粗品效价检测标准操作规程

1、标准：《美国药典》（USPU24）

2、原理：肝素具有良好的抗凝性，与血浆中的凝血酶反应生成抗凝血酶，而达到抗凝作用。 3、仪器：

恒温水浴锅

60孔不锈钢试管架 双通道计时器

0.0001电子分析天平 60毫升白色细口小瓶 100毫升量筒

250毫升三角锥形瓶 50毫升酸式滴定管 5毫升具塞试管 10毫升刻度试管 1毫升刻度吸管 0.2毫升刻度吸管

1毫升微量可调加样器 微型离心机 微型粉碎机

50转/分钟搅拌器 烧杯 4、试剂：

0.9%氯化钠溶液 0.25%氯化钙溶液 标定的绵羊血浆

8U/ML肝素钠标准品 5、实验过程： 5.1、将白色细小口瓶置于天平上，精密称取40-50毫克样品，一般称取45毫克，称取后要对小瓶对应样品批号进行编号。

5.2、用50ml滴定管吸取0.9%NaC1溶液，根据称好样品重量，配成1mg/ml样品溶解液,自然溶解1h或连续震荡0.5h。

5.3、根据肠膜数量，本厂稳定工艺参数和此批货物的重量来估计本批货物的效价。例如：BB030406 净重为6.995kg，其小肠来源数量为9200，现阶段工艺稳定在2400根/亿,那么估算此批成品效价为:9200÷2400÷6.995×100=54.80 此批成品估价为55

5.4、根据估价，用盐水稀释，将样品配成8个单位的供试液。估价为56的样品其稀释盐水体积为：V=(56÷8—1）×0.5=3.0

5.5、用7.2项下的溶液来回冲洗1ml的刻度吸管三次，然后吸取1ml溶解液，准确放入0.5ml于具塞试管中，剩余液体弃之。

5.6、用0.9%的NaC1溶液冲洗10ml的刻度试管后，吸取10mlNaC1溶液，准确放入3.0ml于上述具塞试管中，具塞摇匀，作为供试液。 5.7、按照进厂标定的血浆1/2凝固点,用0.9%的NaC1溶液稀释到所要求的血浆

凝固点。血浆稀释液0.9%（W/V）NaC1溶液体积的计算

血浆实际灵敏度×血浆实际体积

稀释液体积（ml）= _____________________________________ — 实际体积 所需血浆灵敏度 所需要的血浆灵敏度为:145ul

5.8、将保存在-28℃的绵羊血浆取出后，置于37℃的恒温水浴锅中解冻，用脱脂棉过滤，将过滤后的血浆用100ml的量筒计量血浆体积，再按计算公式算出稀释液的体积，加入稀释液后充分混匀，注意不要产生气泡备用。

5.9、用0.2ml的刻度吸管取8.0u/ml肝素标准溶液,加标准之前,用标准冲洗吸管三次,然后再每支分别按120ul、130ul、140ul、150ul、160ul、170ul的量加入一排5ml的具塞试管中，作为标准溶液的浓度梯度，共作两排。

5.10、用同一支试管吸取7.6项下的供试液，取之前先用供试液将刻度吸管冲洗三次，然后按120ul、130ul、140ul、150ul、160ul、170ul的量加入到另一排5ml的具塞试管中，作为供试液的浓度梯度，注意加样时要非常精确。

5.11、用10ml刻度吸管依次向加有样品的试管中准确加入1ml的绵羊血浆，加入前要用血浆来回冲洗试管三次，以保证血浆浓度的均一性加入顺序由170 — 120ul方向进行 5.12、用1ml微量可调加样器向加有样品的试管中精确加入0.8ml的0.25êCl2溶液,加入顺序为从样品量多的-------少的方向进行,加完后具塞立刻摇匀,摇时从样品量少的------多的方向进行,注意摇动时不要有气泡产生同时要让试管内壁全部浸润。

5.13、将试管置于37±℃的水浴锅中开始计时。 5.14、试管在37±℃水浴锅中保温60±1min后取出，观察各管中血浆的凝固状态判定结果：

5.14.1、标准品的半凝点：S1/2 (50%凝固点) 5.14.2、供试品的半凝点：T1/2 (50%凝固点)

5.14.3、供试品的凝固状态：1 100%的凝固，3/4 75%的凝固 1/4 25%的凝固， 0 不凝固

5.14.4、根据标准品的S1/2 凝固点确定供试品1—0的凝固范围，再将其分成5个点

即：1、3/4、1/2、1/4、0，观察凝固状态在哪一个点上，当其凝固点在3/4

点上，就在该点的样品体积上加3.3即得供试品的T1/2 凝固点；如果其凝固

在1/4点上，就在该点的样品体积上减3.3即得供试品的T1/2 凝固点。

5.15、根据判断结果计算： S1/2

P供 = ______________ ×P估 T1/2

5.16、以上所有操作都必须有完整的实验原始记录。