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高效液相色谱仪性能确认

2. 简介 2.1 基本情况：

本方案将实施确认的化验室高效液相色谱仪是按照USP的要求安装使用的。根据型号和生产商不同，化验室高效液相色谱仪共分两种：Waters e2695-2489和岛津LC-20AT。根据USP 附录1058<分析仪器的确认规程>，对化验室高效液相色谱仪进行性能确认。 2.2 确认目的：

为了证明仪器在日常使用过程中，仪器本身或使用环境的变化（有意的和无意的）没有影响仪器的整体性能，确保分析数据的可靠性。通过对样品的测试，确认在运行仪器的可靠性、主要参数的稳定性和结果的重现性。 2.3 确认范围：

包括国家技术监督局JJG705-2002“实验室液相色谱仪检定规程”中的部分项目，还包括系统适用性、系统稳定性、系统重现性。 2.4 相关文件：

VL-001 《确认管理规程》

MC-009-06 《高效液相色谱仪的检定规程》

QC-001-01a 《Ch.P 对乙酰氨基酚质量标准及检验规程》 QC-001-01c 《USP对乙酰氨基酚质量标准及检验规程》 QC-001-01d 《EP对乙酰氨基酚质量标准及检验规程》 QC-010-15 《Waters e2695-2489高效液相色谱仪操作规程》 QC-010-22 《岛津 LC-20AT高效液相色谱仪操作规程》 2.5 职责与分工：

QC分析员：负责起草确认方案，并负责对确认方案的实施。对确认方案实施过程产生的数据

进行整理与汇总，形成确认报告。

VL-007-08（2015） 第 5 页 共 20 页 QC主任：负责审核确认方案的审批，确保确认方案的有效性和合理性，负责确认的协调工作，

以保证确认方案的顺利实施，负责审核确认报告中的检验数据的可靠性、真实性、完整性。负责确认中的偏差调查。

QA主任：负责审核确认方案和报告，确保确认方案的有效性和合理性。负责确认中的偏差调

查。

质量负责人：负责审核和批准确认方案和确认报告。 3. 确认方法： 3.1试验准备 3.1.1仪器：

岛津高效液相色谱仪（型号：LC-20AT/SPD-20A） Waters高效液相色谱仪（型号：e2695-2489） 3.1.2色谱柱：

Kromasil 100-3.5-C8 100mm×4.6mm Kromasil 100-5-C8 250mm×4.6mm SunFireTM100-5-C18 250mm×4.6mm 3.1.4对照品：

对乙酰氨基酚工作对照品（自制，150101） 邻乙酰氨基酚工作对照品（自制，140501、150501） 对丙酰氨基酚工作对照品（自制，140502、150502） 对氯苯乙酰胺工作对照品（自制，141102） N-苯乙酰胺工作对照品（自制，140501） 对氨基酚工作对照品（自制，141103） 3.2试验内容

3.2.1泵流量准确度和精密度

VL-007-08（2015） 第 6 页 共 20 页 3.2.1.1泵耐压检定

3.2.1.2泵流量设定值误差Ss 3.2.1.3泵流量稳定性误差SR 3.2.1.4梯度误差Gc 3.2.2柱温箱准确度和稳定性 3.2.2.1柱箱温度设定值误差△Ts

3.2.2.2柱箱温度稳定性Tｃ 3.2.3检测器灵敏度

3.2.3.1基线噪声 3.2.3.2基线漂移 3.2.3.3最小检测浓度

3.2.4整机性能确认：定性定量重复性 3.2.5系统适用性（重复性）

3.2.5.1ChP检验方法

3.2.5.1.1对氨基酚及有关物质：临用新制。取本品适量，精密称定，加溶剂[甲醇－水(4：6)]制成每1ml中约含对乙酰氨基酚20mg的溶液，作为供试品溶液；另取对氨基酚对照品和对乙酰氨基酚对照品适量，精密称定，加上述溶剂制成每1ml中约含对氨基酚1μg和对乙酰氨基酚20μg的混合溶液，作为对照品溶液。照高效液相色谱法（ChP2010年版二部附录V D高效液相色谱法）试验。用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸盐缓冲液（取磷酸氢二钠8.95g，磷酸二氢钠3.9g，加水溶解至1000ml，加10%四丁基氢氧化铵溶液12ml）-甲醇（90：10）为流动相；检测波长为245nm；柱温为40℃；理论板数按对乙酰氨基酚峰计算应不低于2000，对氨基酚与对乙酰氨基酚峰的分离度应符合要求。取对照品溶液20μl，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使对氨基酚色谱峰的峰高约为满量程的10%，再精密量取供试品溶液与对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的4倍；供试品溶液的色谱图中如有与对照品溶液中对氨基酚保留时间一致的色谱峰，按外标法以峰面积计算，含对氨基酚不得过

VL-007-08（2015） 第 7 页 共 20 页 0.005%；其他杂质峰面积均不得大于对照品溶液中对乙酰氨基酚的峰面积（0.1%）；杂质总量不得过0.5％。 系统适用性要求：

根据中国药典附录 VD<高效液相色谱法>

a）对照品溶液理论板数按对乙酰氨基酚峰计算应不低于2000； b）对氨基酚与对乙酰氨基酚峰的分离度大于1.5；

c）对照品溶液连续进样5针，其峰面积测量值的相对标准偏差小于等于2.0%。

3.2.5.1.2对氯苯乙酰胺：临用新制。取对氨基酚及有关物质项下的供试品溶液作为供试品溶液；另取对氯苯乙酰胺和对乙酰氨基酚对照品适量，精密称定，加溶剂［甲醇-水(4:6)］溶解并制成每1ml中约含对氯苯乙酰胺1μg与对乙酰氨基酚20μg的混合溶液，作为对照品溶液。照高效液相色谱法（ChP2010年版二部附录V D高效液相色谱法）试验。用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸盐缓冲液（取磷酸氢二钠8.95g，磷酸二氢钠3.9g，加水溶解至1000ml，加10%四丁基氢氧化铵12ml）-甲醇（60：40）为流动相；检测波长为245nm；柱温为40℃；理论板数按对乙酰氨基酚峰计算不低于2000，对氯苯乙酰胺峰与对乙酰氨基酚峰的分离度应符合要求。取对照品溶液20μl，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使对氯苯乙酰胺色谱峰的峰高约为满量程的10%，再精密量取供试品溶液与对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；按外标法以峰面积计算，含对氯苯乙酰胺不得过0.005%。 系统适用性要求：

根据中国药典附录 VD<高效液相色谱法>

a)对照品溶液理论板数按对乙酰氨基酚峰计算应不低于2000； b） 对氯苯乙酰胺与对乙酰氨基酚峰的分离度大于1.5；

c） 对照品溶液连续进样5针，其峰面积测量值的相对标准偏差小于等于2.0%。 3.2.5.2 USP检验方法 3.2.5.2.1含量 程序：

使用透光性低的玻璃容器制备样品溶液。

溶液A：1.7g/L无水磷酸二氢钾和1.8g/L无水磷酸氢二钠等体积混合