二、名词解释

1．它是独立存在于细菌和酵母染色体之外的双链闭合环状的DNA分子，可用于克隆小DNA片段的简单载体系统。

2．粘粒是利用质粒和λ噬菌体改建而成的载体，它包括λ噬菌体的cos序列、质粒的复制部位和抗性标记。 3．是一种能在细菌细胞内繁殖、人工重组的质粒，可以克隆长达300 kb的DNA大片段。 4．是一种能在酵母细胞内繁殖、人工重组的质粒克隆载体，能携带长达0.2～2 Mb的DNA片段。

5．基因文库是指人工构建的含有基因组全部DNA片段的DNA克隆所组成的库，利用DNA重组技术把DNA切割成不同长度的片段，与适当载体连接成重组体，转移到适当的宿主细胞，从而获得成千上万个携带不同DNA片段的DNA克隆，所有这些克隆中包含基因组全部基因。

6．人和高等生物细胞的基因转录形成大量各种mRNA。mRNA在逆转录酶作用下，以碱基互补原则合成cDNA。含有全部cDNA的大量克隆就称为cDNA文库。

7．Southern印迹是指将基因组DNA用限制性酶消化后，进行琼脂糖凝胶电泳，并对由凝胶电泳按片段长度分离的DNA进行变性，转移到膜上(硝酸纤维素膜或尼龙膜)进行固定，这一过程称为Southern印迹，用于DNA-DNA杂交，用于检测DNA片段长度的改变。

8．RFLP：限制性片段长度多态，是指在生物进化过程中，由于多种原因引起DNA核苷酸排列顺序的改变涉及到限制性酶切位点的丢失或新生，造成不同个体的DNA当用同一限制酶切割后产生的片段长度不同，因而在人群中呈多态分布的现象。

三、简答题 1．①端粒序列：是线性DNA分子复制和受核酸酶侵袭时防护染色体末端。②着丝粒：是有丝分裂时姐妹染色体分离和第一次减数分裂时同源染色体分离所必需的。③自主复制序列：是染色体DNA自我复制所必需的复制起始点。

2．PCR技术是模拟体内条件下，应用DNA聚合酶反应特异性扩增某一DNA片段的技术。它根据待扩增区域两端已知序列合成两个与模板DNA互补的核苷酸引物，这一单链引物的序列决定了待扩增片段的特异性和片段长度，当有模板DNA存在时，引物便可在一定的复性温度下特异地与热变性形成单链的DNA模板互补形成“退火”。当有DNA聚合酶和dNTP存在时，便可在一定条件下，按5( → 3(方向从引物端合成DNA链，从而可以产生倍增的DNA片段，当经过30～35个周期后便可产生100万倍以上的所需DNA片段。由于PCR扩增技术的快速、简便、准确、可靠，因此，该技术已广泛应用于遗传病的基因诊断，病原体的检测，肿瘤的DNA诊断，法医学亲权鉴定，性别鉴定以及在DNA水平上研究生物进化等。 3．优点：①使用时快速而容易，②灵敏，③稳定可靠；缺点：①需要靶序列的信息，②PCR产物短小，③DNA复制的不精确性，1 kb片段经20周期复制大约有3.5％产物有1个错误的碱基。

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4．RFLP是指生物进化过程中，由于DNA核苷酸排列顺序的改变涉及到限制性酶切位点，引起酶切位点的丢失或新生，造成不同个体的DNA当用同一限制性酶切割后产生的片段长度不同，在人群中呈多态分布的现象。RFLP具有极其广泛的用途。利用广泛分布的RFLP作为“遗传标记”可进行人类基因定位。当某一特定RFLP与人类遗传病座位紧密连锁时可作为“遗传标记”进行遗传病的基因诊断以及亲子鉴定和群体研究等。RFLP分为二大类即单碱基因突变型和结构重排型。

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