）（5）D
2.（2015·浙大附中全真模拟）我国科学家张道远先生通过从耐旱灌木白花柽柳中克隆得到TSOD基因，利用转基因技术转化到棉花中，获得了具备更强抗旱性的T4代转基因棉花株系。下图为转基因抗旱棉花的培育过程示意图，请据图回答：
（1）①过程表示用 扩增目的基因的方法。②过程用到的工具酶有 。步骤③一般用 处理农杆菌，使其易吸收周围环境中的DNA分子。
（2）将重组质粒导入棉花细胞除步骤④所示的方法外，还可采用 。如果受体细胞是动物的受精卵，则一般采用的方法是________________________。 （3）外植体培养成为试管苗的过程采用了 技术，利用了 的原理，步骤⑤⑥表示 。
（4）为了确定抗旱转基因棉花是否培育成功，可先用放射性同位素标记的 作探针进行分子水平鉴定，再 进行个体水平鉴定棉花植株的抗旱性。
答案 （1）PCR技术 限制酶（限制性核酸内切酶）、DNA连接酶 Ca2＋（或CaCl2）
（2）花粉管通道法（基因枪法） 显微注射法
（3）植物组织培养 植物细胞的全能性 脱分化、再分化 （4）抗旱基因（TSOD基因、目的基因） 移栽到干旱土地中
3.（2015·浙江名校协作体联考）科研人员通过基因工程等技术，培育出了铁含量比普通大米高60%的转基因水稻，改良了稻米的营养品质。如图为培育转基因水稻过程示意图，请分析回答：
（1）基因工程的核心是 ，铁结合蛋白基因被称为 基因，为使含有该基因的重组质粒更易进入农杆菌，常用 处理农杆菌，增加农杆菌细胞壁的通透性。
（2）下列关于对DNA连接酶的理解正确的是（ ） A.其化学本质是蛋白质
B.DNA连接酶可以恢复DNA分子中的氢键 C.它不能被反复使用
D.在基因工程操作中可以用DNA聚合酶代替DNA连接酶
（3）为筛选出含重组Ti质粒的愈伤组织，应在培养基2中添加适量的 ，图中由开花后水稻未成熟的胚转变为愈伤组织的过程为 。 （4）培养基3中肯定没有下列哪种物质（ ） A.血清 C.无机盐
B.生长素 D.蔗糖
（5）检测培育转基因水稻的目的是否达到，需要检测转基因水稻__________________________________________________________________。 答案 （1）形成重组DNA分子（构建重组载体或构建重组DNA分子） 目的 CaCl2（Ca2）
＋
（2）A
（3）潮霉素 脱分化 （4）A
（5）种子中的铁含量（写出铁含量即给分）
4.（2016·浙江金华等三市联考）下图为利用生物技术获得生物新品种的过程示意