钟。

24. 大便标本的除菌处理：加抗生素终浓度10 000U/ml，4℃过夜或1000转/ min，离心20分钟。 将含病毒的悬液2000--6000转/ min，离心30--40分钟，可除去90%以上的细胞碎片和杂质。 25. 流式细胞术: (1)一种细胞分选或分析技术。即以荧光素标记抗体结合相应细胞，用激光束激发单行流动的细胞，根据细胞所携带荧光(强度或类别)进行分选或分析。

(2)一种对悬液中细胞、微生物或细胞器等进行单个快速识别、分析和分离的技术。用以分析细

胞大小、细胞周期、DNA含量、细胞表面分子以及进行细胞分选等。

(3) 用荧光剂对细胞特定成分染色，利用流式细胞仪对处在快速、直线、流动状态中的单细胞

或生物颗粒进行多参数、快速定量分析，并能对特定群体加以分选的现代细胞分析技术。

26. 病毒RNA的碱基序列与mRNA完全相同，称为正链RNA病毒，这种病毒RNA可直接起病毒mRNA的作用。病毒RNA碱基序列与mRNA互补者，称为负链RNA病毒，负链RNA病毒的颗粒中含有依赖RNA的RNA多聚酶，可催化合志互补链。

27. 蜡样杆菌能耐受100℃30min。

检验技术资格考试考点精要——微生物学检验（中级下）

101. 炭疽杆菌：最大的致病G＋杆菌，菌落灰白色，表面干燥呈“毛玻璃”状，稍隆起，低倍镜下菌落边缘呈明显卷发状如（狮鬃），人工培养呈竹节状长链，不分解乳糖，对碘和氧化剂敏感，有菌体多糖，荚膜多肽，芽胞，炭疽毒素四抗菌素原，质粒编码：毒力因子毒素、荚膜。毒素基因位于大质粒pXO1上，荚膜基因位于小质粒pXO2上，二者是致病必须的。各型均应采血液标本。镜检：革兰、荚膜染色。毒力鉴定：1、质粒电泳图谱分析 2、PCR扩增

其选择培养基是戊烷脒血平板，鉴定试验有：青霉素敏感试验、串珠试验，噬菌体裂解试验（AP631株），重碳酸盐毒力试验（有毒力形成芽胞呈M型）。用1:1000的升汞固定5min。

102. 产单核李斯特菌：有鞭毛，无牙胞对人致病，在羊血平板上β溶血环，25℃有动力，37℃动力缓慢（此特征可作为初步判定），能在4℃进行冷增菌，在半固体中可现倒伞状，致病物质为李斯特菌溶素O，通过胎盘或产道感染新生儿是重要特点，常伴EB病毒引起传单。

103. 结核分枝杆菌：人型和牛型，专性需氧，曾发现G＋非抗酸颗粒称Much颗粒，无芽无鞭无荚，烛缸法不适，应用二氧化碳培养皿，常用罗－琴或米氏7H10培养基，35～40℃可长，35～37最适，pH6.5～6.8，18h分裂一代，2～6周才能长出菌落，不发酵糖类，人型的烟酸，硝酸盐还原，烟酰胺酶试验均阳性。可出现Koch现象（初次不发生速发型过敏反应），是Koch在1891年观察到。结核菌素试验红肿硬结：50IU/ml制剂，≤5㎜阴性，≥5㎜阳性；≥15㎜强阳性。结核菌素----旧结核菌素（OT）与结核菌素纯蛋白衍化物（PPD）的通称。

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结核病的诊断依据：临床表现、X线检查特征的肺结核表现、结核菌的痰涂片检查、以及结核菌素试验为主要手段的免疫测试。依赖细胞免疫，迟发超敏反应伴随细胞免疫存在而存在。

结核病动物接种的鉴别诊断所接种的敏感动物---豚鼠，腹股沟皮下。每油镜视野1—9条抗酸菌3+ 结核分枝杆菌，无内外毒素，致病性与其索状因子，蜡质D，分枝菌酸有关。蜡质D为细胞壁主要成份，是一种肽糖脂与分枝菌酸复合物，能引起迟发性过敏反应，并具有佐剂作用。

104. 麻风病原： Hamsen在1937年发现麻风分枝杆菌。具有多形性、抗酸性、聚集性，典型胞内菌。G＋，无动力无芽无荚，人是唯一的宿主和传染源，分瘤型和结核型。免疫功能决定了感染后是否发病及临床类型。麻风菌的有效保护性免疫取决于细胞介导的免疫，没有体液免疫缺陷。主要用涂片染色显微镜检查，鼻黏膜或皮损处取材，用抗酸性染色后检查。除临床检查外，皮肤切刮法涂片查菌及组织病理学检查可有助于麻风诊断的确定。一般瘤型和界线类患者标本中可找到细菌在细胞内存在，有诊断意义。结核样型患者中很少找到细菌。

105.空肠弯曲菌：菌体轻度弯曲似逗点状，菌体一端或两端有鞭毛，运动活泼，在暗视野镜下观察似飞蝇。有荚膜，不形成芽胞。微需氧菌，在含2.5～5%氧和10%CO2的环境中生长最好。最适温度为37～42℃。内毒素能侵袭小肠和大肠粘膜引起急性肠炎，致病因素：粘附、侵袭、产生毒素和分子模拟机制（并发症一格林一巴利综合征），产生细胞紧张性肠毒素、细胞毒素和细胞致死性膨胀毒素而致病

临床：腹痛、腹泻、发热，多见散发，是夏秋季腹泻和旅行者腹泻的主要病因之一。主要是污染水、食物。标本采0—5日内用药前，于运送培养基中4小时内检。

分离培养：采样棉拭子涂于万古霉素、多粘菌素的肉汤增菌培养，再接种于哥伦比亚血(5%脱纤维绵羊血)平板上,42℃培养微需氧（85%N、10%CO2、5%O2）2-3天，不溶血、灰色扁平、湿润光泽、像水滴，边缘完整发亮。

病原鉴定：氧化酶、过氧化酶阳性，G—呈S型、螺旋状、纺锤形可初步确定为弯曲菌。再做42℃、25℃生长试验（布氏杆菌肉汤），H2S试验阳性（排除胎儿弯曲菌）、马尿酸盐水试验阳性（排除结肠弯曲菌）。多引物一步PCR扩增法----空肠弯曲菌mapA基因特异彩片段等。

106.铜绿假单胞菌：条件致病菌，需氧，G－杆菌，有鞭毛，20～42℃长，最适产毒温度是26℃，是35℃，4℃不长，液面可形成菌膜，色素有：绿脓素（溶于水和氯仿），氧化酶阳性，液化明胶、还原硝酸盐，在42℃条件下能生长。荧光素是绿色荧光素（溶于水不溶于氯化）。O抗原有两种：1、内毒素脂多糖2、原内毒素蛋白OEP（类属抗原），选择培养基：NAC（乙酰氨基半乳糖）。

107. 流感嗜血杆菌：寄生人体鼻咽部，抵抗力弱，婴幼儿易感，G—球杆菌，用石碳酸复或美蓝单染呈现两端浓染。要新鲜血液（含Ⅹ和Ⅴ因子）培养基，不溶血，可生长在接种于血平板上的金黄色葡

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萄球菌的周围，流感嗜血杆菌菌落较大，越远越小，即卫星现象。在含1%蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露并加有Ⅹ和Ⅴ因子的酚红肉汤培养基中进行发酵试验，是鉴别所有嗜血杆菌菌株的方法。

荚膜是本菌的主要毒力因子，根据荚膜多糖抗原分为a-f 6个血清型，b型致病力最强；依据吲哚试验、脲素反应、鸟氨酸代谢分为：8个生物型，大部分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型，其中以Ⅰ、Ⅲ型为主，血清型b型生物型为Ⅰ型。副流感嗜血杆菌生长只要Ⅴ因子。接种于巧克力色、含脑心浸液的血琼脂平板。病原鉴定方法： 标本：脑脊液、血液、胸水。

108. 军团菌：1976年，USA费城，G—为胞内寄生菌。无芽胞、无荚膜、有鞭毛，需氧菌（5%CO2剌激生长）常规不易着色，最适为36℃，初次分离要L-半胱氨酸，含铁盐可促进生长，主要可用活性碳－酵母浸出液平板（BCYE），不分解糖。水解马尿酸是嗜肺军团菌特征。活性炭酵母浸出液琼脂（含焦磷酸铁、L-半胱氨酸），菌落呈灰白色，如加溴甲酚紫，菌落呈浅绿色。有杂菌用选择培养基（GVPC），是在BCYE中加入甘氨酸、多粘菌素B、万古霉素及放线酮。试管凝集法抗体的阳性标准：1≥320

水是人类感染的主要来源，水样1L，样本采集到浓缩培养最长不超过14天，最好不超过2天。血液、痰、尿6-8℃避光、隔热运送。并取3份，一份酸处理，一份热处理50℃水30分钟。

证实试验：免疫荧光方法。

感染临床主要有2种形式：1、军团菌病LD（肺炎型）2、庞提阿克热PF

109. 克雷伯杆菌：又称肺炎杆菌，以肺炎克雷伯菌多见，G—有较厚荚膜，多数有菌毛，无芽孢和鞭毛，菌体呈卵圆形或球杆状成双排列，有时菌落出现黏液型用接种环可成丝。具有O抗原和K抗原。是人呼吸道及肠道定殖菌，条件致病菌。主要采痰液，用无菌盐水洗3次+等量PH7.6 1%胰酶37度水中90分钟使痰液均质化，

该菌产生胞外毒性复合物(ETC)，主要成分为荚膜多糖（63%）、脂多糖（30%）和少量蛋白质（7%）。有些菌株还可产生LT和ST肠毒素。荚膜也与致病力有关。动力和鸟氨酸脱羧酶阴

性是本菌最大特点。

血琼脂培养基、麦康凯，菌落大呈黏液型，光亮黏稠，菌落易融合，发酵乳糖，呈现有色菌落。利用荚膜肿胀试验分型，3型和12型，magA基因作该菌诊断。rmpA基因作该菌辅助诊断。

三亚种区别：IMViC试验：肺炎亚种――＋＋，臭鼻亚种－＋－d，鼻硬结亚种－＋――。

110. 衣原体：严格真核细胞内寄生的原核细胞型微生物，非运动性的细菌，多少呈球形、堆状，G-，一般寄生在动物细胞内。有独特发育周期，能通过细菌滤器。沙眼，鹦鹉热嗜衣原体，肺炎嗜衣原体。专性细胞内寄生。6-8日龄鸡胚卵黄囊中繁殖，有包涵体。衣原体的两种形态：原生小体（EB，小而致密的颗粒结构，具感染性，姬染紫红色，无繁殖力）。始体（网状体）（RB，大而疏松的结构，衣原体发育中的繁殖体，不具感染性，具增殖力色，丝状分裂增，姬染兰殖），产生类似于G-杆内毒素。培养物中抑制剂----二乙氨基葡聚糖。

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111. 立克次体：以节肢动物为传播媒介，严格细胞内寄生的原核细胞型微生物。人畜共患，立克次体的致病物质主要有内毒素（脂多糖）和磷脂酶 A。免疫是以细胞免疫为主，体液免疫为辅。

培养特性：动物接种是最常用的培养方法 ,采用豚鼠、小鼠可对多种病原性立克次体进行繁殖。鸡胚卵黄囊常用于立克次体的传代。目前常用的细胞培养系统有鸡胚成纤维细胞、L929细胞、Vero细胞,用PCR方法进行鉴定。WHO推荐金标方法----间接免疫荧光方法（IFA）

孵育最适温度为37℃。常用姬姆尼次、姬姆萨染色，多形性，无芽无鞭。标本保存—80或-160℃。雄性豚鼠腹腔接种，39.5以上为特异发热,观察阴囊红肿（流—，地+）

抗原结构：一、可溶性群特异性抗原，与细胞壁表层的脂多糖构成，耐热。另一种为种特异性抗原，与外膜蛋白构成，不耐热。但恙虫病立克次体的细胞壁结构和抗原成分不同，无粘液层、无微荚膜、无肽聚糖和脂多糖，故另立为东方体属。

斑疹伤寒、恙虫病立克次体的脂多糖与普通变形杆菌某些菌株（如OX 19、X2 、OX k 等）的菌体抗原有共同的抗原成分。交叉凝集试验称外斐反应（Weil-Felix reaction），用于立克次体病的辅助诊断。 补体结合试验是立克次体最常用的方法。

（一）普氏立克次体 (P.prowazekii) ：是流行性斑疹伤寒的病原体。病人是唯一的传染源，体虱传播媒介，在人与人之间传播

（二）莫氏立克次体(R.typhi) ：又名斑疹伤寒立克次体，是地方性斑疹伤寒的病原体。鼠、蚤传播媒介，又称鼠型斑疹伤寒。

（三）恙虫病立克次体 (R.tsutsugamushi) ：恙虫病立克次体是恙虫病的病原体。啮齿类动物、兔类、鸟类为传染源。人类通过恙螨幼虫叮咬而感染

112. 支原体：无细胞壁，仅有细胞膜（外，中，内，中间是磷脂，内外是蛋白质及糖）呈高度多形性，能通过滤菌器，最小原核细胞微生物。采样黏膜组织，初次培养最适pH7.6～8.0，在95%N2，5%CO2中生长好，菌落呈“油煎蛋”）样菌落，取样：黏膜组织。分离培养是确诊支原体感染的可靠方法之一，接种平板后用胶纸封保湿，培养基中加入胆固醇、血清蛋白和酵母浸液，加酚红，醋酸铊及抗生素抑菌。Giemsa染色呈淡紫色，Dienes染色呈蓝色不易褪色。40倍镜下可见油滴状菌落，100倍下可见桑椹状菌落。

16种支原体中，肺炎、解脲、人型、生殖器、发酵支原体对人致病，肺炎支原体引起间质性肺炎，其它4种引起泌尿生殖道感染。

快速检测：双抗体夹心ELISA法---检测外膜蛋白、免疫印迹技术---检测抗原

114. 肝炎病毒：甲型（HAV）、乙型（HBV）、丙型（HCV）、丁型（HDV）、戊型（HEV）。 甲型（HAV）：正链小RNA病毒科，球形正十二面体，病毒颗粒无包膜，基因组长约7.5kb的正链RNA，核酸RNA有感染性。是在各种条件下抵抗外界变化能力最强的病毒之一。1：4000甲醛液（福尔马林）37度71小时可灭活。粪—口传播。

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