答案完善版本，不要太爱我，我只是神一般的女子！

第二章

一、填空题

1、由 DNA 和 组蛋白 组成的染色质纤维细丝是许多核小体连成的念珠状结构。P30 2、 核小体的形成 是染色体中DNA压缩的第一阶段。P32

3、DNA的二级结构分两大类：一类是 右手螺旋，另一类是 左手螺旋。P37

4、如果DNA聚合酶把一个不正确的核苷酸加到3’末端，一个含有3’ 5’活性的独立催化区会将这个错配碱基切去。这个催化区成为 校正核酸外切酶 。

5、原核生物中有三种起始因子分别是 IF-1 、 IF2 和 IF-3 。P137 6、由于新合成的DNA分子中，都保留了原DNA的一条链因此叫半保留复制 p43

7、复制时，双链DNA要解开成两股链分别进行，所以，这个复制起始点呈现叉子的形式，被称为复制叉.p43

8、为了解释DNA的等速复制现象，日本学者冈崎（okazaki）等提出了DNA的半不连续复制.p46 9、两条链均按5'到3'方向合成,一条链3'末端的方向朝着复制叉前进的方向,可连续合成,称前导链。P46 10、环状DNA双链的复制可分为θ型、滚环形 和 D型 几种类型.p47 11、真核细胞的DNA聚合酶和细菌DNA聚合酶基本性质相同，均以__dNTP___为底物，需要__Mg__激活，聚合时必须有 _模板链 和_3’-OH末端_的引物链，链的延伸方向为5’→3’. (55页) 12、DNA聚合酶的α的功能主要是 引物合成,即能起始前导链和后导链的合成.（P55）

13、DNA复制的调控主要发生在 起始阶段_ ,一旦开始复制,如果没有意外的阻力,就可以一直复制下去直到完成.(P56)

14、质粒DNA编码两个负调控因子_Rop蛋白______和反义RNA(RNA1),它们控制了起始DNA复制所必须的_引物合成__。(P56)

15、染色体的复制与_细胞分裂_一般是同步的，但复制与_细胞分裂_不直接偶联。(P56) 16、转座子分为两大类:插入序列和复合型转座子。（书P62） 17、转座子存在于原核细胞和真核细胞内。（书P63）

18、玉米细胞内的转座子归纳为两大类：自主性转座子和非自主性转座子。（书P64） 19、转座作用可被分为复制型和非复制型两大类。（书P65）

20、插入序列是最简单的转座子，它不含有任何宿主基因。（书P62）

21、SOS反应广泛存在于原核和真核生物中，主要包括两个方面：DNA的修复；产生变异。P62 二、名词解释

C值反常现象：指C值往往与种系进化的复杂程度不一致，某些低等生物却有较大的C值p29 端粒：是真核生物线性基因组DNA末端的一种特殊结构，它是一段DNA序列和蛋白质形成的复合体.p33

DNA变性与复性：当DNA溶液温度接近沸点或者pH较高时，互补的两条链就可能分开，称为DNA的变性：但DNA双链的这种变性过程是可逆的，当变性DNA的溶液缓慢降温时，DNA的互补链又可重新聚合，重新形成规则的双螺旋。p40

增色效应：当DNA溶液温度升高到接近水的沸点时，260nm的吸光度明显增加。p40 复制子：一般把生物体内能独立进行复制的单位称为复制子。p43 复制起始点：复制子中控制复制起始的位点称为复制起始点。p43

染色体水平调控：决定不同染色体或同一染色体不同部位的复制子按一定顺序在S期起始复制。P57

DNA聚合酶:是一种天然产生的能催化DNA（包括RNA）的合成和修复的生物大分子。P53、P177 AP位点：所有细胞中都带有不同类型、能识别受损核酸位点的糖苷水解酶，它能特异性切除受损核苷酸上的N-?糖苷键，在DNA链上形成去嘌呤或去嘧啶位点，统称为AP位点。p59 转座子：存在于染色体DNA上可自主复制和位移的基本单位（P62）

2+

复合型转座子：是一类带有某些抗药性基因（或其他宿主基因）的转座子，其两翼往往是两个相同或高度同源的IS，表明IS插入到某个功能基因两端时就可能产生复合型转座子。(P62)

SNP：即单核苷酸多态性，指基因组DNA序列中由于单个核苷酸（A、T、C和G）的突变而引起的多态性。p66

三、简答题

1.染色体具备哪些作为遗传物质的特征？

答：①分子结构相对稳定②能够自我复制，使亲子代之间保持连续性③能够指导蛋白质合成，从而控制整个生命过程④能够产生可遗传的变异P25 ‘

2.什么是核小体？简述其形成过程：P31-P32

答：核小体是染色质的基本结构单位，由200bpDNA和组蛋白八聚体组成。

形成过程：核小体是由H2A、H2B、H3、H4各两个分子生成的八聚体和由大约200bp的DNA组成的。形成核小体时八聚体在中间，DNA分子盘绕在外组成真核细胞染色体的一种重复珠状结构。

3.简述组蛋白都有哪些类型的修饰，其功能分别是什么？

答：类型：甲基化、乙酰化、磷酸化、泛素化及ADP核糖基化。

功能：1.甲基化：不同程度的甲基化极大地增加了组蛋白修饰和调节基因表达的复杂性，组蛋白的甲基化与基因激活和与基因沉默相关，与其他相比其修饰较为稳定。

2.乙酰化：乙酰化修饰影响染色质结构和基因活化，高乙酰化水平会使转录活化；低乙酰化则抑制转录，组蛋白的乙酰化和去乙酰化修饰还参与DNA修复、拼接、复制，染色体的组装，以及细胞的信号转导，与疾病的形成密切相关。P28

4.简述DNA的一、二、三级结构：

答：1，DNA的一级结构，就是指4种核苷酸的连接及排列顺序，表示了该DNA分子的化学成分；2，DNA的二级结构是指两条多核苷酸链反向平行盘绕所形成的双螺旋结构；3，DNA的高级结构是指DNA双螺旋进一步扭曲盘绕所形成的更复杂的特定空间结构。p35-p41

5.DNA双螺旋结构模型是有谁提出的？简述其发现的主要实验依据及其在分子生物学发展中的重要意义。P35P37

答：由Waston和Crick提出。意义：为合理地解释遗传物质的各种功能，解释生物的遗传和变异，解释自然界千变万化的生命现象奠定了理论基础。

6.解释在DNA复制过程中，后随链是怎样合成的。P46

答：后随链在合成过程中，一段亲本DNA单链首先暴露出来，然后以与复制叉移动相反的方向按照5‘—3’方向合成一系列的冈崎片段，然后再把它们连成完整的后随链。

7.简述DNA复制的调控P56

答：原核细胞DNA的复制调控：细胞复制叉的多少决定了复制起始频率的高低，DNA复制的调控主要发生在起始阶段，一旦开始复制，如没有意外阻力就可以一直复制下去直到完成。

真核细胞的DNA的复制调控：分为3个水平：1.细胞生活周期水平调控，即限制点调控，决定细胞停留在G1期还是进入S期。2.染色体水平调控：决定不同染色体或同一染色体不同部位的复制子按一定顺序在S期起始复制。3.复制子水平调控：决定复制的起始与否。

8.真核生物DNA的特点P54

答：1.基因组庞大；2.存在大量重复序列；3.大部分为非编码序列；4.转录产物为单顺反子；5.基因是断裂基因，有内含子结构；6.存在大量的顺式作用元件；7.存在大量的DNA多态性；8.具

有端粒结构。

9.原核生物DNA具有哪些不同于真核生物DNA的特征？P50-p54

答：1。结构简练：原核DNA分子的绝大部分是用来编码蛋白质，只有非常小的一部分不转录，这与真核DNA的冗余现象不同。

2,存在转录单元：原核生物DNA序列中功能相关的RNA和蛋白质基因，往往丛集在基因组的一个或几个特定部位，形成功能单元或转录单元，它们可被一起转录为含多个mRNA的分子，称为多顺反子mRNA。

3,有重叠基因：重叠基因，即同一段DNA能携带两种不同蛋白质信息。主要有以下几种情况①一个基因完全在另一个基因里面；②部分重叠；③两个基因只有一个碱基对是重叠的。

10.大肠杆菌中的DNA修复系统及其功能？p57 答：1.错配修复：恢复错配；

2.切除修复：切除突变的碱基和核苷酸片段；

3.重组修复：复制后的修复，重新启动停滞的复制叉； 4.DNA直接修复：修复嘧啶二体或甲基化DNA； 5.SOS系统：DNA的修复，导致变异。

11.转座子的类型：(P65)

答：1）插入序列（IS）：最简单的转座子，不含任何宿主基因。

2）复合型转座子：是一类带有某些抗药性基因（或其他宿主基因）的转座子，其两翼往往是两个相同或高度同源的IS，表明IS插入到某个功能基因两端时就可能产生复合型转座子。

12.转座子的遗传效应：(P65)

答：1）转座引起插入突变，导致结构基因失活。 2）出现新的基因 ；3）染色体畸变；4）引起生物进化

四、论述题

1.谈谈在复制型转座过程中，转座和切离的关系。P65

答：在复制转座过程中，转座和切离是两个独立事件。先是由转座酶分别切割转座子的供体和受体DNA分子。转座子的末端与受体DNA分子连接，并将转座子复制一份拷贝，由此生成的中间体即共整合体（cointegrat，）有转座子的两份拷贝。然后在转座子的两份拷贝间发生类似同源重组的反应，在解离酶的作用下，供体分子同受体分子分开，并且各带一份转座子拷贝。同时受体分子的靶位点序列也重复了一份拷贝。

2.为什么说DNA的复制是半保留半不连续复制？P46

答：半不连续复制是由于DNA双螺旋的两股单链是反向平行，一条链的走向为5'-3',另一条链为3'-5',DNA的两条链都能作为模板以边解链边复制方式，同时合成两条新的互补链。但是，所有已知DNA聚合酶的合成方向都是5’-3’，所以在复制是，一条链的合成方向和复制叉前进方向相同，可以连续复制，称为前导链；另一条链的合成方向与复制叉前进方向相反，按5‘-3’方向生成一系列冈崎片段，然后它们连接完整的链，这条链称随后链。因此就把前导链连续复制，后随链不连续复制的复制方式称为半不连续复制。

3.原核生物和真核生物DNA复制的异同点(50-51) 答：同：均遵从互补配对原则。

异：真核生物每条染色质上可以有多处复制起点，而原核生物只有一个起始点；真核生物的染色体在全部完成复制之前，各个起始点上DNA的复制不能再开始，而在快速生长的原核生物中，复

制起始点上连续开始新的DNA复制，表现为虽只有一个复制单元，但可有多个复制叉。

第三章 一、填空题

1、 转录的基本过程包括：模板的识别、转录起始、通过启动子、转录的延伸和终止 p74 2、 大肠杆菌RNA聚合酶与启动子的相互作用主要包括启动子区的识别、酶与启动子的结合以及σ因子的结合与解离。P85

3、 核酶分可分为剪切型核酶和剪接型核酶两大类。P112

4、 RNA编辑具有重要的生物学意义，其中包括校正作用、调控翻译和扩充遗传信息。P109 5、 基因转录实际上是RNA聚合酶、转录调控因子和 启动子区 各种调控元件相互作用的结果。 6、.基因表达包括_ 转录__和__翻译____两个阶段。P72

7、.大肠杆菌RNA聚合酶与启动子的相互作用主要包括__启动子区的识别__，__酶与启动子的结合_和_σ因子的结合与解离___p85

8、RNA剪接主要有_pre-mRNA剪接__,_Ⅰ类自剪接内含子_____和__Ⅱ_类自剪接内含子 p100

9、tRNA的3个加工过程 内含子的剪接，3’端添加CCA 和 核苷酸的修饰 p100 10、.RNA编辑的生物学意义 校正作用，调控翻译和扩充遗传信息 p109 11、tRNA的种类有 起始tRNA、 延伸tRNA、 同工tRNA、 校正tRNA P127 12、一般把生物体内能独立进行复制的单位称为 复制子。P43 13、核糖体 是指导蛋白质合成的大分子机器。P128

14、RNA既可作为 信息 分子又能作为 功能 分子发挥作用。P74

15、PCR的基本反应过程包括：变性、退火、链的延伸 三个阶段。P178 16. RNA含有核糖和嘧啶，通常是_单链线性__分子(P73)

17.RNA既可作为信息分子又能作为 _功能_分子发挥作用。（P74)

18.RNA转录的基本过程包括模板识别，转录起始、_通过启动子____和__转录的延伸和终止___（P74-P78）

19.启动子是基因转录起始所必需的一段DNA序列，是基因表达调控的 上游顺式作用元件_之一(P74)

20.大肠杆菌RNA聚合酶与启动子的相互作用主要包括启动子区的识别__酶与启动子的结合__和σ因子的结合与解离___p85 21：RNA既可作为信息分子又能作为（功能分子）发挥作用。P74 22：（RNA聚合酶）是转录过程中最关键的酶。P81

23：RNA转录的抑制剂根据其作用性质的主要可分为两大类，（DNA模板功能抑制剂）和（RNA聚合酶的抑制物）。P92

24：根据（中心法则），DNA、RNA和蛋白质之间存在着直接的线性关系。P108 25：生物体内主要有3种RNA：（mRNA、tRNA、rRNA）。P74

26、真核细胞都有明显的核结构，除了（ 性细胞 ）以外，真核细胞的染色体都是二倍体，而性细胞即生殖细胞的染色体数目是体细胞的一半，故称为（单倍体） 27、启动子是基因转录起始所必需的一段（ DNA序列 ）p74 28、细菌释放因子有哪三种：（RF1、RF2、RF3）

二、名词解释

1、 核酶：是类具有催化功能RNA分子，通过催化靶位点RNA链中磷酸二酯键的断裂，特异性地

剪切底物RNA分子，从而阻断基因的表达。P110

2、 增强子：远离转录起始点（1~30Kb）、决定基因的时间、空间特异性表达、增强启动子转录活性的DNA序列，其发挥作用的方式通常与方向、距离无关。增强子也是有若干功能组件——增强体组成，是特异转录因子结合DNA的核心序列。P89

3、编码链：指DNA双链中与mRNA序列相同的那条DNA链。

4、模板识别：指RNA聚合酶与启动子DNA双链相互作用并与之结合的过程。P74

5、错意突变：由于结构基因中某个核苷酸的变化使一种氨基酸的密码变成另一种氨基酸的密码。P127

6、信号肽：在起始密码子后，有一段编码疏水性氨基酸序列的RNA区域，这个氨基酸序列就被称为信号肽。 P151

7. 转录延伸：当RNA聚合酶催化新生的RNA链的长度达到9~10个核苷酸时，σ因子从转录复合物的RNA聚合酶全酶上脱落下来，RNA聚合酶离开启动子，核心酶沿模板DNA链移动并使新生RNA链不断伸长的过程。（P77）

8 转录终止：当RNA链延伸到转录终止位点时，RNA聚合酶不再形成新的磷酸二酯键，RNA-DNA杂合物分离，转录泡瓦解，DNA恢复成双链状态，而RNA聚合酶和RNA链都被从模板上释放出来。(p78)

9：转录：拷贝出一条与DNA链序列完全相同的RNA单链的过程，是基因表达的核心步骤。P72 10：翻译：以新生的mRNA为模板，把核苷酸三联遗传密码子翻译成氨基酸序列、合成多肽链的过程。P72

11、DNA聚合酶：是一种天然产生的能催化DNA（包括RNA）的合成和修复的生物大分子。p53 12、错配修复：DNA在复制的过程中发生错配，能识别新合成链中错配并加以校正的系统。p58 三、简答题

1、 试比较原核和真核细胞的mRNA的异同。P93

（1）真核生物mRNA的5’端存在帽子结构，绝大多数真核细胞生物mRNA还具有多（A）尾巴，原核一般没有；（2）原核的mRNA可以编码几个多肽，真核只能编码一个；（3）原核生物以AUG作为起始密码，有时以GUG、UUG作为起始密码，真核几乎永远以AUG作为起始密码。（4）原核生物mRNA半衰期短，真核长。（5）原核生物以多顺反子的形式存在，真核以单顺反子的形式存在。

2、简述增强子的特点p89

（1）远距离效应，一般位于上游-200bp处，但可增强远处启动子的转录，即使相距十多个千碱基对也能发挥作用。

（2）无方向性，无论位于靶基因的上游、下游或内部都可发挥增强转录的作用。 （3）顺式调节，只调节位于同一染色体上的靶基因，而对其他染色体上的基因没有作用。 （4）无物种和基因的特异性，可以连接到异源基因上发挥作用。

（5）具有组织特异性，SV40的增强子在3T3细胞中比多瘤病毒的增强子要弱，但在HeLa细胞中SV40的增强子比多瘤病毒的要强5倍。增强子的效应需特定的蛋白质因子参与。 （6）有相位性，其作用和DNA的构象有关。

（7）有点增强子可以对外部信号产生反应，如热休克基因在高温下才表达，某些增强子可以被固

醇类激素所激活。

3、简述RNA的功能。如题6

4、简述原核生物和真核生物mRNA的区别。 答：书本P93如题1

5、真核生物基因组的结构特点主要有哪些？P33

（1）真核基因组庞大，一般都远大于原核生物的基因组； （2）真核基因组存在大量的重复序列；

（3）真核基因组的大部分为非编码序列，占整个基因组序列的90%以上，该特点是真核生物与细菌和病毒之间最主要的区别；

（4）真核基因组的转录产物为单顺反子； （5）真核基因是断裂基因，有内含子结构；

（6）真核基因组存在大量的顺式作用元件，包括启动子、增强子、沉默子等； （7）真核基因组中存在大量的DNA多态性； （8）真核基因组具有端粒结构。

6、RNA作为功能分子有哪些重要作用？ P74 （1）作为细胞内蛋白质生物合成的主要参与者； （2）部分RNA可以作为核酶在细胞中催化一些重要的反应，主要作用于初始转录产物的剪接加工； （3）参与基因表达的调控，与生物的生长发育密切相关； （4）在某些病毒中，RNA是遗传物质。

7、.RNA的结构有哪些特点。P73

1.RNA含有核糖和嘧啶，通常是单链线性分子； 2.RNA链自身折叠形成局部双螺旋； 3.RNA可折叠形成复杂的三级结构。

8、.简述σ因子的作用。P82

答：σ因子的作用是负责模板链的选择和转录的起始，它是酶的别构效应物，使酶专一性识别模板链上的启动子。σ因子极大地提高RNA聚合酶对启动子区DNA序列的亲和力，还降低它对非专一位点的亲和力。

9：原核生物mRNA的特征。 p93 1，原核生物mRNA的半衰期短。

2，许多原核生物的mRNA可能以多顺反子的形式存在。

3，原核生物mRNA的5’端无帽子结构，3’端没有或只有较短的多(A)结构。

10：真核生物mRNA的特征。 p96

1,真核生物mRNA的5’端存在帽子结构。 2，绝大多数真核生物mRNA具有多(A)尾巴。

11、什么是编码链？什么是模板链？

答：与mRNA序列相同的那条DNA链称为编码链；另一条根据碱基互补配对元则指导mRNA合成的DNA链称为模板链。

12、试述PCR扩增的原理和步骤p177

答：原理：首先将双链DNA分子在临近沸点的温度下加热分离成两条单链DNA为模板并利用反应混合物中的四种脱氧核苷三磷酸合成新生的DNA互补链。

步骤：变性：双链模板DNA分子在高温下解开成长单链；退火：引物与模板DNA相结合；链的延伸：新生链从引物退火结合位点开始并朝相反方向延伸。

四、论述题

1、大肠杆菌的终止子有哪两大类？请分别介绍一下它们的结构特点。P78

（1）不依赖ρ因子的终止子：①终止位点上游一般存在一个富含GC碱基的二重对称区， 由其转录的RNA容易形成发卡结构，导致RNA聚合酶的暂停，破坏DNA-RNA杂合 链的结构。②在终止位点前还有一段4~8个A组成的序列，对应转录产物的3’端为寡聚U（poly U），该结构特征导致了转录的终止。③转录终止不依赖ρ因子。

（2） 依赖ρ因子的终止子：①转录的RNA也有发卡结构，但其后无poly（U）。②形成 的发卡结构较疏松，结构不稳定。③转录终止需要ρ因子的参与。④与不依赖ρ因 子的终止相同的是，终止信号存在于新生RNA链，而非DNA链。

2、大肠杆菌的终止子有哪两类？请分别介绍它们的结构特点？ 答：书本P78-79 如题1

3、试论述原核生物与真核生物转录产物的比较。P93

答：（1）只有一种RNA聚合酶参与所有类型的原核生物基因转录，而真核生物有3种以上的RNA聚合酶来负责不同类型的基因转录，合成不同类型的、在细胞核内有不同定位的RNA。

（2）转录产物有差别。原核生物的初级转录产物大多数是编码序列，与蛋白质的氨基酸序列呈线性关系；而真核生物的初级转录产物很大，含有内含子序列，成熟的mRNA只占初级转录产物的一小部分。

（3）原核生物的初级转录产物几乎不需要剪接加工，就可直接作为成熟的mRNA进一步行使翻译模板的功能；真核生物转录产物需要经过剪接、修饰等转录后加工成熟过程才能成为成熟的mRNA。 （4）在原核生物细胞中，转录和翻译不仅发生在同一个细胞空间里，而且这两个过程几乎是同步进行的，蛋白质合成往往在mRNA刚开始转录时就被引发了。真核生物mRNA的合成和蛋白质的合成则发生在不同的空间和时间范畴内。

4、.真核与原核生物基因转录有哪些差异？（p93-p100） 答：如简答题9、10。

5、RNA的种类和其生物学作用？p74 种类：mRNA、tRNA、rRNA 生物学作用

作为信息分子：RNA担负着贮藏及转移遗传信息的功能，起着遗传信息由DNA到蛋白质的中间传递体的核心作用。

作为功能分子：1、作为细胞内蛋白质生物合成的主要参与者

2、部分RNA可以作为核酶在细胞中催化一些重要的反应，主要作用于初始转录产物的剪接加工 3、参与基因表达的调控，与生物的生长发育密切相关 4、在某些病毒中，RNA是遗传物质

6、核酶具有哪些结构特点？根据其催化功能不同可分为那两大类？其生物学意义是什么？p110 答：结构特点：具有自我剪接能力的RNA大多数都能形成锤头结构，该二级结构由3个茎构成，茎区是由互补碱基构成的局部双链结构，包围着一个由11~13个保守核苷酸构成的催化中心。 根据其催化功能不同可分为 剪切型核酶、剪接型核酶。 生物学意义：核酶的发现是我们对RNA的重要功能又有了新的认识，为基因治疗提供了新的策略，为生命起源的研究提供新的思路。

第四章

一、填空题

1.翻译从（起始密码AUG）开始，沿着mRNA(5’-3’)的方向连续阅读密码子，直至（终止密码）为止。P116

2.一个密码子由（ 3 ）个核苷酸组成，（ 4 ）核苷酸可组成（ 64 ）个密码子。P120 3.终止密码子为（UAA）、（UAG）、（UGA）。 P120 4.作为基因产物的蛋白质是受（ 基因 ）控制的。 P116

5.mRNA中有（ 4 ）种核苷酸，而蛋白质中有（ 20 ）种氨基酸。 P117

6．tRNA为相应氨基酸转运到核糖体提供了 运送载体 ，所以它又被称为第二遗传密码。P123

7．tRNA的种类有起始tRNA， 延伸tRNA ，同工tRNA和校正tRNA；P127

8．核糖体小亚基负责 对模板mRNA进行序列特异性识别 ，大亚基负责 携带氨基酸及tRNA的功能 P134

9．翻译过程的肽链延长，也称为核糖体循环。每次核糖体循环又分为三个步骤： 进位 、成肽 和 转位 。（P139~142）

10、核糖体是由几十种蛋白质和几种核糖体RNA组成的的 亚细胞颗粒P128 11、蛋白质的生物合成是以（ 氨基酸 ）作为原料，在（ 核糖体 ）中进行的生物过程。 （P135 第一段 氨基酸的活化）

12、蛋白质的生物合成包括（ 氨基酸活化 ）、肽链的起始，伸长，终止、以及（ 新合成多肽链的折叠与加工 ）。P134 第五段 蛋白质合成的生物学机制

13、（ tRNA ）与（ 相应氨基酸 ）的结合是蛋白质合成中的关键步骤。（P136 第一段） 14、（ 抗生素 ）是蛋白质生物合成的主要抑制剂。（P148 第三段 蛋白质合成的抑制剂） 15、肽链的终止密码有（ UAA ）、（ UAG ）、（UGA ）（P143 第三段 肽链的终止） 16若某个蛋白质的合成和运转是同时发生的，则属于翻译运转同步机制。（P150 4.5） 17若蛋白自从和糖体上释放后才发生运转，则属于翻译后运转机制。（P150 4.5）

18、停靠蛋白即DP是在内质网膜上的受体蛋白，它能够与结合有信号序列的SRP牢牢地结合，使它在合成蛋白质的核糖体停靠到内质网上来。（P153 4.5.1）

19、拥有前导肽的线粒体蛋白质前体能够跨膜运转进入线粒体，在这一过程中前导肽被水解，前体转变为成熟蛋白，失去继续跨膜能力。（P155 4.5.2）

20、叶绿体定位信号肽一般有两个部分，第一部分决定该蛋白质能否进入叶绿体基质，第二部分决定该蛋白能否进入类囊体。（P155 4.5.2）

21.泛素化修饰涉及（泛素激活酶E1）、（泛素结合酶E2）、（泛素连接酶E3）等3个酶的级联反应。（P159 4.6.1）

22.蛋白质的（SUMO化修饰）能够阻止泛素化引起的蛋白质降解。（P161 4.6.2图4-41解释） 23.NEDDylation可能参与（细胞增殖分化）、（细胞发育）、（细胞周期）、（信号转导）等重要生命过程的调控。（P162 4.6.3）

24.NEDD8参与NEDDylantion过程的关键位点是（赖氨酸残基）。（P163 4.6.3） 25.在真核生物中，蛋白质的降解主要依赖与（泛素）。（P159 4.6.1）

二、名词解释

1、密码子：mRNA上毎3个核苷酸翻译成蛋白质多肽链上的一个氨基酸，这3个核苷酸就称为密码，也叫三联子密码即密码子。 P116

2、简并：由一种以上密码子编码同一个氨基酸的现象称为简并。P121

3、同工tRNA：由于一种氨基酸可能有多个密码子，因此有多个tRNA来识别这些密码子，即多个tRNA代表一种氨基酸，我们将几个代表相同氨基酸的tRNA称为同工tRNA。P127

4、无义突变：在蛋白质的结构基因中，一个核苷酸的改变可能使代表某个氨基酸的密码子变成终止密码子，使蛋白质合成提前终止，合成无功能的或无意义的多肽，这种突变成为无义突变。P127 4.2.4.3

5、糖基化：是真核细胞蛋白质的特征之一，大多数糖基化是由内质网中的糖基化酶催化进行的。所有的分泌蛋白和膜蛋白几乎都是糖基化蛋白质。 P145 第四段 糖基化

6、热休克蛋白：一类应激反应性蛋白，包括HSP70、HSP40、GrpE三个家族，广泛存在于原核细胞以及真核细胞中。三者协同作用，促使某些能自发折叠的蛋白质正确折叠形成天然空间构象。 P147 最后一段 热休克蛋白

7信号肽：绝大多数越膜蛋白的N端都具有长度大约在13-36个残基之间的以疏水氨基酸为主的N端信号序列称为信号肽。（P151 4.5.1） 8、信号识别颗粒（SRP）：是一种核糖核酸蛋白复合体，它的作用是识别信号序列，并将核糖体引导到内质网上。（P153 4.5.1）

9、泛素化：泛素分子在泛素激活酶、结合酶、连接酶等的作用下，对靶蛋白就进行特异性修饰的过程。（P159 4.6.1）

10、SUMO化修饰：把SUMO转移到底物的赖氨酸残基上，稳定靶蛋白使其免受降解的过程。（P161 4.6.2） 三、简答题

1、遗传密码具有哪些性质？ P119-P123

答：连续性、简并性、通用性、特殊性、密码子与反密码子相互作用。 2、蛋白质如何产生？P111 蛋白质生物合成的主要过程？ P116 答：1.蛋白质由基因控制合成。

2.主要合成过程;翻译起始：核糖体与mRNA结合并与氨基酰-tRNA生成起始复合物；肽链延伸：由于核糖体沿mRNA 5‘端向 3‘端移动，开始了从N端向C端的多肽合成，这就是蛋白质合成过程中速度最快的阶段；肽链的终止及释放：核糖体从mRNA上解离，准备新一轮合成反应。 3、简述真核细胞中翻译终止的过程。参考P143 肽链的终止

答：由于氨酰 tRNA 上没有反密码子能够与三个终止密码子互补配对，因此翻译终止。终止并需要tRNA 的协助，此时没有氨基酸能够连接到位于 P 位点的肽酰 tRNA 上。释放因子（eRF）有助于终止的发生，可能使 tRNA 上的氨基酸 C 端不需要转肽基和脱酰基而发生转位。新生肽直接从 P 位点离开核糖体并进入细胞质（细胞质核糖体）或进入转位酶通道（内质网核糖体）。 4、区别 tRNA 和 mRNA 在翻译中的作用。P116

答：mRNA 是氨基酸装配成多肽的模板。tRNA 一方面是识别特异氨基酸的接头分子，另一方面又可以识别特异的 mRNA 密码子。

5、蛋白质前体的加工主要内容 P144 蛋白质前体的加工

①N端fMet或Met的切除：N端的甲硫氨酸往往在多肽合成完毕之前被切除

②二硫键的形成：蛋白质的二硫键是蛋白质合成后，通过两个半胱氨酸的氧化作用生成的，密码子中没有胱氨酸的密码子。

③特定氨基酸的修饰：氨基酸侧链的修饰包括磷酸化、糖基化、甲基化、已基化、羟基化和羧基

化等。

④切除新生肽链中的非功能片段：不少肽类激素和酶的前体都要经过加工才能变成活性分子

6、蛋白质合成的过程 P134-P135 ①氨基酸的活化 ②翻译的起始 ③肽链的延伸 ④肽链的终止

⑤肽链的折叠和加工

7、信号肽的结构特点是什么？（P151 4.5.1） 1.一般带有10-15个疏水氨基酸。

2.常常在靠近该序列N-端疏水氨基酸区上游带有1个或数个带正电荷的氨基酸。 3.在其C-末端靠近蛋白酶切割位点处常常带有数个极性氨基酸，离切割位点最近的那个氨基酸往往带有很短的侧链(Ala或Gly)。

8.前导肽一般具有什么特性？（P155 4.5.2）

1.带正电荷的碱性氨基酸（特别是精氨酸）含量较为丰富，它们分散于不带电荷的氨基酸序列之间；

2.缺少带负电荷的酸性氨基酸；

3.羟基氨基酸（特别是丝氨酸）含量较高；

4.有形成两亲（既有亲水又有疏水部分）α-螺旋结构的能力。

9、.泛素化修饰的作用？（P160 4.6.1） 1.降解蛋白质，

2.参与多种生物功能的调控，在蛋白质的定位、代谢、和降解中都起着重要作用，

3.能参与细胞周期、增殖、凋亡、分化、转移、基因表达、转录调节、信号传递、损伤修复、炎症免疫等几乎一切生命活动调控。

10、.SUMO化修饰的作用？P161-P162 4.6.2）

答：影响蛋白质亚细胞定位，广泛参与细胞内蛋白质与蛋白质相互作用、DNA结合、信号转导、核质转运、转录因子激活等重要过程。

四、论述题

1、遗传密码有哪些特性？并回答各特点对生物具有哪些意义。 P119-P123 答：连续性、简并性、通用性、特殊性、密码子与反密码子相互作用。

意义：连续性：密码子间无间断也无重复，即起始密码子决定了所有随后密码子的位置； 简并性：减少变异对生物的影响； 通用性：有助于我们研究生物的进化； 特殊性：表明物种之间的特异性；

密码子与反密码子的相互作用：摇摆假说，解释了反密码子中某些稀有成分的配对以及许多氨基酸有2个以上密码子的问题。

2、真核与原核核糖体的主要区别是什么？参考P128-P134

答：真核细胞的大小亚基（即 40S 和 60S）均比原核细胞的（原核细胞为 30S 和50S）大。在

两种细胞的核糖体中，原核生物核糖体约由2/3的RNA及1/3的蛋白质组成，真核生物核糖体中RNA占3/5，蛋白质占2/5，rRNA 占了绝大部分体积，原核细胞的 RNA 含量则比真核细胞高。原核细胞核糖体有 E 位点便于脱酰 tRNA 的离开。

3、试述蛋白质是如何合成、加工并运输到目的地行使具体功能的？P134-P164 答：蛋白质合成的过程：

1.DNA转录形成信使RNA(mRNA),mRNA单链同时与多个核糖体结合，合成许多条肽链，肽链盘曲折叠形成复杂空间结构，初步合成了蛋白质。

2.接下来，进入内质网腔后，还要经过一些加工，如折叠、组装、加上一些糖基团等，才能成为比较成熟的蛋白质，

3.然后，由内质网腔膨大、出芽形成具膜的小泡，包裹着蛋白质转移到高尔基体，把蛋白质输送到高尔基体腔内，做进一步的加工。

4.接着，高尔基体边缘突起形成小泡，把蛋白质包裹在小泡里，运输到细胞膜，小泡与细胞膜融合，把蛋白质释放到细胞外。

4、线粒体蛋白质的跨膜运转过程有什么特征？（P154 4.5.2）

答：通过线粒体膜的蛋白质是在合成以后再运转的。这个过程有如下特征：

①通过线粒体膜的蛋白质在运转之前大多数以前体形式存在，它由成熟蛋白质和N端延伸出的一段前导肽共同组成。

②蛋白质通过线粒体内膜的运转是一种需能过程；

③蛋白质通过线粒体膜运转时，首先由外膜上的Tom受体复合蛋白识别与Hsp70或MSF等分子伴侣相结合的待运转多肽，通过Tom和Tim组成的膜通道进入线粒体内腔。

5、 蛋白质一级结构对蛋白质稳定性的影响？（P163 4.6.4）

答：成熟蛋白N端的第一个氨基酸在蛋白质的降解中有着举足轻重的作用。当某个蛋白质N端是甲硫氨酸、甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸和缬氨酸时，表现稳定。N段是赖氨酸、精氨酸时，表现不稳定，平均2-3min被降解。泛素调控的蛋白质降解有重要的生理意义，不仅能够清除错误蛋白质，对细胞生长周期、DNA复制以及染色体结构有重要调控作用。

第五章

一、填空题：

1. 细菌转化常用的方法有CaCl2法 和 电击法 。P175 2. 在一定的 电场强度 下，DNA分子的电泳的迁移率取决于 核酸分子本身的大小 和 构型 P173 3. 电泳的速率与 电场强度 和 电泳分子本身所携带的净电荷数 成正比。P173

4. 凝胶浓度的高低影响凝胶介质孔隙的大小，浓度 越高 ，孔隙 越小 ，其分辨能力就 越强 。P173

5. CoLE1质粒载体是松弛型复制控制的 多拷贝质粒 。P168 6. PCR反应的原始材料是（模板DNA）出处：课本177页

7. DNA聚合酶是一种天然产生的能催化DNA的_合成__和_修复_的生物大分子。177页

8. 基因组中的某些区域中，CpG序列密度可达均值的5倍以上，成为鸟嘌呤和胞嘧啶的富集区，形成所谓的(CpG岛）出处：课本181页

9. DNA甲基化的主要形式有__5-甲基胞嘧啶_、_6-甲基腺嘌呤_和__7-甲基鸟嘌呤_181页 10. 由于PCR技术具有极高的敏感性，扩增产物总量的变异系数常常达到（10%-30%）178页

11. 细胞中总RNA包括（mRNA）（rRNA）（tRNA）（sRNA）P185 12. 基因文库必须具有一定的（代表性）和（随机性）P183

13. 目前实验室常用的总RNA的抽屉方法是（异硫氰酸胍-苯酚抽提法）P185

14. 构建基因组文库最常用的的方法是（λ噬菌体载体）和（限制性内切核酸酶）部分消化法。P184

15. RNA的浓度和纯度可以通过测定其（OD260）和（OD280）来判断。P185

16. 基因文库筛选的主要筛选方法包括（核酸杂交法）、（PCR筛选法）和（免疫筛选法）。(p189) 17. 可以用核酸杂交筛选法进行（重组噬菌斑）的筛选。（P189）

18. 基因文库的筛选是指通过某种特殊方法从（基因文库）中鉴定出含有所需重组DNA分子的特定克隆的过程。（P189）

19. 含有cDNA插入片段的重组噬菌粒只有经过体外蛋白外壳包装反应，才能成为有（侵染）和（复制）能力的成熟噬菌体。（P188）

20. 在cDNA合成的过程中，应选用活性较高的（反转录酶）及（甲基化dCTP），cDNA两端应加上不同内切酶所识别的接头序列，保证所获得双链cDNA的方向性。（P187）

21. RACE是一项在 已知 cDNA序列 的基础上克隆 5’ 端或 3’ 端缺失序列的技术。P191

22. cDNA序列可来自序列 表达标签 、 减法cDNA文库 、差式显示 和 基因文库的筛选 。 P191

23. Gateway 克隆技术主要包括 TOPO反应 和 LR反应 两步。 P193 24. 基因的图位克隆法是分离 未知性状目的基因 的一种好方法。 P193

25. Gateway基因大规模克隆法利用 λ噬菌体 进行位点特异性DNA片段重组。P193 26. 蛋白质组学是_蛋白质__和__基因组__研究在形式和内容两方面的组合。 P196

27. 分离大量混合蛋白质组分的最有效方法是__双向电泳技术__，该方法依赖于蛋白质的两个重要特性，即__等电点__和____相对分子质量__。P197 28. 现行的质谱仪可分为三个连续的组成部分，即是__离子源__、_离子分离区__和_检测器。P198 29. 在DIGE技术中，____内标___是所以实验样本的混合物。 P198

30. 双向凝胶的最大分辨率已经达到每块胶____10000___个蛋白点。 P197

名词解释：

1. 细菌转化：指一种细菌菌株由于捕获了来自供体菌株的DNA而导致性状特征发生遗传改变的过程。P175

2. 感受态细胞：指经过适当处理后容易接受外来DNA进入的细胞。P175

3. DNA甲基化：指生物体在DNA甲基转移酶的催化下，以S-腺苷甲硫氨酸为甲基供体将甲基转移到特定的碱基上的过程。出自课本181页

4. 同源测序：指实验中所挑取的克隆来源于同一个原始DNA模板分子，形成了完全相同的没有代表性的甲基化模式。课本182页

5. 基因组文库：基因组中所有DNA序列克隆的总汇被称为基因组文库。P183 6. mRNA的纯化：指将mRNA从总的RNA中分离，得到高纯度的mRNA。P186

7. 核酸杂交法：核酸杂交法以其广泛的适用性和快速性成为基因文库筛选中最常用的的方法之一，是用放射性标记的特异DNA探针进行高密度的菌落杂交筛选。（P189） 8. 基因文库：是指某一生物类型的全部基因的集合。P189

9. 克隆：在细胞水平上，克隆是指由同一个祖细胞分裂而来的一群带有完全相同遗传物质的子细胞；在分子生物学上，人们把外源DNA插入具有复制能力的载体DNA中，使之得以永久保存和复制的这种过称为克隆。P190

10. RACE技术：是一项在 已知 cDNA序列 的基础上克隆 5’端或 3’端缺失序列的技术P191 11. 内标 ：在DIGE技术中所有实验样本的混合物。P198

12. 双向电泳 ：是分离大量混合蛋白组分的最有效方法，该方法依赖于蛋白质的两个重要特性，等电点和相对分子质量。P197

简答题：

1. pUC质粒载体由哪几部分组成？P168

答：由四部分组成：来自pBR322质粒的复制起点（ori）、氨苄青霉素抗性基因（amp）、大肠杆菌β-半乳糖酶基因（lacZ）启动子、编码α-肽的DNA序列（lacZ’基因）。

2. 在凝胶电泳中使用溴化乙锭的原因。P174 答：将DNA分子凝胶浸泡在含溴化乙锭的溶液中，此种燃料会在一切可能的部位与DNA分子结合，然而却不能与琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶相结合，因此只有DNA分子能吸收溴化乙锭并发出荧光，可灵敏而快捷地检测出凝胶介质中DNA的谱带部位。

3. 简述重亚硫酸盐测序的主要过程。（课本182页）

答：将待测DNA样品用限制性内切核酸酶处理，重亚硫酸盐处理使DNA中未发生甲基化的胞嘧啶发生脱氨基作用转变成尿嘧啶，而被甲基化的胞嘧啶由于甲基的保护而不受影响，PCR扩增后该尿嘧啶被测序仪读取为胸腺嘧啶。

4. 在动物细胞中，DNA的甲基化状态有三种，分别是？（出自课本181页） 答：1.持续低甲基化状态；2.去甲基化状态；3.高度甲基化状。

5. 简述在基因组文库中通常提高文库代表性的两种策略。P183

答：1.用机械切割法或限制性内切核酸酶切割法随机断裂DNA，以保证克隆的随机性；2.增加文库重组克隆的数目，以提高覆盖基因组的倍数。

6. 简述RNA基本操作技术。P185

答：1.总RNA的提取；2.mRNA的纯化；3.cDNA的合成；4.cDNA文库的构建；5.基因文库的筛选。

7. 在cDNA合成过程中加入的甲基化dCTP的作用是什么？（P187）

答：反应体系中一般加入甲基化dCTP，保证新合成的cDNA链被甲基化修饰，以防止构建克隆时被限制性内切核酸酶切割。

8.如何提高用杂交筛选法进行重组噬菌斑的筛选的结果的可靠性？（P189）

答：将硝酸纤维素膜覆盖在琼脂平板表面，使之与噬菌斑直接接触，噬菌斑中大量没有被包装的游离DNA及噬菌体颗粒便一起转移到膜上。可从同一噬菌斑平板上连续印几张同样的硝酸纤维素膜，进行重复实验，而且可以使用两种或数种不同的探针筛选同一套重组子，提高结果的可靠性。

9.说说cDNA差异分析法的原理？P192

答：发挥了PCR以指数形式扩增双链DNA模板，而仅以线性形式扩增单链模板的特性，通过降低cDNA群体负责性和更换cDNA两端接头等方式，特异性扩增目的基因片段。

10.cDNA末端快速扩增法的主要操作步骤？P191

答：1.获得高质量总RNA：含有大量完整mRNA、tRNA、rRNA和部分不完整mRNA； 2.去磷酸化作用：带帽子结构的mRNA不受影响；

3.去掉mRNA的5‘帽子结构，加特异性RNA寡聚接头并用RNA连接酶连接；

4.以特异性寡dT为引物，在反转录酶的作用下，反转录合成第一条cDNA链，包含了寡接头的互补序列；

5.分别以第一链cDNA为模板进行RACE反应；

6.将纯化的PCR产物克隆到载体DNA中，进行序列分析。

r

11.简述双向电泳技术的原理。 P197

答：该方法依赖于蛋白质的两个重要特性：等电点和相对分子质量，蛋白质在SDS凝胶电场中的运动速率和距离完全取决于其相对分子质量而不受其所带电荷的影响，不同相对分子质量的蛋白质将位于凝胶的不同区段而得到分离。

12.简述蛋白质质谱分析技术的步骤和原理。 P198

答：原理：是通过电离源将蛋白质分子转化为离子，然后利用质谱分析仪的电场、磁场将具有特定质量与电荷比值（M/Z）的蛋白质离子分离开来，经过离子检测器收集分离的离子，确定离子的M/Z值，分析鉴定未知蛋白。通常结合相应的处理及其他技术，能够比较准确、快速地鉴定蛋白质。

步骤：将感兴趣的蛋白点回收后，进行胰蛋白酶胶内酶解，收集酶解肽段。一级质谱将蛋白酶降解后的肽段按照质荷比以及强度进行分析，形成肽指纹图谱（PMF）；二级质谱是挑选一级质谱中有代表性的母离子峰以诱导碰撞解离方式打碎，形成肽段碎片指纹图谱（PFF）；然后一级PMF和二级PFF数据，进行数据库搜索，获取蛋白质的具体鉴定信息。

论述题：

1. 简述细菌转化的两种常用方法。P175 答：CaCl2法：在0℃冷冻处理时，处于CaCl 2低渗溶液中的大肠杆菌细胞膨胀成球形。DNA可吸附于其表面。在短暂的热冲击下，细胞吸收外源DNA ，然后在丰富培养基内复原并增殖，表达外源基因。

电击法：使用低盐缓冲液或水洗制备的感受态细胞，通过高压脉冲的作用将载体DNA分子导入受体细胞。

2. 叙述PCR技术的原理。出自课本177页）

答：原理：首先将双链DNA分子在临近沸点的温度下加热分离成两条单链DNA为模板并利用反应混合物中的四种脱氧核苷三磷酸合成新生的DNA互补链。

步骤：变性：双链模板DNA分子在高温下解开成长单链；退火：引物与模板DNA相结合；链的延伸：新生链从引物退火结合位点开始并朝相反方向延伸。

3. cDNA合成时的方向性是如何实现的？P187

答：在cDNA合成过程中，应选用活性较高的反转录酶及甲基化dCTP，cDNA两端应加上不同内切酶所识别的接头序列，保证所获得cDNA的方向性。常用RNase H切割mRNA-cDNA杂合链中的mRNA序列所产生的小片段为引物合成第二条cDNA片段，在通过DNA连接酶的作用连成完整的DNA链，测试加入含有另一个酶切位点的黏性接头，与cDNA相接后用Xho I酶切，是cDNA双链5’端和3‘端分别具有EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ黏端，办证它与载体相连时有方向性。

4. 说说cDNA的合成流程？（P187）

答：cDNA的合成包括第一链和第二链cDNA的合成。第一链cDNA的合成是以mRNA为模板，反转录为cDNA，有反转录酶催化，该酶合成DNA时需要引物引导，常用引物是oligo（ dT）。第二链合成是以第一链为模板，由DNA聚合酶催化。

5. 基因克隆的方法主要有哪几种？简述各种方法的作用及用途。 P191-P193

答： 1、RACE技术，用于在已知cDNA序列的基础上克隆5’端和3’端缺失的序列。

2、应用cDNA差示分析法克隆基因，在没有任何探针的情况下，通过降低cDNA群体复杂性和更换cDAN两端接头的方法特异性的扩增目的基因片段。

3、Gateway大规模克技术，用于实现不需要传统的酶切连接过程的基因快速克隆和载体间平行转移，为大规模克隆基因组注视的可译框架提供保障。

4、基因的图位克隆法，用于分离未知形状目的基因。

6. 试述热不对称交错多聚酶连锁反应(TAIL-PCR)的主要技术和原理。P195

答：原理：是根据已知 DNA 序列，分别设计三条同向且退火温度较高的特异性引物(SP Primer)，与经过独特设计的退火温度较低的兼并引物，进行热不对称 PCR 反应。通常情况下，其中至少有一种兼并引物可以与特异性引物之间利用退火温度的差异进行热不对称 PCR 反应，一般通过三次巢式 PCR 反应即可获取已知序列的侧翼序列。如果一次实验获取的长度不能满足实验要求时，还可以根据第一次步移获取的序列信息，继续进行侧翼序列获取。

步骤：第一轮反应是TAIL-PCR的重要环节，先进行5个高严谨性循环，特异性引物TR1与模板退火，只能发生单引物循环，T-DNA上游侧翼序列得到线性扩增；再大幅度降低退火温度，使AD及TR1均与模板DNA相结合，指数扩增一个循环；此后，两个高严谨、一个低严谨循环交替进行，共15个循环。

第六章

一、填空

1、一般将选择性剪接分为平衡剪接、5’选择性剪接、3’选择性剪接、外显子遗漏型剪接及相互排斥型剪接。（P207）

2、转录组研究的基本方法包括基因芯片技术和转录组测序技术。（P204） 3、原位杂交通常分为RNA原位杂交和染色体原位杂交。（P209）

4、随着科技的发展，科学家主要采用重叠延伸技术和大引物诱变法两种PCR方法。（P210） 5、高通量测序技术可以几十万甚至几百万条序列，主要有454测序平台和Solexa测序平台。（P205）

6、基因敲除分为完全基因敲除、条件型基因敲除两种。 （212）

7、真核生物基因敲除的技术路线主要包括构建重组基因载体、用电穿孔、显微注射等方法把重组DNA导入胚胎干细胞纯系中。 (214)

8、胚胎干细胞分离和体外培养的成功奠定了哺乳动物基因敲除的技术基础。(214)

9、T-DNA无专一整合位点，在植物基因组中发生随机整合，所以只要突变株数目足够大，从理论上就可获得任何一个功能基因都发生突变的基因敲除植物库。 (218)

10、因为同源重组常常发生在某一条染色体上，要想得到稳定遗传的纯合体基因敲除模型，至少需要两代以上的遗传。 (217)

11、酵母杂交系统包括酵母单杂交系统，酵母双杂交系统。P219

12、蛋白质相互作用技术可分为等离子表面共振技术、免疫共沉淀技术和GST及GAD融合蛋白沉降技术。P222

13、蛋白质相互作用技术中常用到的三种探针包括荧光蛋白、传统有机染料、镧系染料。P224 14.小分子干扰核苷酸，即siRNA是导致基因沉默和序列特异性RNA降解的重要中间媒介。P227 15、酵母双杂交系统主要利用真核生物DNA结合结构域、转录激活结构域的转录调控因子的组件式结构特征。P220

16、用基因芯片进行研究一般包括五个步骤：生物学问题的提出，样品制备，生化反应，检测和数据模型分析。(229)

17、制备简易基因芯片时，使用机械臂把DNA片段点在玻璃片或尼龙膜上，在经过物理吸附作用烘烤或化学处理使DNA分别固定在载体上。(229)

18、基因芯片数据分析包括两部分：数据的可靠性分析和生物学意义分析。(229) 19、简易芯片上的基因数量少，主要用于研究小部分特定的基因表达状态。(229)

20、大规模基因芯片通常涉及基因组规模与数量一般大于10000个基因，可采用接触式点样，非接触式点样或半导体技术制备样品。(229)

21、酵母中转化DNA的整合重组主要通过 同源重组 方式进行，整合效率高。P231

22、二倍体酵母细胞在低氮，无发酵性碳源的条件下能通过减数分裂形成单倍体孢子。p232 23、酵母细胞的三种交配型 MATa 、 MATα 、 MATa/α（p232倒数第三段第一句）

24、将外源基因克隆与酵母表达载体上，转化野生型或突变酵母菌株，通过观察酵母的表型变化或细胞中化学成分的变化即可推测该基因的生物学功能。（p233最后一段第一句）

25、酵母菌单倍体细胞按沿轴线的方向出芽；二倍体细胞按极性方向出芽。（p232第二段最后两句）

26、噬菌体可被分为溶菌周期 和溶源周期 两种不同的类型。（p235）

27、研究细胞定位可采用多种方法，常用的是荧光蛋白标记和免疫荧光法。（p242） 28、凝胶滞缓实验是分离纯化特定DNA结合蛋白的经典实验方法。（p234）

29、在蛋白质磷酸化分析技术中，通常蛋白激酶可以促使底物蛋白发生磷酸化，而蛋白质磷酸酯酶则能催化底物蛋白发生去磷酸化。（p237）

30、绿色荧光蛋白（GFP）有两个吸收峰，最大吸收峰在395nm，另一个在475nm，前者由紫外光激发，后者由蓝光激发。（p242）

二、名词解释

1、转录组（P204）：广义上指在某一特定生理条件或环境下，一个细胞、组织或者生物体中所有RNA的总和；狭义上是指细胞中转录出来的所有mRNA的总和。

2、RNA选择性剪接（P207）：是指用不同的剪接方法从一个mRNA前体产生不同的mRNA剪接异构体的过程。

3、基因敲除 （212）：又称基因打靶，该技术通过外源DNA染色体DNA之间的同源重组，进行精确的定位修饰和基因改造，具有专一性强、染色体DNA与目的片段共同稳定遗传等特点。 4、T-DNA插入失活技术 （218）：利用根瘤农杆菌T-DNA介导转化，将一段带有报告基因的DNA序列标签整合到基因组DNA上，如果这端DNA插入到目的基因内部或附近，就会影响该基因的表达，从而使该基因?失活?。

5、RNA干扰技术（P227）：利用双链小RNA高效、特异性降解细胞内同源mRNA从而阻断靶基因表达，是细胞出现靶基因缺失的表型。

6、siRNA（ P227）：是导致基因沉默和序列特异性RNA降解的重要中间媒介。

7、基因芯片 （228）：是一种小型分析装置，能够快速和精确地研究生物体、组织、器官或细胞内基因组的遗传信息。

8、管家基因 （230）：是维持细胞正常生长发育的必需基因，其表达水平在细胞内基本不变。 9、酿酒酵母（p231 第二段第一句）：有稳定的单倍体和二倍体细胞，是最早完成基因组DNA序列测定的真核生物。

10、MATa/α（p232倒数第三段）：MATa 、 MATα这两种酵母细胞交配型相互交配形成。 11、温和噬菌体 （236）：基因组能与宿主菌基因组整合，并随细菌分裂传至子代细菌的基因组中，不引起细菌裂解的噬菌体。

12、烈性噬菌体 （235）：噬菌体吸附到寄主细胞表面之后，注入DNA，噬菌体的DNA进行复制及蛋白质的合成，并组装成噬菌体颗粒，最后使寄主细胞裂解，释放出大量子代噬菌体颗粒的噬菌体称为烈性噬菌体。/ 实验室将只具有溶菌生长周期的噬菌体称为烈性噬菌体。

三、简答题

1、什么是原位杂交？（P209）

答：是标记的核酸探针，经放射自显影或非放射检测体系，在组织、细胞、间期核及染色体上对核酸进行定位和相对定量研究的一种手段，通常分为RNA原位杂交和染色体原位杂交。

2、荧光原位技术的特点？（P209）

答：荧光原位杂交技术不需要放射性同位素，实验周期短，检测灵敏度高，若经过不同修饰的核酸分子标记不同的DNA探针，还可能在同一张切片上观察几种DNA探针定位，得到相应位置和排列顺序的综合信息。

3、neo基因的双重作用是什么？(212)

答：一方面形成靶位点的插入特变，同时可作为正向筛选标记。 4、基因敲除可用于哪些方面？(212) 在胚胎细胞中进行同源重组，对基因敲除生物个体的表型分析，鉴定或推测该基因的生物学功能。 5、简述染色质免疫共沉淀技术的原理和基本过程。P225

答：原理：染色质免疫共沉淀技术是一项新发展的研究活体细胞内染色质DNA与蛋白质相互作用的技术。

基本过程：在活细胞状态下固定蛋白质-DNA复合物，并通过超声波或酶处理将其随机切断为一定长度的染色质小片段，然后通过抗原抗体的特异性识别反应，沉淀该复合体，从而富集与目的蛋白结合的DNA片段，通过对目的片段的纯化及PCR检测，获得该蛋白质与DNA相互作用的信息，包括具体的DNA序列特征、位置、结合时间、亲和程度以及对基因表达的影响等。

6、简述酵母单系统的基本原理与应用P219

答：基本原理：首先将已知的特定顺式作用元件构建到最基本启动子（Pmin）的上游，把报告基因连接到Pmin下游；然后将编码待测转录因子cDNA与已知酵母转录激活结构域融合表达载体导入酵母细胞，该基因产物如果能与顺式作用元件相结合，就能激活Pmin启动子，是报告基因得到表达。

应用：确定某个DNA分子与某个蛋白质之间是否存在相互作用，用于分离编码结合与特定顺式调控元件或其他DNA位点的功能蛋白编码基因，验证反式转录调控因子的DNA结合结构域，准确定位蛋白质参与特定蛋白质结合的核苷酸序列。

7、请简述大规模基因芯片的主要工作流程？(229)

答：1.经大规模PCR扩增获得独立cDNA片段；2.用机械臂将PCR产物点在合适的介质，变形、固定；3.分别从不同器官、组织或细胞中分离mRNA，反转录生成cDNA；4.用不同的荧光染料标记不同的cDNA样本；5.将标记后的cDNA与点好的芯片进行杂交；6.激光扫描芯片杂交结果，计算机处理；7.分析杂交数据。

8由于多种因素影响杂交双链的形成和稳定性，在用基因芯片进行杂交分析时，每次的实验结果都会有变化。对此，应如何确保数据的准确和保证数据的可靠性？(230)

答：为了保证基因芯片数据的可靠性，芯片中还需要加上多个管家基因作为内对照。数据处理时，认为管家基因的反应信号在两种组织中保持不变，依此确定其他基因表达信号的相对变化。

9、简述酵母单倍体和二倍体细胞的差异。(p232第二段）

答：1.二倍体细胞的直径大约是单倍体的1.3倍；2.二倍体细胞呈长形或卵圆形，而单倍体通常接近圆形；3.两者出芽方式不同，单倍体细胞按沿轴线的方向出芽；二倍体细胞按极性方向出芽。

10、如何简单确定酵母的营养状态？（p232第一段）

答：当培养基营养耗尽时，酵母细胞会停止生长而停滞在特定生长发育阶段，所以可通过观察显微镜下酵母细胞的出芽频率确定酵母的营养状态。

11、免疫印迹程序有哪五个步骤?(239)

答：1.蛋白质的制备；2.SDS-PAGE电泳分离样品；3.将已经分离的蛋白转移到尼龙或其他膜上，转移后首先将膜上未反应的位点封闭起来以抑制抗体的非特异性吸附；4.用固定在膜上的蛋白质作为抗原，与对应的非标记抗体（一抗）结合；5.洗去未结合的一抗，加入酶偶联或放射性同位素标记的二抗，通过显色或放射自显影法检测凝胶中的蛋白成分。

12、免疫印迹法的基本原理是什么？(239)

答：被测蛋白只能与标记的特异性抗体结合，而这种结合不改变该蛋白在凝胶电泳中的相对分子质量。

四、论述题

1、EST测序技术和SAGE测序技术的优劣点？（P204）

答：EST测序数据是目前数量最多、涉及物种最广的转录组数据，但测序读长较短，测序通量小，测序成本较高，而且无法通过测序同时得到基因表达丰读的信息。

SAGE测序标签序列较短，可将多个标签串联测序，是SAGE法相对于EST测序在通量上大大提高，但过短的序列标签降低了序列的唯一性，即使改进过的LongSAGE标签测序，仍然有一半的标签无法被准确注释到基因组上。

2、除基因敲除法外，还有什么方法可破坏靶细胞表达，具体谈谈。(212-218)

答：其他方法就是沉默，从mRNA层面去解决。或者使用一些抑制剂，一直转录因子等等，最终影响表达。

3、RNAi技术原理以及在分子生物学领域运用的前景。P227

答：原理：利用双链小RNA高效、特异性降解细胞内同源mRNA从而阻断靶基因表达，使细胞出现靶基因缺失的表型。

前景：可应用于基因功能研究药物靶点筛选，细胞信号通路分析、基因药物研发等领域。

4、论述基因芯片的点制过程。参考：P229

答：简易基因芯片：使用机械臂把DNA片段点在玻璃片或尼龙膜上，在经过物理吸附作用烘烤或化学处理使DNA分别固定在载体上；将芯片与待研究的cDNA或其他样品杂交，经过计算机扫描和数据处理，便可观察到大规模的基因群在不同组织或同一组织不同发育时期或不同生理条件下的表达调控情况。 大规模基因芯片：1.经大规模PCR扩增获得独立cDNA片段；2.用机械臂将PCR产物点在合适的介质，变形、固定；3.分别从不同器官、组织或细胞中分离mRNA，反转录生成cDNA；4.用不同的荧光染料标记不同的cDNA样本；5.将标记后的cDNA与点好的芯片进行杂交；6.激光扫描芯片杂交结果，计算机处理；7.分析杂交数据。

5、证明植入了外源基因的酵母细胞基因编码了有功能的ω-6脂肪酸脱饱和酶。（233-234） 答：野生型酵母细胞中18碳不饱和脂肪酸主要是C18:1，这些细胞不能产生含有两个或多个双键不饱和脂肪酸，若将棉花中可能编码ω-6脂肪酸脱氢酶的基因转入野生型酵母细胞中，诱导该基因的表达，然后用气相色谱和质谱技术分析细胞的脂肪酸组成，在带有棉花基因的酵母细胞中可能出现C18:2不饱和脂肪酸，证明该基因编码了ω-6脂肪酸脱饱和酶。

6、说出凝胶滞缓实验的原理及应用。(P234)

答：原理：蛋白质与DNA结合将大大增加相对分子质量，而凝胶电泳中DNA朝正电极移动的距离与其相对分子质量的对数成正比，因此没有与蛋白质结合的DNA跑得快，而与蛋白质形成复合物的DNA由于受到阻滞而跑得慢。

应用：分离纯化特定DNA结合蛋白质、用于研究与蛋白质结合的DNA序列的特异性、评估突变对探针DNA与结合蛋白相互作用的影响，进而确定该探针DNA分子中与蛋白质直接发生相互作用的关键性碱基。

第七章

填空

1.参与大肠杆菌抗终止作用的蛋白是Nus蛋白。p284

2.原核生物的翻译要靠核糖体30S亚基识别mRNA上的起始密码子，以此决定它的可读框。p285 3.一个典型的细菌mRNA半衰期为2~3min。p287 4.mRNA被降解的可能性取决于它的二级结构p287

5.在乳糖操纵子中，阻遏蛋白结合的是操纵基因。（253-259）

6.在色氨酸操纵子的调控中发挥作用的元件是弱化子。（261-266）

7.基因表达主要表现在转录水平上的调控、转录后水平上的调控。（247）

8.根据调控机制的不同，原核基因表达调控可分类为负转录调控、正转录调控。（248） 9.原核生物通过特殊代谢物调节基因活性主要分为：可诱导调节 、可阻遏调节 。（250） 10.已经发现的能够固氮的生物是 原核细菌、放线菌、蓝藻。（278）

11.固氮酶催化的固氮反应时一个氧化还原反应，每还原一个氮气分子，需要传递8个电子。 （278）

名词解释

1.弱化作用P264：mRNA转录的终止是通过前导肽基因的翻译来调节的。

2.豆血红蛋白P281：根瘤细胞中植物基因组编码的最主要的蛋白质，其血红素辅基可能是由细菌编码的。

3.组蛋白类似蛋白P283:细菌中存在一些非特异性的DNA结合蛋白，用来维持DNA的高级结构。 4.转录调控因子p283：能够与基因的启动子区相结合，对基因的转录起激活或抑制作用的DNA结合蛋白。

5.核糖开关p286：是一段具有复杂结构的RNA序列。在原核生物中通常位于mRNA的5‘UTR区域。 6.基因表达调控：对DNA能有序地将其所承载的遗传信息，通过密码子-反密码子系统，转变成蛋白质分子，执行各种生理生化功能，完成生命的全过程进行调节，称为基因表达调控。P247 7.弱化子：当操纵子被阻遏，RNA合成被终止时，起终止转录信号作用的那一段核苷酸被称为弱化子。P251

简述题

1.抗终止因子是如何调节转录继续进行的？p284

答：抗终止因子在RNA聚合酶到达终止子之前与RNA聚合酶相结合，因为终止子上游存在抗终止作用的信号序列，只有与抗终止因子相结合的RNA聚合酶才能顺利通过具有茎-环结构的终止子，使转录继续进行。

2.简述核糖开关的作用机制？ p286

答：核糖开关能感受细胞内诸如代谢物浓度、离子浓度、温度等的变化而改变自身的二级结构和调控功能，从而改变基因的表达状态。核糖开关可能通过影响转录的起始、延伸和终止，或者通过控制核糖体与mRNA的结合，或者通过调节mRNA的稳定性来调控基因表达。

3.简述乳糖操纵子的作用机制 P256\\P260P265

答：1.lacZ、lacY、lacA基因的产物由同一条多顺反子的mRNA分子所编码； 2.该mRNA分子的启动区位于阻遏基因与操纵区之间，不能单独起始半乳糖苷酶和透过酶基因的高效表达；

3.操纵区是DNA上的一小段序列，是阻遏物的结合位点；

4.当阻遏物与操纵区相结合时，lac mRNA的转录起始受到抑制；

5.诱导物通过与阻遏物极核，改变它的三维构象，使之不能与操纵区相结合，从而激发lac mRNA的合成。

4.葡萄糖是如何影响涉及糖代谢的操纵子(葡萄糖敏感型操纵子)的表达? P258

答：葡萄糖对lac操纵子表达的抑制是间接的，如：一个大肠杆菌突变体在糖酵解途径中不能将6-磷酸葡萄糖转化为下一步代谢中间物，这些细菌的lac基因能在葡萄糖存在时被诱导合成。 5.细菌为什么会产生葡萄糖效应？（P252、7.1.4）

答：因为添加葡萄糖后，细菌所需要的能量便能从葡萄糖中得到满足，葡萄糖是最方便的能源，细菌无需开启一些不常用的基因去利用这些稀有的糖类。

6.在酶诱导的调控lac体系中，如何证实诱导物的作用是诱导新酶合成？（P254、7.2.1） 答：利用同位素示踪实验证明：把大肠杆菌放在加油放射性

35

S标记的氨基酸但没有二核半乳糖

35

苷诱导物的培养基中繁衍几代，然后再将这些带有放射活性的细菌转移到不含S、无放射性的培养基中，随着培养基中诱导物的加入，β-半乳糖苷酶便开始合成，分离纯化β-半乳糖苷酶，发现这种酶无

35

S标记，说明没得合成不是由前体转化而来的，而是加入诱导物后新合成的。

7.与固氮有关的基因及其表达调控 课本279到280

答：固氮基因调控体系是一个级联调控体系。NifA和σ54：共同激活固氮酶基因的转录。

8.在转录水平上的其他调控方式 课本282到283

答：σ因子调控作用、组蛋白类似蛋白的调节作用、转录调控因子的作用、抗终止因子的调节作用。

论述题

1论述细胞中铁离子浓度变化时，基因是如何进行调节的？p289(反义mRNA的调节作用)

答：细胞中铁离子过多时，Fur蛋白作为抑制因子起作用，关掉与铁摄取有关的众多操纵子，包括anti-bfr基因的表达，使bfr基因能正常翻译出细菌铁蛋白，存储过剩的铁离子。在铁离子浓度低时，anti-bfr基因转录产生大量反义RNA，与bfr的mRNA配对，阻止细菌铁蛋白基因的翻译。

2. 用含中性碳源(例如甘油)的液体基本培养基培养E.coli不能诱导lacZ操纵子.一小时后在培养基中加入乳糖和再隔一段时间加入过量的葡萄糖分别会对lac操纵子的表达有什么影响?（256）答：

3在出现氨基酸饥饿时，细菌是如何进行应急反应的？（P252、7.1.5）

答：细菌便会存在大量的不带氨基酸的tRNA，这种空载的tRNA会激活焦磷酸转移酶，是ppGpp大量合成，其浓度可增加10倍以上。

4诉述一下固氮反应的过程 （课本的278页倒数第二段）

第八章

名词解释

1、增强子：是指能使与它连锁的基因转录频率明显增加的DNA序列。（305）

2、反式作用因子：是指能够结合在顺式作用元件上调控基因表达的蛋白质或者RNA。（303）

3、基因扩增: 是指某些基因的拷贝数专一性大量增加的现象,它使细胞短期内生产大量的基因产物以满足生长发育的需要，是基因活性调控的一种方式。（P317）

4、组蛋白：是保守的DNA结合蛋白，是染色体的结构蛋白，与DNA共同组成真核生物染色体的基本单位核小体。（P323） 5、基因沉默：是指真核生物中由双链RNA 诱导的识别和清除细胞中非正常RNA的一种机制。（P331） 6、RNA干扰：是指由双链RNA诱发的、同源mRNA 高效特异性降解的技术。（P332）

7、A激酶 ：依赖于cAMP的蛋白质激酶，它能把ATP分子上的末端磷酸基团加到某个特定蛋白质的丝氨酸和苏氨酸的残基上。（p342）

8、应答元件：现代分子生物学上把某个专一蛋白因子结合，从而控制基因特异表达的DNA上游序列。（p350）

填空题

1、组蛋白是组成 核小体 的基本组成单位。（P323） 2、核心组蛋白朝向外部的 N端 部分称为尾巴。（P324）

3、在真核生物中，发生在转录之前的，染色质水平上的结构调整 ，称之为基因表达的表观遗传调控。（P315)

4、酵母有两种交配型，MATa 和MATα ，相当于高等真核生物中的雌性和雄性。（P318） 5、顺式作用元件是指那些与结构基因表达调控相关、能够被＿特异性识别和结合的特异 DNA 序列，包括基因调控蛋白、启动子、上游启动子元件、增强子、加尾信号和一些反应元件。（303） 6、基因经过转录、翻译，产生具体特异生物功能的蛋白质分子或者RNA分子的过程称为基因表达。（P294）

7、真核生物基因调控可分为两大类，第一类是瞬时调控（可逆性调控），第二类是发育调控（不可逆调控）。（p301）

8、基因沉默分为 转录水平基因沉默 和 转录后基因沉默 。（P331）

9、siRNA 的产生过程主要包括 经Dicer 切割形成双链小片段 、 组装复合物 和 形成有活性的沉默复合物（P333）

10、rRNA加工有两个内容，一是 分子内的切割 ，二是 化学修饰 。 书p353 11、细胞通过 p53 和 p21 蛋白 控制CDK的活性，调控细胞分裂的进程。书p344

12、p53参与多种信号通路，如细胞周期调控，DNA损伤修复，血管的生成和抑制和细胞凋亡等的调控。（P345）

13、许多转录因子都可以通过cAMP介导的蛋白质磷酸化过程而被激活，因为这类基因的5’端启动区大都拥cAMP应答元件。其基本序列为TGACGTCA。（342）

14、DAG结合后还能解除调节区所造成的 抑制作用 ，提高 酶活性 。（343）

简答题

1、简述真核生物转录后水平的调控机制。（302）

答：（1）5，端加帽和3，端端聚腺苷酸化的调控意义：5，端加帽和3，端端聚腺苷酸化是保持mRNA稳定的一个重要因素，它至少保证mRNA在转录过程中不被降解。（2）mRNA选择性剪接对基因表达调控的作用。(3)mRNA运输的控制。

2、简述真核生物转录水平的调控机制？ （302） 答：真核生物在转录水平的调控主要是通过反式作用因子、顺式作用元件和 RNA 聚合酶的 相互作用来完成的，主要是反式作用因子结合顺式作用元件后影响转录起始复合物的形成过 程。A、转录起始复合物的形成：真核生物 RNA 聚合酶识别的是由通用转录因子与 DNA 形成的蛋白质-DNA 复合物，只有当一个或多个转录因子结合到 DNA 上，形成有功能的启动子，才能被 RNA 聚合酶所识别并结合。转录起始复合物的形成过程为：TFⅡD 结合 TATA 盒； RNA 聚合酶识别并结合 TFⅡD-DNA 复合物形成一个闭合的复合物；其他转录因子与 RNA 聚合酶结合形成一个开放复合物。在这个过程中，反式作用因子的作用是：促进或抑制 TFⅡD 与 TATA 盒结合；促进或

抑制 RNA 聚合酶与 TFⅡD-DNA 复合物的结合；促进或抑制 转录起始复合物的形成。B、反式作用因子：一般具有三个功能域（DNA 识别结合域、转录 活性域和结合其他蛋白结合域）；能识别并结合上游调控区中的顺式作用元件；对基因的 达有正性或负性调控作用。3、转录起始的调控：⑴反式作用因子的活性调节：A. 达式调 节——反式作用因子合成出来就具有活性；B.共价修饰——磷酸化和去磷酸化，糖基化；C. 配体结合——许多激素受体是反式作用因子；D.蛋白质与蛋白质相互作用——蛋白质与蛋白 质复合物的解离与形成。⑵反式作用因子与顺式作用元件的结合：反式作用因子被激活后， 即可识别并结合上游启动子元件和增强子中的保守性序列，对基因转录起调节作用。⑶反式 作用因子的作用方式——成环、扭曲、滑动、Oozing。⑷反式作用因子的组合式调控作用： 每一种反式作用因子结合顺式作用元件后虽然可以发挥促进或抑制作用，但反式作用因子对 基因调控不是由单一因子完成的而是几种因子组合发挥特定的作用。

3、基因表达的方式（P300）

1. 根据对刺激的反应模式，可分为组成性表达和选择性表达两大类。

2. 某些基因在个体的所有细胞中持续表达，这些基因即为管家基因，其表达模式又被称为组成性基因表达。

3. 在特定的环境信号刺激下，相应的基因被激活，基因表达产物增加，这种基因称为可诱导基因。而如果基因被环境所被抑制，这种基因就是可阻遏基因。

4、基因家族中的成员有哪些？（P298）

1. 简单多基因家族，基因一般都是以串联的方式前后相连的。

2. 复杂多基因家族，一般由几个相关基因家族构成，基因家族之间由间隔序列隔开，并作为独立的转录单位。

3. 发育调控的复杂多基因家族，有特定的基因组成。

5、真核生物基因上表达的调控的特点（301）

真核生物主要由多细胞组成，每一个真核细胞所携带的基因数量及总基因组中的蕴藏的遗传信息量都大大高于原核生物。

真核生物基因组DNA中有许多重复序列,基因内部还常插入不翻译成蛋白质的序列,都影响了真核基因的表达.

真核生物的DNA还常与蛋白质结合,形成十分复杂的染色质结构.

染色质构象的变化、染色质中蛋白质的变化及染色质对DNA酶敏感程度的变化等都会对基因表达产生重要的影响.

6、简述真核生物转录元件组成及其分类 （P317）

答：启动子，转录模版，RAN聚合酶Ⅱ基础转录所需的蛋白质因子（TFⅡ），RNA聚合酶Ⅱ，增强子，反式作用因子。

7、简述HAT的类型（324）

答：HAT可以分为两类，一类是与转录有关，另一类与核小体组装以及染色质的结构有关。

8、组蛋白乙酰化和去乙酰化影响基因转录的机制（P323-324）

答：组蛋白乙酰转移酶和去乙酰化酶通过是组蛋白乙酰化和去乙酰化对基因表达产生影响。组蛋白N端尾部上赖氨酸残基的乙酰化中和了尾部的正电荷，降低了它与组蛋白的亲和性，导致核小体构象发生有利于转录调节蛋白与染色质结合的变化，从而提高了基因转录的活性。核心组蛋白H2A,H2B,H3,H4通过组蛋白尾部选择性乙酰化影响核小体的浓缩水平和可接近性。由于乙酰化的组蛋白抑制了核小体的浓缩，使转录因子更容易与基因组的这一部分相接触，有利于提高基因的转

录活性。

9、简述siRNA的生物学意义（P336）

1.在转录水平、转录后水平参与基因的表达调控。 2.维持基因组的稳定。

3.保护基因组免受外援核酸侵入。

10、简述miRNA 的功能（P340）

1.miRNA装载成RISC后使互补配对的mRNA 降解

2.miRNA可抑制mRNA的翻译，降低靶基因的蛋白水平，并且不影响其mRNA的水平性。

11、受体分子活化细胞功能的途径有哪些？（341） 1.受体本身或受体结合蛋白具有内源酪氨酸激酶活性，胞内信号通过酪氨酸激酶途径的得到传递。 2.配体与细胞表面受体结合，通过G蛋白介导的效应系统产生介质，活化丝氨酸，苏氨酸或酪氨酸激酶，从而传递信号。

12、细胞应答可以分为哪几个阶段？（341）

1.外界信息的?感知?，即由细胞膜到细胞核内的信息传递。 2.染色质水平上的基因活性调控。 3.特定基因的表达。

论述题

1、何为外显子和内含子及其结构特点和可变调控 （301—305）

答：大多数真核基因都是由蛋白质编码序列和非蛋白质编码序列组成的，编码序列称为外显子（exon），非编码序列称为内含子（intron）。结构特点：一个结构基因中编码某一蛋白质不同区域的各个外显子并不连续排列在一起，而是常常被长度不等的内含子所隔离，形成镶嵌排列的断裂方式。可变调控：不少真核基因的原始转录产物可通过不同剪接方式，产生不同的mRNA，并翻译成不同的蛋白质。另外，一些核基因由于转录是选择了不同的启动子或者在转录产物上选择了不同的PolyA位点而使转录产物产生不同的二级结构，因而影响剪接过程，最终产生不同的mRNA分子。

2、请论述基因沉默的作用机理（331-345）

基因沉默需要经历不同的反应过程才能实现，包括组蛋白N端结构域的赖氨酸残基的去乙酰基化加工、甲基化修饰（由甲基转移酶催化，修饰可以是一价、二价和三价甲基化修饰，后者又被称为'过度’甲基化修饰（Hypermethylation) ) 、以及和甲基化修饰的组蛋白结合的蛋白质（MBP）形成?异染色质?，在上述过程中，除了部分组蛋白的N端尾部结构域需要去乙酰化、甲基化修饰之外，有时也许要在其他的组蛋白N端尾部结构域的赖氨酸或精氨酸残基上相应地进行乙酰化修饰，尽管各种修饰的最终结果会导致相应区段的基因?沉寂?失去转录活。

3、激素对基因表达的影响（347）

许多类固醇激素的调控作用是通过起始基因转录而实现的。所有靶细胞具有专一的细胞质受体，可与激素形成复合物，导致三维结构甚至化学性质的变化。经修饰的受体与激素复合物通过核膜进入细胞核内，并与染色质的特定区域相结合，导致基因转录的起始或关闭。