③归一化法 归一化法是把试样中所有组份的含量之和按100％计算，以它们相应的色谱峰面积或峰高为定量参数，使用这种方法的条件是：经过色谱分离后、样品中所有的组份都要能产生可测量的色谱峰．

该法的主要优点是：简便、准确；操作条件(如进样量，流速等)变化时，对分析结果影响较小．这种方法常用于常量分析，尤其适合于进样量很少而其体积不易准确测量的液体样品．

7 简要说明气相色谱分析的分离原理。

答：当含有样品的流动相经过固定相表面时，流动相中所含混合物就会与固定相发生作用。由于各组分在性质和结构（溶解度、极性、蒸气压、吸附能力）上的差异，使它们与固定相发生作用的大小、强弱也有差异（即有不同的分配系数），因此在同一推动力作用下，不同组分在固定相中的滞留时间有长有短，从而按先后不同的次序从固定相中流出。

8 在气相色谱分析中，为测定下列组分，宜选用哪种检测器？ 答：1）农作物中含氯农药的残留量：（电子捕获检测器）；

2）酒中水的含量：（热导池检测器）；

3）啤酒中微量硫化物：（火焰光度检测器）； 4）苯与二甲苯的异构体：（氢火焰离子化检测器）。

9 什么是最佳载气流速?实际分析中是否一定要选用最佳流速?为什么?

答：对一定的色谱柱和试样，有一个最佳的载气流通，此时柱效最高，用在不同流速下测得的塔板高度H对流速u作图，得H?u曲线图。在曲线的最低点，塔板高度H最小（H最小），此时柱效最高，该点所对应的流速即为最佳流速u最。 实际工作中，为了保证分析速度，缩短分析时间，很少选用最佳流速，而是稍高于最佳流速。填充柱一般用氢和氦作载气，线速度为15～20 cm／s，用氦和氩作载气，线速为10～12 cm／s。为了使柱内线速度均匀，柱内载气压力降不宜过大，要求p进/p出＜3为宜。

10 柱温是最重要的色谱操作条件之一。柱温对色谱分析有何影响？实际分析中应如何选择柱温？

答：柱温选择要兼顾热力学和动力学因素对分离度的影响，兼顾分离效能和分析速度两个方面。首先要考虑到每种固定液都有一定的使用温度。柱温不能高于固定液的最高使用温度，否则固定液挥发流失。

柱温对组分分离的影响较大，提高柱温使各组分的挥发靠拢，不利于分离，所以，从分离的角度考虑，宜采用较低的柱温。但柱温太低，被测组分在两相中的扩散速率大为减小，分配不能迅速达到平衡，峰形变宽，柱效下降，并延长了分析时间。选择的原则是：在使最难分离的组分能尽可能好的分离的前提下，尽可能采取较低的柱温，但以保留时间适宜，峰形不拖尾为度。 四．计算题 1.解：（1）t’(R)=t(R)-tM

t’(R1)=14-1=13min；t’(R2)=17-1=16 min

（2）n有效=16（t’(R)/wb）=16×(16.0/1.0)2(块)=4.1×103 (块)

H有效=L/ n有效=3.0×103/4.1×103=0.7 mm （3）k= t’(R)/tM

kk2=16.0/1.0=16; 1=13.0/1.0=13 ; （4）?=k2/k1=16/13=1.2

n=16（tR/wb）=16×(17.0/1.0)2(块)=4.6×103 (块) R=(√4.6×103/4)×(17-14)/17=3.0 （5）R1/R2=√L1/√L2 3.0/1.5=√3.0/√L2 L2=0.75 m

2.解题思路：首先明确相比和分配系数的关系，k=K/β, α=KB/KA；其次基本分离意味着R=1。

解：α=KB/KA=9.3/7.6=1.2

k=K/β=9.3/90=0.10

代入理论塔板数公式求的nB=69696(快)

因为计算出的塔板数比较大，一般填充柱达不到，在上述条件下，A、B不能分离。

4. 解题思路：已知A、B、C的值，分别代入公式解可

求得最佳流速为2.9cm·s-1,最小塔板高度为0.33 m。 4.解：mi/ms=fi’Ai/fs’As mi=ms×fi’Ai/fs’As

wi=(mi/m)×100%=0.47% 试样中水分含量为0.47%。 5.答：（1）3.8，82.4； （2）56.4，273，216

6. (1): 11.0 cm·s-1, 25 cm·s-1, 40 cm·s-1。 7. 2.0 min ；36 8. （1）：2.6 m ；（2）：3.1 m

9. （1）：0.418；（2）：4.6×104（块） 10. 653。

11. 解：S=⊿R/⊿Q=417.24/0.88×0.50×0.050%

=1.9×106 mV·S·mg-1 =1.9×109 mV·S·g-1

12. 答：用峰高计算，水的质量分数为0.60%；用峰面积计算为0.55% 。

第十章

一 选择题

1~5：B，D，A，A，B； 6~10: B，C，A，B，B 二 填空

1. 高压输液系统，进样系统，分离系统，检测器，记录系统； 2. 恒流泵，恒压泵； 3. 下降，宽。 三 简答题

1 何谓梯度淋洗，适用于哪些样品的分析？与程序升温有什么不同？

答：梯度淋洗就是在分离过程中，让流动相的组成、极性和pH等按一定程序连续变化。使样品中各组分能在最佳的k值下出峰。使保时间短、拥挤不堪甚至重叠的组分，保留时间过长而峰形扁平的组分获得很好的分离，特别适合中品中组分的k范围很宽的复杂杨林的分析。梯度淋洗十分类似气象色谱的程序升温，两者的目的相同。不同的是程序升温是通过程序改变温度，儿液相色谱是通过改变流动相的组成、极性和pH达到改变k的目的。 2 在空间排阻色谱法中，由于色谱柱昂贵，分离的优化也主要是通过改变流动相的极性来实现的。这种说法对吗？为什么？ 答：这种说法不对。

在排阻色谱中，组分和流动相、固定相之间没有力的作用，分离只与凝胶的孔径分布和溶质的流体力学体积或分子大小有关。分子大小不同，渗透到固定相凝胶颗粒内部的程度和比例不同，被滞留在柱中的程度不同，保留值不同。洗脱次序将决定于相对分子质量的大小，相对分子质量大的先洗脱。分子的形状也同相对分子质量一样，对保留值有重要的作用。

3 与气相色谱法相比较，高效液相色谱法具有哪些优越性？

答：与气相色谱法相比较，高效液相色谱法在以下几个方面具有优越性： （1）气相色谱法虽具有分离能力好，灵敏度高，分析速度快，操作方便等优点，但是受技术条件的限制，气相色谱不适用于不挥发物质和对热不稳定物质的分析。而高效液相色谱却不受样品的挥发性和热稳定性的限制。

（2）对于很难分离的样品，用高效液相色谱常比用气相色谱容易完成分离。 （3）和气相色谱相比，高效液相色谱对样品的回收比较容易，而且是定量的，样品的各个组分很容易被分离出来。因此，在很多场合，高效液相色谱不仅作为一种分析方法，而且可以作为一种分离手段，用以提纯和制备具有中等纯度的单一物质。在气相色谱中所分离出的各样品组分虽也可以回收，但一般都不太方便，而且定量性差。

4 何谓正相液相色谱？何谓反相液相色谱？

答：正相色谱：流动相的极性小于固定相极性的色谱体系，多用于高极性物质的分离。

反相色谱：流动相的极性大于固定相极性的色谱体系，多用于低极性物质的

分离。

5 色谱柱填充剂应具备哪些特点？ 答：（1）应具有适宜的吸附力，比表面积大，为粉末状或纤维状。一般应加热除水活化。

（2）吸附作用应可逆，即被吸附组分易子洗脱。 （3）吸附剂应纯净无杂质。

6 什么是化学键合固定相？它的突出优点是什么？

答：化学键合相是利用化学反应通过共价键将有机分子键合在载体（硅胶）表面，形成均一、牢固的单分子薄层而构成的固定相。其分离机理为吸附和分配两种机理兼有。对多数键合相来说，以分配机理为主。通常，化学键合相的载体是硅胶，硅胶表面有硅醇基， ≡Si–OH，它能与合适的有机化合物反应，获得各种不同性能的化学键合相。

化学键合固定相具有如下优点：

①柱效高：传质速度比一般液体固定相快；

②稳定性：耐溶剂冲洗，耐高温，无固定液流失，从而提高了色谱柱的稳定性和使用寿命； ③应用范围广：改变键合有机分子的结构和基团的类型，能灵活地改变分离的选择性，适用于分离几乎所有类型的化合物；且能用各种溶剂作流动相（梯度洗脱）。

7 液相色谱流动相的选择需考虑哪些方面？

答：—般情况下，流动相的选择需考虑以下几个方面：

（1）流动相纯度：要保证一定的纯度，一般采用分析纯试剂，必要时需进一步纯化以除去有干扰的杂质。

（2）溶剂与固定液不互溶，不发生不可逆作用，不能引起柱效能和保留特性的变化，不妨碍柱的稳定性。

（3）对试样要有适宜的溶解度，否则，在柱头易产生部分沉淀；但不与样品发生化学反应。

（4）溶剂粘度要小，以避免样品中各组分在流动相中扩散系数及传质速率下降。

（5）应与检测器相匹配。 8 指出下列各种色谱法最适宜分离的物质。 答：a 液-液分配色谱法:各种无机物、有机物；

b 液-固吸附色谱法：中等相对分子质量、极性不同的化合物，异构体； c 离子交换色谱法：离子型化合物，包括无机物和有机物，如氨基酸、核酸及蛋白质；

d 离子对色谱法：各种有机酸碱特别是核酸、核苷、生物碱等物质的分离； e 离子色谱法：离子型化合物，包括无机物和有机物，如氨基酸、核酸及蛋白质；