26、竞争性抑制剂使 Vmax , Km 。非竞争性抑制的酶反应中Vmax___ __,Km_____ ____。 （不变， 增加 ， 减小，不变） 五、计算

1、某酶制剂的比活力为42单位/mg蛋白质,每ml含12mg蛋白质,

(1) 计算1ml反应液中含5μl酶制剂时的反应初速度

(2) 若1ml反应液内含5μl酶制剂,在10分钟内消耗底物多少? 解：

(1) 1个酶活力单位为特定条件下,1分钟内能转化1μmol底物的量.

反应初速度v=5×10-3×12×42 =2.52（μmol/L/min） (2) 10分钟内消耗底物: 2.52μmol/L/min×10min=25.2μmol

2、某酶的Km为4.7*10-3M，如果该反应的Vmax是22μmol*L-1*min-1,在底物浓度为2*10-4M和抑制的浓度为5*10-4M的情况下在：

（1） 竞争性抑制，其反应速度将是多大？

（2） 非竞争性，其反应速度又将是多大？（Ki在这两种情况下都是3*10-4） （共3分） 解：（1）v=Vmax[S]/{ Km(1+[I]/ Ki)+[S]}

=22*10-6*2*10-4/{4.7*10-3*(1+5*10-4/3*10-4)+2*10-4} =3.46*10-7(mol*L-1*min-1)

(2) v=( Vmax/(1+[I]/ Ki) [S])/( Km+ [S])

=3.57*10-7(mol*L-1*min-1

3、某一符合米氏方程的酶，当[S]=2Km时，其反应速度Vmax等于多少？

v=Vmax[S]/(Km+[S])

v=Vmax*2Km/(Km+2Km) v=2/3Vmax

即此时反应速度为最大反应速度2/3

#4、某酶的Km为4.0×10-4mol/L,Vmax=24μmol/L/min，计算出当底物浓度为2×10-4mol/L，非竞争性抑制剂浓度为6.0×10-4 mol/L,Ki为3.0×10-4 mol/L时的抑制百分数。

有抑制剂存时：

v=Vmax[S]/(1+[I]/Ki)(Km+[S]) v=24 *2×10-4/(1+6.0×10-4/3.0×10-4)( 4.0×10-4+2×10-4) v=24 *2×10-4/18 v=8/3×10-4(μmol/L/min) 无抑制剂存时： v=Vmax[S]/(Km+[S]) v=24 *2×10-4/( 4.0×10-4+2×10-4) v=8×10-4(μmol/L/min) [1-8/3×10-4(μmol/L/min)/ 8×10-4(μmol/L/min)]*100%=66.7%

即有非况争性抑制剂存在时,其抑制百分数为66.7%

5、已知1亳升酶溶液中含蛋白质量为0.625mg，每亳升酶溶液所含酶单位为250，些酶的活性是多少？（3’）

250/0.625=400U/mg

6、一酶促反应的速度为Vmax的80%,在Km与[S]之间有何关系?

Km=[S]/4

7、某一酶促80反应的速度从最大速度的10%提高到90%时，底物浓度要做多少改变？ 需提高80倍

8、一种纯酶按重量算含Leu 1.65%和Ile 2.48%,问该酶最低分子量为多少?

解：设该酶的最低分子量为M, 最少含X个 Leu残基, 含Y个Ile残基

则：XMLeu/M=1.65% YMIle/M=2.48% 因为 MLeu ＝ MIle ＝131

所以X/Y=1.65/2.48＝2/3 即X＝2 Y＝3

代入公式：2 x 131/M=1.65% M=2 x 131/1.65%=15800

答该酶最低分子量为15800

9、过氧化氢酶Km值为2.5*10-2克分子/升，当底物过氧化氢浓度为100毫克分子/升时，求在此浓度下，过氧化氢酶被底物所饱和的百分数（即V/Vmax=？） 解答：V=Vmax[S]/（Km+[S]）

故V/Vmax=[S]/（Km+[S]）=100*10-3/（2.5*10-2+10-1）=0.1/0.125*100%=80% 10、某酶的Km为4.0×10-4mol/L,Vmax=24μmol/L/min，计算出当底物浓度为2×10-4mol/L，非竞争性抑制剂浓度为6.0×10-4 mol/L,Ki为3.0×10-4 mol/L时的抑制百分数。 解答：有抑制剂存在时：

v=Vmax[S]/(1+[I]/Ki)(Km+[S]) v=24 *2×10-4/(1+6.0×10-4/3.0×10-4)( 4.0×10-4+2×10-4) v=24 *2×10-4/18 v=8/3×10-4(μmol/L/min) 无抑制剂存在时： v=Vmax[S]/(Km+[S]) v=24 *2×10-4/( 4.0×10-4+2×10-4) v=8×10-4(μmol/L/min) [1-8/3×10-4(μmol/L/min)/ 8×10-4(μmol/L/min)]*100%=66.7% 即有非竞争性抑制剂存在时,其抑制百分数为66.7% 六、问答

1、同工酶有何生理意义？

同工酶指能催化同一种化学反应，但其酶蛋白分子结构组成却不同的一组酶。同工酶可能是生命有机体对环境变化或代谢变化的另一种调节方式，即当一种同工酶受抑制或破坏时，其他同工酶仍起作用，从而保证代谢的正常进行。 #2、简述多底物反应的几种机理。

多底物反应有：依次反衣机理，即产生的底物随酶催化反应依次释放；随机反应机理，即底物以随机的方式释放；乒乓反应机理。

3、如何解释酶活性与pH的变化关系，假如其最大活性在pH=4或pH=11时，酶活性可能涉及那些氨基酸侧链？

解答：(1)过酸、过碱影响酶蛋白的构象，甚至使酶变性失活。

(2)PH改变不剧烈时，影响底物分子的解离状态和酶分子的解离状态，从而影响酶对底物的结合与催化。 (3)PH影响酶分子中另一些基团的解离，这些基团的解离状态与酶的专一性及酶分子的活性中心构象有关。

如果酶的最大活性在PH=4时，可能涉及酸性氨基酸：天冬氨酸、谷氨酸； 如果酶的最大活性在PH=11时，可能涉及碱性氨基酸：赖氨酸、组氨酸和精氨酸。 4、 述酶活性调控的几种机制。

解答：酶活性调控的机制有：别构效应的调控，可逆共价修饰调控，酶原的激活和激促蛋白或抑制蛋白质的调控。

5、运用生化理论，试分析下述现象：绝大多数酶溶解在纯水中会失活，为什么？ 解答：酶溶解在蒸馏水中，（1）不能为酶催化反应提供最适的PH环境，特别是当反应过程中，PH发生变化时，不能起缓冲作用；（2）在蒸馏水中蛋白质容易变性；（3）酶在净水溶液中缺乏必需的离子，且对温

度变化敏感，所以对酶来说在蒸馏水中容易失活。

第五章 核酸

一、名词解释

1、cAMP和cGMP：分别是环腺苷酸和环鸟苷酸，它们是与激素作用密切相关的代谢调节物。 #2、断裂基因

断裂基因：真核生物的基因由于内含子的存在，而使基因呈不连续状态，这种基因称为断裂基因。 3结构基因：为多肽或RNA编码的基因叫结构基因。

‘

4、假尿苷：在tRNA中存在的一种5-核糖尿嘧啶，属于一种碳苷，其C1与尿嘧啶的C5相连接。

#5、Southern印迹法：把样品DNA切割成大小不等的片段，进行凝胶电泳，将电泳分离后的DNA片段从凝胶转移到硝酸纤维素膜上，再用杂交技术与探针进行杂交，称Southern印迹法。

6、核酸的变性：高温，酸，碱以及某些变性剂（如尿素）能破坏核酸中的氢键，使有规律的螺旋型双链结构变成单链的无规则的“线团”，此种作用称为核酸的变性。

7、核酸的变性：高温、酸、碱以及某些变性剂（如尿素）能破坏核酸种的氢键，使有规律的双螺旋结构变成单链，似无规则的“线团”，此谓核酸的变性。

8、内含子：基因中不为蛋白质、核酸编码的居间序列，称为内含子。

9、假尿苷：tRNA分子中存在一种核糖尿嘧啶，其C1’是与尿嘧啶的第三个碳原子相连。 10、增色效应：核酸变性或降解时其紫外线吸收增加的现象。 11、hnRNA：称为核不均一RNA，是细胞质mRNA的前体。

12、退火：变性核酸复性时需缓慢冷却，这种缓慢冷却处理的过程，叫退火。

13、复制子：基因组能独立进行复制的单位称为复制子。原核生物只有一个复制子，真核生物有多个复制子。

14、增色效应：DNA或RNA变性或降解时其紫外吸收值增加的现象称增色效应。 15、减色效应：DNA或RNA复性时其紫外吸收值减少的现象称减色效应。

16、Northern印迹法：将电泳分离后的RNA吸印到纤维素膜上再进行分子杂交的技术，称Northern印迹法。

17、解链温度：DNA的加热变性一般在较窄的温度范围内发生，通常把DNA的双螺旋结构失去一半时的温度称为DNA的解链温度。 二、选择

#1、把RNA转移到硝酸纤维素膜上的技术叫：（B）

A Southern blotting B Northern blotting

C Western blotting D Eastern blotting 2、外显子代表：（E）

A 一段可转录的DNA序列 B 一段转录调节序列

C一段基因序列 D一段非编码的DNA序列 E一段编码的DNA序列 3、脱氧核糖的测定采用（ B ）

A、地衣酚法 B、二苯胺法 C、福林-酚法 D、费林热滴定法 *4、在DNA双螺旋二级结构模型中，正确的表达是：（CF）

A 两条链方向相同，都是右手螺旋 B 两条链方向相同，都是左手螺旋 C 两条链方向相反，都是右手螺旋 D 两条链方向相反，都是左手螺旋 E 两条链的碱基顺序相同 F 两条链的碱基顺序互补

5、可见于核酸分子的碱基是：（A）

A 5-甲基胞嘧啶 B 2-硫尿嘧啶 C 5-氟尿嘧啶

D 四氧嘧啶 E 6-氮杂尿嘧啶

6、下列描述中哪项对热变性后的DNA： ( A )

A紫外吸收增加 B 磷酸二酯键断裂

C 形成三股螺旋 D （G-C）%含量增加

7、双链DNA Tm值比较高的是由于下列那组核苷酸含量高所致：（B）

A G+A B C+G

C A+T D C+T E A+C

8、核酸分子中的共价键包括：（A）

A 嘌呤碱基第9位N与核糖第1位C之间连接的β-糖苷键 B 磷酸与磷酸之间的磷酸酯键

C 磷酸与核糖第一位C之间连接的磷酸酯键

D核糖与核糖之间连接的糖苷键 9、可见于核酸分子的碱基是（ A ）

Ａ、５－甲基胞嘧啶 Ｂ、２－硫尿嘧啶 Ｃ、５－硫尿嘧啶 Ｄ、四氧嘧啶 Ｅ、６－氮杂尿嘧啶

*10、Watson和Crick提出DNA双螺旋学说的主要依据是（ D E ） A、DNA是细菌的转化因子 B、细胞的自我复制

C、一切细胞都含有DNA D、DNA碱基组成的定量分析 E、对DNA纤维和DNA晶体的X光衍射分析 F、以上都不是主要依据 11、多数核苷酸对紫外光的最大吸收峰位于：（ ）C

A、220 nm附近 B、240 nm附近 C、260 nm附近 D、280 nm附近 E、300 nm附近 F、320 nm附近 12、含有稀有碱基比例较多的核酸是：（ C ）

Ａ、胞核DNA Ｂ、线粒体DNA Ｃ、ｔRNA Ｄ、ｍRNA Ｅ、ｒRNA Ｆ、hnRNA 13、自然界游离核苷酸中的磷酸最常连于戊糖的 ( C ) A、C-2’ B、C-3’ C、 C-5’ D、C-2’及C-3’C-2 E、 C-2’及C-5’

*14、在DNA双螺旋二级结构中，正确的表达是（ C F ）

A、两条链方向相同，都是右手螺旋。 B、两条链方向相同，都是左手螺旋。 C、两条链方向相反，都是右手螺旋。 D、两条链方向相反，都是左手螺旋。 E、两条链的碱基顺序相同。 F、两条链的碱基顺序互补。 15、核酸分子储存、传递遗传信息的关键部分是：（C） A. 磷酸戊糖 B. 核苷 C. 碱基序列 D. 戊糖磷酸骨架 E. 磷酸二酯键 16、嘌呤核苷中嘌呤与戊糖的连接键是：（A）

A．N9－C1 B. C8－C1 C. N1－ C1 D. N7－C1 E. N1－C1 F. C5－C1

17、可用於测量生物样品中核酸含量的元素是： （ B ） A. N B. P C. C D. H E. O F. S 18、X和Y两种核酸提取物，经紫外线检测，提取物X的A260/A280 =2, 提取物YA260/A280 =1，该结果表明： （ B ）

A.提取物X的纯度低於提取物Y B.提取物Y的纯度低於提取物X