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副溶血性弧菌保藏条件研究

作者：杨胜远 韦锦 李卓文等

来源：《湖北农业科学》2014年第18期

摘要：针对副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）在低温条件下容易进入不可培养状态，难以保藏的问题，通过平板菌落计数法对副溶血性弧菌的4 ℃冰箱保藏条件进行了探讨。结果表明，NaCl对副溶血性弧菌4 ℃保藏有保护作用，其中以45 g/L NaCl保护效果最佳，而且45 g/L NaCl不影响副溶血性弧菌的生长。将副溶血性弧菌细胞浸于45 g/L NaCl溶液或以含45 g/L NaCl的培养基培养后直接于4 ℃保藏，保藏90 d，活细胞数仅由109下降到106。 关键词：副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）；甘油；培养基；NaCl 中图分类号：TS207.4 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2014）18-4395-04

副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）是一种嗜盐性细菌，广泛存在于世界各国的沿海地区，隶属于弧菌科弧菌属，是食源性疾病的重要病原菌，副溶血性弧菌引起的食物中毒已高居微生物食物中毒的首位[1，2]。为了控制副溶血性弧菌引起的食源性疾病，国内外学者已对副溶血性弧菌的检测、预测模型及风险评估、群体感应、防控方法、致病机理等领域研究给予了极大关注[3–11]。然而，由于副溶血性弧菌在低温条件下很容易进入不可培养状态[12，13]，采用常规的斜面或半固体培养基在4 ℃冰箱保藏的时间很短，通常4 ℃保藏15～30 d已无法通过国家标准GB/T 4789.7–2013的3%氯化钠碱性蛋白胨水培养基[14]或TCBS琼脂培养基活化。一些研究或检验机构为了保藏副溶血性弧菌标准菌株，常采用室温保藏或-80 ℃冷冻保藏。

虽然室温保藏成本低，但是需要经常转接活化，不断传代容易发生菌种变异，难以满足菌种保藏“在一定时间内使菌种不死、不变、不乱”的基本要求；副溶血性弧菌是病原菌，需要执行双人双锁管理，频繁的转接菌种和培养操作，增加了菌种保藏和安全防护的工作量。-80 ℃冷冻保藏可以抑制副溶血性弧菌的代谢，菌种不易发生变异，但是超低温冰箱价格贵，能耗高，普通实验室无法满足保藏条件，而且菌种使用前需解冻，使用不便，反复冻融操作还会导致菌种死亡。普通冰箱价格相对便宜，一般实验室均具备，因此如能解决副溶血性弧菌在低温条件下易进入不可培养状态的问题，实现4 ℃冰箱保藏将对相关的研究和检验工作具有极大的推动作用。本研究旨在对副溶血性弧菌的4 ℃冰箱保藏条件进行研究，探寻一种方便的副溶血性弧菌短期保藏方法。 1 材料与方法 1.1 材料

菌株：副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）CP1由广东海洋大学孙力军教授惠赠。