所以n=
log81log[S][S]0.90.1=
1.91log10?1.91
B.根据其Hill系数?1，此酶属于具有正协同效应的别构酶。 7．（1）3.1×10mol （2）5×10mol （3）622秒 8．80％，1500倍 9．根据米一曼氏方程?=?7
Vmax[S]Km－5
－8
－1
?[S]得知，
?7
当Km值(10为10
?2
mol?L)远小于[S](10
?3
?1
mol?L)时，Km值可略去不计，因此，此时的初速度实际上就是Vmax=10
mol?min。在[S]
mol?L和10
?7?8
mol?L，与Km比较，也可相对地忽略，则?=Vmax。[S]=10mol?L时，代入上式得?=Vmax?2=5?10mol?min。
第5章 核酸化学单元自测题
(一) 名词解释
1．核酸， 2．核酸一级结构，3．DNA二级结构，4．碱基互补规律，5．稀有碱基、稀有核苷酸，6．环化核苷酸，7．多磷酸核苷酸，8．增色效应，9．减色效应，10．发卡结构
11．分子杂交，12．Tm值，13. 回文序列，14. 同裂酶，15. 限制性物理图谱
（二）填空题
1．核酸可分为 和 两大类，其中 主要存在于 中，而 主要存在于 。
2．核酸完全水解生成的产物有 、 和 ， 其中糖基有 ，碱基有 和 两大类。 3．生物体内的嘌呤碱主要有二种， 和 ，嘧啶碱主要有 、
和 ，某些RNA分子中还含有微量的其它碱基，称为 。
4．DNA和RNA分子在物质组成上有所不同，主要表现在 和 的不同，DNA分子中存在的是 和 ，
RNA分子中存在的是 和 。
5．RNA的基本组成单位是 、 、 、 ，DNA的基本组成单位是 、 、 、 ，它
们通过 键相互连接形成多核苷酸链。
6．DNA的二级结构是 结构，其中碱基组成的共同特点是(若按摩尔数计算) 、 、 。 7．测知某一DNA样品中，A＝0.53mol，C＝0.25mol、那么T＝ mol，G＝ mol。
8．嘌呤环上的第 位氮原子与戊糖的第 位碳原子相连形成 键，通过这种键相连而成的化合物叫 。 9．嘧啶环上的第 位氮原子与戊糖的第 位碳原子相连形成 键，通过这种键相连而成的化合物叫 。 10. 有两个主要的环核苷酸是 、 ，它们的主要生理功用是 。 11．写出下列核苷酸符号的中文名称：ATP 、dCDP 。 12. DNA的Tm值的大小与其分子中所含的 的种类、数量及比例有关，也与分子的 、有关。若含的A—T配对较
多其值则 、含的G—C配对较多其值则 ，分子越长其Tm值也越 。 13．组成核酸的元素有 、 、 、 、 等，其中 的含量比较稳定，约占核酸总量的 ，
可通过测定 的含量来计算样品中核酸的含量。 14．DNA双螺旋结构的维系力主要有 和 。
15. DNA分子中G，C含量高分子较稳定，同时比重也较 、解链温度也 。 16．RNA主要有三类，既 、 和 、它们的生物功能分别是 、
和 。 17．RNA的二级结构大多数是以单股 的形式存在，但也可局部盘曲形成 结构，典型的tRNA二级结构是 型
结构。
18．在生物细胞中主要有三种RNA，其中含量最多的是 、种类最多的是 、含有稀有碱基最多的是 。 19. tRNA三叶草型结构中，氨基酸臂的功能是 ，反密码环的功能是 。
20. tRNA氨基酸臂3’末端中最后三个碱基是 ，反密码环中有三个相连的单核苷酸组成 。 21. 成熟的mRNA在5’末端加上了 构成帽的结构，在3’末端加上了 形成尾巴。
22．Ⅱ类限制性内切核酸酶分子量较小．一般在20～40KDa，通常由 亚基所组成。它们的作用底物为双链DNA，极少数Ⅱ类酶也可作用于单链DNA，或DNA／RNA杂合双链。这类酶的专一性强，它不仅对酶切点邻近的两个碱基有严格要求，而且对更远的碱基也有要求，因此，Ⅱ类酶既具有 专一性，也具有 专一性，一般在识别序列内切割。切割的方式有 ，产生 或 的DNA片段。作用时需要 作辅助因子，但不需要 和 。
23. 完全的回文序列具有两个基本的特点，就是：(1) (2) 。 24．SDS是分离DNA时常用的一种阴离子除垢剂，它有四个作用： (1) ； (2) ；
25
(3) ； (4) 。
25．酚是蛋白变性剂，用酚抽提细胞DNA时，具有两方面的作用：(1) ;
(2) 。
26．用酚—氯仿抽提DNA时，通常要在氯仿或酚—氯仿中加少许异戊醇。这是因为异戊醇 。
另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。 27．同其他水解蛋白酶相比，蛋白水解酶K具有两个显著的优点：
(1) ;(2) 。
28．在分离DNA时要使用金属离子螯合剂，如EDTA和柠檬酸钠等，其目的是 。
29．用乙醇沉淀DNA时，通常要在DNA溶液中加入单价的阳离子，如NaCl和NaAc，其目的是 。 30．浓缩DNA的方法有：(1) ;(2) ;(3) ; (4) 。 31. 通常可在三种温度下保存DNA：4～5℃、-20℃、-70℃，其中以 最好。 32．在用SDS分离DNA时，要注意SDS的浓度，0.1％和1％的SDS的作用效果是不同的，前者 ，后者 。 33．在DNA分离过程中造成DNA分子断裂的因素很多，主要有(1) ；(2) ；
(3) 。
34．在分离DNA时，常用 法、 法、 法及 法等方法去除蛋白质。 35．在DNA保存液中，常加一滴氯仿，主要是起 作用。
36．在简并引物的设计中，常常要用到dI(次黄嘌呤)，原因是 。 37．在分离DNA时，要戴手套操作，原因是 。
38．简并引物PCR主要是根据蛋白质的氨基酸序列设计 引物来合成相应的基因。 39．SSC是由NaCI和柠檬酸钠组成的试剂，其中NaCl的作用是使 ，而柠檬酸钠的作用是 。 40．在重蒸酚中加入0．1％的8—羟基喹啉及少量β—巯基乙醇，不仅可以防止酚的氧化，还可以 的活性及 作用。
（三）选择题
1．在核酸中一般不含有的元素是：
A 碳 B 氢 C 氧 D 硫 2．腺嘌呤(A)与鸟嘌呤(G)在结构上的差别是：
A A的C6上有羟基，G的C6上有氨基B A的C6上有氨基，G的C2上有氨基 C A的C6上有甲基，G的C6上有羰基 D A的C6上有氨基，G的C2上有羰基 3．胸腺嘧啶(T)与尿密啶(U)在结构上的差别是：
A T的C2上有氨基，U的C2上有氧B T的C5上有甲基，U的C5上无甲基 C T的C4上有氧，U的C4上有氧D T的C2上有氧，U的C2上有氧 4．通常即不见于DNA又不见于RNA的碱基是：
A 腺嘌呤 B 黄嘌呤 C 鸟嘌呤 D 胸腺嘧啶 5．下列哪种碱基只存在于mRNA而不存在于DNA中?
A 腺嘌呤 B 尿嘧啶 C 鸟嘌呤 D 胞嘧啶 6．DNA与RNA完全水解后，其产物的特点是：
A 戊糖不同、碱基部分不同 B 戊糖不同、碱基完全相同 C 戊糖相同、碱基完全相同 D 戊糖相同、碱基部分不同 7．在核酸分子中核苷酸之间的连接方式是：
A 3′，3′，-磷酸二酯键 B 糖苷键 C 3′,5′-磷酸二酯键 D 肽键 8．核酸的紫外吸收是由哪一结构所产生的?
A 嘌呤和嘧啶之间的氢键 B 碱基和戊糖之间的糖苷键 C 戊糖和磷酸之间的酯键 D 嘌呤和嘧啶环上的共轭双键 9．含有稀有碱基比例较多的核酸是：
A mRNA B DNA C tRNA D rRNA 10．核酸分子中储存、传递遗传信息的关键部分是：
A 核苷 B 戊糖 C 磷酸 D 碱基序列 11．假尿苷的糖苷键是：
A C—C B C—N C N—N D C—H
12. 在核苷酸分子中戊糖(R)、碱基(N)和磷酸(P)的连接关系是：
A N—R—P B N—P—R C P—N—R D R—N—P 13．DNA的二级结构是指：
A α—螺旋 B β—片层 C β—转角 D 双螺旋结构 14．下列关于核苷酸生理功能的叙述，错误的是：
A 作为生物界最主要的直接供能物质B 作为辅酶的组成成分 C 作为质膜的基本结构成分D 作为生理调节物质 15．ATP的生理功能不包括：
26
A 为生物反应供能 B 合成RNA C 贮存化学能 D 合成DNA
16．关于DNA双螺旋结构学说的叙述，哪一项是错误的?
A 由两条反向平行的DNA链组成B 碱基具有严格的配对关系
C 戊糖和磷酸组成的骨架在外侧D 生物细胞中所有DNA--级结构都是右手螺旋 17．下列哪种核酸的二级结构具有“三叶草”型?
A mRNA B 质粒DNA C tRNA D 线粒体DNA 18． 下列复合物中除哪个外，均是核酸与蛋白质组成的复合物
A 核糖体 B 病毒
C 端粒酶 D 核酶(ribozyme) 19．真核细胞染色质的基本结构单位是：
A 组蛋白 B 核心颗粒 C 核小体 D 超螺旋管 20．不参与核小体核心颗粒的蛋白质是：
A H1 B H2A C H2B D H3 21．核酸的一级结构实质上就是：
A 多核苷酸链中的碱基排列顺序B 多核苷酸链中的碱基配对关系 C 多核苷酸链中的碱基比例关系D 多核苷酸链的盘绕、折叠方式 22．DNA变性是指：
A 多核苷酸链解聚
B DNA分子由超螺旋变为双螺旋 C 分子中磷酸二酯键断裂 D 碱基间氢键断裂 23. 双链DNA热变性后
A 黏度下降 B 沉降系数下降 C 浮力密度下降 D 紫外吸收下降
24. DNA Tm值较高是由于下列哪组核苷酸含量较高所致?
A G+A B C+G C A+T D C+T 25. 核酸变性后可发生下列哪种变化?
A 减色效应 B 增色效应
C 紫外吸收能力丧失 D 溶液粘度增加
26．在下列进行DNA部分酶切的条件中，控制那一项最好? A 反应时间 B 酶量
C 反应体积 D 酶反应的温度
27．对DNA片段作物理图谱分析，需要用
A 核酸外切酶 B 限制性内切酶 C DNA连接酶 D DNA聚合酶I 28．从细胞或组织中分离DNA时，常用蔗糖溶液，目的是： A 抑制核酸酶的活性B 保护DNA，防止断裂 C 加速蛋白质变性 D 有利于细胞破碎 29．关于cDNA的最正确的说法是：
A 同mRNA互补的单链DNA B 同mRNA互补的双链DNA C 以mRNA为模板合成的双链DNA D 以上都正确 30． RNA经NaOH水解，其产物是
A 5'-核苷酸 B 2'-核苷酸
C 3'-核苷酸 D 2'-核苷酸和3'-核苷酸的混合物
31．用碱法分离质粒DNA时，染色体DNA之所以可以被除去，是因为： A 染色体DNA断成了碎片 B 染色体DNA分子量大，而不能释放 C 染色体变性后来不及复性 D 染色体未同蛋白质分开而沉淀
32．Clark做了一个有趣的实验，发现Taq DNA聚合酶可以不需要模板，在双链DNA的末端加一个碱基，主要是加 A dGTP B dATP C dCTP D dTTP
33．在简并引物的3′端尽量使用具有简并密码的氨基酸，这是因为 A Taq酶具有一定的不精确性 B 便于排除错误碱基的掺人 C 易于退火 D 易于重组连接 34．Southern印迹的DNA探针杂交。
A 只与完全相同的片段 B 可与任何含有相同序列的DNA片段
C 可与任何含有互补序列的DNA片段 D 可与用某些限制性内切核酸酶切成的DNA片段 35．下列哪一个不是Southern印迹法的步骤?
A 用限制酶消化DNA B DNA与载体的连接
C 用凝胶电泳分离DNA片段 D DNA片段转移至硝酸纤维素膜上
27
(四)是非题
1. 核苷中碱基和戊糖的连接一般为C-C糖苷键。
2．在DNA变性过程中总是G-C对丰富区先熔解分开。
3．RNA的局部螺旋区中，两条链之间的方向也是反向平行的。
4．不同来源DNA单链，在一定条件下能进行分子杂交是由于它们有共同的碱基组成。 5．核酸变性时紫外吸收值明显增加。
6．Tm值高的DNA，(A+T)百分含量也高。
7．用二苯胺法测定DNA，必须用同源的DNA作为标准样。 8．双链DNA中，嘌呤碱基含量总是等于嘧啶碱基含量。 9．真核细胞中DNA只存在于细胞核中。
10．在体内存在的DNA都是以Watson—Crick提出的双螺旋结构形式存在的。 11．在一个生物个体不同组织中的DNA，其碱基组成不同。 12．原核细胞DNA是环状的，真核细胞中的DNA全是线状的。
13．某物质的水解产物对260nm的紫外光有强吸收，地衣酚及二苯胺试验阴性，可以断定此物质为非核酸物质。 14．真核mRNA分子5'末端有一个PolyA结构。 15．DNA分子中含有大量的稀有碱基。 16．tRNA分子中含有较多的稀有碱基。
17．mRNA是人体细胞RNA中含量最高的一种，因为它与遗传有关。 18．DNA只存在于细胞(真核与原核)中，病毒体内无DNA。 19．线粒体中也存在一定量的DNA。
20．自然界中只存在右旋的DNA双螺旋。 21．碱基配对发生在嘧啶碱与嘌呤碱之间。
22．DNA双螺旋结构中，由氢键连接的碱基对形成一种近似平面的结构。 23．DNA双螺旋的两条链方向一定是相反的。
24．RNA的分子组成中，通常A不等于U，G不等于C。
25．tRNA二级结构中，所有核苷酸只形成三个环、氨基酸臂、附加环和配对的碱基。
26．DNA—蛋白质在低盐溶液中溶解度较小，而RNA—蛋白质在低盐溶液中溶解度大。所以可利用此差别来分离这两种核
蛋白。
27．在酸性条件下，DNA分子上的嘌呤碱基不稳定，易被水解下来。 28． 核酸的紫外吸收与溶液的pH值无关。
29． 生物体内存在的游离核苷酸多为5'-核苷酸。 30． Z型DNA与B型DNA可以相互转变。
31．mRNA是细胞内种类最多、含量最丰富的RNA。
32. 在所有病毒中，迄今为止还没有发现既含有RNA又含有DNA的病毒。 33．基因表达的最终产物都是蛋白质。
34. 两个核酸样品A和B，如果A的OD260/OD280大于B的OD260/OD280，那么A的纯度大于B的纯度。 35. 限制与修饰现象是宿主的一种保护体系，它是通过对外源DNA的修饰和对自身DNA的限制实现的。 36．能够产生防御病毒侵染的限制性内切核酸酶的细菌，其本身的基因组中没有被该核酸酶识别的序列。
37．限制性图谱与限制性片段长度多态性(RFLP)图谱的最显著的区别在于前者是一个物理图谱而后者是一个连锁图。 38．迄今所发现的限制性内切核酸酶既能作用于双链DNA，又能作用于单链DNA。 39. 甘油会使许多限制内切核酸的特异性发生改变，是导致一些酶的星活性的主要原因之一，防止的办法是在酶切反应体系中，将甘油的浓度控制在5%以下。
40. 同一内切核酸酶切割靶DNA，得到的片段端都是相同的。 41. 所谓引物就是同DNA互补的一小段RNA分子。
42．如果PCR的每一次循环都把上一次循环中合成的DNA加了一倍，那么，10个循环就扩增了1000倍，20个循环就扩增了
100万倍，30个循环就扩增了10亿倍。
43．最有效的制备纯RNA的方法是让其在细胞中超表达，然后提纯。
44．大量制备已被克隆基因编码蛋白产物的常用方法是体外转录和翻译。 45．简并引物是根据已知DNA序列设计的引物群。
46．在DNA贮存液中加一滴三氯甲烷，可防止真菌的污染。
47．密码的偏爱性是指不同种属的生物对简并密码具有不同的使用频率。
48．酚法和碱法分离质粒DNA都要用溶菌酶破壁，但碱法用的溶菌酶的浓度要高。
49．在Northern杂交中，为了防止RNA形成部分环状发夹结构影响迁移率，所以要用变性缓冲液进行电泳。 50．Northern印迹和Southern印迹的基本原理是—样的，都是用于检测结构基因的表达。
（五）问答题
1. (1)T7噬菌体DNA，其双螺旋链的相对分子质量为2.5×107。计算DNA链的长度(设核苷酸对的平均相对分子质量为650)。
(2)相对分子质量为130×106的病毒DNA分子，每微米的质量是多少?
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