一、培养基：1、营养物质：蛋白胨、肉浸汁和牛肉膏、糖醇类、血液、动物血清与鸡蛋、无机盐类、生长因子。

二、水分。

三、凝固物：琼脂、明胶、卵蛋白及血清

琼脂：成份为多糖，赋形物。固培养基2—3%，半固培养基0.2—0.5% 明胶:主含蛋白质,24℃以上溶解,20℃以下凝固

四、抑制剂：五、指示剂：酚红、溴甲酚紫、中性红、甲基红、溴香草酚蓝、中国蓝、酸性复红等酸碱指示剂；美蓝氧化还原指示剂。

一般培养基高压121℃，1.05㎏30分钟。含糖培养基高压灭菌0.56㎏15分钟。 培养螺旋体常用培养基---Korthof，温度28℃，含有10%兔血清。 MPN法---稀释培养测数法。适宜测定土壤中微生物中的特定生理群。

活菌计数最准确的方法---倾注平板计数法。最快的细菌计数方法---显微镜直接计数法。 空斑形成数---PFU

我国最早实验室生物安全卫生行业标准是：微生物实验室生物安全通用守则。2003年8月1日实行。 我国第一部实验室生物安全国家标准是：《实验室生物安全通用要求》。2004年10月1日执行。 WHO制定的生物安全指南：《实验室生物安全手册》2004年11月出版第3版。

细菌的生化反应试验

糖醇类代谢试验：糖发酵试验、甲基红试验、V-P试验、葡萄糖氧化/发酵试验（O/F试验）、七叶苷水解试验、B-半乳糖苷渗透酶试验。

糖发酵试验原理：多糖→单糖→丙酮酸→酸性产物（或产酸产气）→PH下降→指示剂呈酸性变色。 蛋白质类代谢试验：靛基质试验、硫化氢试验、苯丙氨脱氨试验、尿素酶试验 双糖：葡萄糖、乳糖；三糖：葡萄糖、乳糖、蔗糖； 双糖高层斜面发酵管：葡萄糖/乳糖=1：10

三糖铁与双糖铁区别：蔗糖。糖类发酵是鉴定细菌最常用的生化反应。需氧芽胞菌除炭疽外均有鞭毛。 TI-Ag的特点: 非胸腺依靠性抗原,不需T细胞辅助即可刺激机体产生抗体。少数Ag属此类。如细菌多糖、聚合鞭毛蛋白等。共同特点：TI-Ag刺激机体产生的Ab仅是免疫球蛋白M，不引起回忆应答，不引起细胞免疫。

鉴定肠杆菌科基本条件；发酵葡萄糖、氧化酶阴性、还原硝酸盐。 核酸检验基本技术

转录----在生物体内，DNA指导的RNA合成过程。合成RNA时DNA双链要解旋，解旋部位称为

17

启动子。大肠菌的RNA聚合酶有5个亚基，其o亚基有启动子作用。

反转录病毒基因组一般不具感染性。

2．变态反应（超敏反应）------是指机体对某些抗原初次应答后，再次接受相同抗原刺激时，发生的一种以机体生理功能紊乱或组织细胞损伤为主的特异性免疫应答。

在合成DNA时限制性核酸内切酶不是合成DNA的必要条件。DNA多聚酶只能结合在一长段DNA单链的一小段局部双链结构上，才能顺利开始DNA合成。DNA在合成中单核苷酸分子必须顺序以共价链连接在已形成核酸链3’末端的羟基上。在合成发生错误时，DNA多聚酶会切除错误核苷酸，于此处加上正确的核苷酸。与人工合成DNA区别。

大肠杆菌DNA损伤修复时填补缺口最重要的酶---DNA聚合酶Ⅰ。复制最主要的DNA聚合酶---DNA聚合酶Ⅲ，该酶的核心聚合酶中，具有3’--5’外切酶活性的亚基是e亚基。大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的Klenow片段没有5’--3’外切酶活性。逆转录酶的RNAaseH活性是一般DNA聚合酶所不具备的。在体内DNA复制必须有RNA引物。

合成中tRNA搬运氨基酸作用、rRNA构成核糖体骨架、mRNA直接决定蛋白质结构。

Ⅰ型变态反应：即速发型，又称过敏反应。特点：过敏原进入机体后，诱导B细胞产生IgE抗体。由IgE介导，肥大细胞和嗜碱粒细胞等效应细胞以释放生物活性介质的方式参与反应；发生快，消退亦快；

Ⅱ型变态反应：细胞毒型/细胞溶解型，抗体（多属IgG、少数为IgM、IgA）首先同细胞本身抗原成分或吸附于膜表面成分相结合，然后通过四种不同的途径杀伤靶细胞

Ⅲ型变态反应：即免疫复合物型，又称血管炎型超敏反应。特点：游离抗原与相应抗体结合形成免疫复合物（IC），若IC不能被及时清除，即可在局部沉积，通过激活补体，并在血小板、中性粒细胞及其他细胞参与下，引发一系列连锁反应而致组织损伤。

Ⅳ型变态反应：即迟发型（细胞介导型），Ⅳ型是由特异性致敏效应T细胞释放的LF介导的。 分泌型IgA（S IgA）分布于呼吸道、消化道、泌尿生殖道黏膜表面。是机体黏膜防御感染的重要因素。

免疫原性含义：剌激机体免疫系统，有诱生抗体和致敏淋巴细胞的能力。产生抗体的细胞是B细胞，本质是免疫球蛋白（Ig）。免疫球蛋白（Ig）的分类主要依据—重链恒定部份CH的结构特点。

T细胞是：细胞毒性T细胞。浆细胞来源于活化B细胞。特异性B细胞经过抗原识别、活化、增殖、分化成为浆细胞。

可以保持蛋白质活性的蛋白质沉淀方法是：硫酸铵、聚乙二醇、免疫沉淀法。

可用于检测致泻大肠埃希菌肠毒素的方法：酶联免疫吸附试验检测LT和ST、双向琼脂扩散试验检测LT、乳鼠灌胃试验检测ST.

18

琼脂糖凝胶电泳缓冲液通常用：1*TAE或0.5*TBE，溴化乙锭是诱变剂。 鉴别宋内志贺菌与其他志贺菌的生化反应是：鸟氨酸试验。 卡介苗简称为：BCG

钩瑞螺旋体可以引起肺部感染

Vero细胞毒素是O157：H7大肠杆菌的最主要致病物质 耐热直接溶血素属于副溶血弧菌的主要致病物质 Ag与Ab结合的部位是：VH+VL

Ag决定基是: 决定Ag特异性最小化学基团

HIV造成免疫系统的多种功能发生缺陷的主要原因是: T4淋巴细胞耗竭

EBV除引起人类皮肤和黏膜的疱疹样病变外，还与下列人类鼻咽癌疾病密切相关 核衣壳是病毒粒子的主要结构，核衣壳是由衣壳和核酸成分组成的

做补体结合试验前血清加热灭活以破坏它所含有的补体，通常羊血清用58℃温度灭活 我国于1981年开始用地鼠肾细胞疫苗，近几年又开始应用更为先进的狂犬病疫苗，这种疫苗是: Vero细胞狂犬病疫苗

当进行抗球蛋白试验查不完Ab时，其中一个重要试剂是第二Ab，在抗球蛋白试验中第二抗体是----双价抗体

在CFT反应中有5种成份：Ag、被检血清、补体、溶血素和SRBC，CFT反应中补体的作用是: 非特异性结合。在CFT反应中为了查Ag，常常降低反应温度，称为冷CFT，冷CFT反应温度通常是：4℃

目前已知的可以在临床上造成出血热的病毒如下：

布尼亚病毒科：流行性血热、克里米亚刚果出血热 黄病毒科：登革出血热

丝状病毒科：艾博拉出血热。病毒在胞浆内繁殖，芽生释放。急性期标本接种于Vero细胞培养或藤鼠腹腔

与小儿顽固性腹泻有关的是：肠集聚粘附性大肠埃希氏菌 引起旅游者腹泻的最主要的是：肠产毒性大肠埃希氏菌

钩体病的主要传染源是：鼠类动物。发病一周内取血液，第二周以后取尿，有脑膜炎型症状者取脑脊液进行检查。

病毒检验基本技术

1．组织培养用玻璃器皿：硫酸、重铬酸钾液浸泡。

2．人工综合组织培养营养液：氨基酸、糖类、无机盐、维生素、辅助生长因子。MEM、RPMI 1640

19

3．细胞培养液分生长液、维持液，两者区别在血清含量不同。EDTA、胰蛋白酶分散作用。 4．细胞病变（CPE）、二甲亚砜（DMSO）细胞保护剂、

5．半数致死量（LD50）--导致半数动物死亡的细菌感染量。是评价化学毒物急性毒性大小最重要的参数。（大小鼠、雌雄各半，初成年，受试后14天内总死亡数）

最小全数致死量（MLD）--引起全部动物死亡的最小感染剂量。半数感染量（ID50）--导致半数

组织培养细胞发生感染的细菌数量或毒素剂量。TCID50—半数细胞培养物感染量。

一、致死剂量LD: (1)绝对致死剂量LD100 (2)最小致死剂量LD01 (3)最大耐受剂量LD0 二、效应、反应、剂量—效应、剂量—反应、关系曲线 6．超过滤法：用不同孔径的火棉胶滤膜过滤病毒悬液。

7．中和抗体抗病毒机制：改变病毒表面的构型，阻止病毒吸咐、穿入易感细胞进行繁殖。 8．迟发感染的特点：又称慢发病毒感染。潜伏期很长可达数月、数年或数十年之久。一旦症状出现，多为亚急性、进行性，并造成死亡。

包涵体----病毒在增殖过程中使寄主细胞内形成一种蛋白质性质的病变结构，在光学显微镜下可见，多为圆形、卵圆形或不定形。

9．引起脑膜炎的肠道病毒：肠道病毒70型、肠道病毒71型、柯萨奇A组16型、脊髓灰质炎病毒。 10. C6/36是白蚊伊蚊细胞：分离登革热、乙脑病毒。

11. 蓄积系数经值：＜1高度、1—3明显、3—5中度、＞5轻度。 12. 协同作用---一种物质的存在能促进其他物质效应的作用。

13. 病毒病的常规实验室诊断指----病毒的分离和鉴定、形态学检查、免疫学鉴定、分子生物学鉴定。 14. 空斑试验---用于测定病毒的感染力。 15. Versen----又称EDTA

16. 病毒的形态学检查方法---电子显微镜（EM）、光学显微镜、超速离心法、超过滤法、X射线晶体衍射法。

17. Alsever液---是一种红细胞保存液，含有抗凝剂柠檬酸钠和细胞需要的养分葡萄糖。pH值调到6.1，经过69千帕，15分钟的高压灭菌，放置在4℃的环境内，保存备用。

18. 常用的细胞培养液：MEM、1640。加入HEPES具有较强的缓冲能力。 19. 中和试验----必须制备高效价免疫血清或取高滴度病人恢复期血清。 20. 原位杂交----可直接检测或定位细胞内毒基因。

21. 乙脑病毒主要存在于血清中，用一于分离病的血清一般不加抗凝剂。 22. 麻疹病毒主要吸附在白细胞上，加抗凝剂可提高分离率。

23. 鼻咽拭子的除菌处理：加抗生素终浓度20 000U/ml，4℃作用4小时，2000转/ min，离心20分

20